梔翘生肌软膏毒理学实验研究

张 静 黄丽华 耿秀兰

济南市卫生科技交流服务中心，山东济南 250013

随着人们保健养生意识的增强，对药品的毒副作用关注度提高，为使患者放心用药，就要有真实的科学依据。梔翘生肌软膏是以梔子[1]、连翘、大黄[2]、蜂蜡等制成的治疗烧、烫伤及痔疮的外用软膏制剂，为确保临床用药安全，我们对其进行了多项毒理实验，研究起止时间1991—2013年，现将实验结果报道如下。

1 实验材料

1.1 材料来源

梔翘生肌软膏由本中心中试基地提供，2，4—二硝基氯代苯由山东省药检所提供。

1.2 动物来源

实验动物由山东医科大学动物室提供，家兔为中国本兔（白色，红眼）年龄130 d左右；豚鼠为非纯种短毛三色豚鼠，年龄3个月左右；小鼠为昆明小白鼠，年龄60～70 d。健康状况良好，购进后常规饲养一周进行实验。

1.3 分组依据

实验方法及分组是根据新药审批办法皮肤用药毒理研究的技术要求进行的，[3]动物脱毛用氯化钡、氧化锌法。

1.4 统计学分析

实验数据用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析，方法用均数显著性检验（t检验）[4]，结果用P值表示，P﹥0.05为无显著性差异；P﹤0.05为显著性差异；P﹤0.01为非常显著性差异。

2 实验方法

2.1 皮肤急性毒性试验方法

家兔8只，雌雄各半，体重1.5～2.5 kg。实验分完整皮肤与破损皮肤组，每组4只兔。8只家兔背部脱毛﹙150 cm2﹚，其中4只脱毛区用刀片致损，24 h后将梔翘生肌软膏均匀涂于脱毛区，每3 h涂一次﹙即每只兔涂药20 g左右，相当于人体用药有效剂量的20倍以上﹚，24 h后去掉残留受试物，连续14 d观察家兔的中毒表现。

2.2 皮肤长期毒性试验方法

家兔 12只，雌雄各半，体重 1.5～2.5 kg，实验分对照组﹙NS﹚和实验组﹙梔翘生肌软膏﹚每组6只兔。家兔背部脱毛﹙150 cm2﹚，24 h后按分组涂药，4次/d，5 g/次﹙为有效剂量的20倍以上﹚，连续用药45 d，最后一次给药24 h后取心血做血液学检验，生化检验。另每组随机取2只兔进行系统尸解，取心、肝、脾、肾、皮肤﹙用药部位﹚进行病理学检查。余者继续观察3周，再行检查。

2.3 皮肤刺激试验方法

豚鼠5只，雄性3只，雌性2只，体重250～350 g，实验分对照组﹙不涂药﹚，完整皮肤和破损皮肤组﹙梔翘生肌软膏﹚。豚鼠背部脱毛三个区﹙20 cm2﹚定为 1、2、3 区，将第 3 区用刀片致损，24 h后按分组将药物均匀的涂于脱毛区，2次/d，1 g/次，连续用药7 d，最后一次给药24 h后用温水清洗残留物，1、24、48、72 h观察涂药部位有无红斑和水肿。

2.4 皮肤过敏试验方法

豚鼠 18只，雌雄各半，体重250～350g，实验分空白对照组﹙基质﹚，阳性对照组﹙2,4—二硝基氯代苯，致敏浓度为1℅，激发浓度为0.1%﹚和实验组﹙梔翘生肌软膏﹚。每组6只豚鼠，豚鼠背部两侧脱毛，24 h后按分组将药物0.2 g涂在豚鼠左侧脱毛区致敏，3 h后重复涂药一次，以保证药物接触6 h，第7天和第14天重复涂药致敏，于末次给药14 d再按分组将药物涂于豚鼠右侧脱毛区激发，6 h后去掉受试物，观察红斑和水肿情况，连续观察3 d，按皮肤过敏反应标准进行评分。

2.5 小鼠骨髓嗜多染红细胞﹙PCE﹚微核试验方法

小鼠24只，雌雄各半，体重25～30 g，实验分阴性对照组﹙NS﹚，阳性对照组﹙环磷酰胺[CP]，22 mg/kg，一次给药﹚和实验组﹙基质组、梔翘生肌软膏组，均为4次/d连续5 d给药﹚每组6只小鼠，方法参照文献[5]。实验鼠全部背部脱毛,24 h后按分组给药，最末一次给药24 h后颈椎脱臼处死，取双后股骨，小牛血清冲洗骨髓制成细胞悬液，推片，甲醇固定，Giemsa染色，计数1000个PCE的微核细胞数，计算微核细胞率，并计算PCE/RBC比值。

3 实验结果

3.1 皮肤急性毒性试验结果

两组家兔均食欲正常，精神状况良好，毛发光滑，用药局部未见红、肿及其它不良反应。表明家兔皮肤短期内接触梔翘生肌软膏未产生毒性反应。

3.2 皮肤长期毒性试验结果

①一般观察。试验期间两组家兔精神、体征良好，食欲活动正常，无死亡，亦未见任何不良反应。

②血液学检查、生化检验均未见异常。

③系统尸解及各脏器病理组织学未见异常。

④恢复性观察未见延迟性毒性反应，参照人及家兔的检测指标正常值[6]，以上试组结果均在正常范围内，两组比较均无显著意义﹙P﹥0.05﹚，表明家兔长期用梔翘生肌软膏不产生毒性反应。

3.3 皮肤刺激试验结果

根据皮肤刺激强度评价标准，刺激反应分值﹤0.5即为无刺激性，实验结果显示各组分值均﹤0.5，表明梔翘生肌软膏对豚鼠完整与破损皮肤均无刺激性。

3.4 皮肤过敏试验结果

实验结果显示阳性对照组红斑和水肿都非常明显﹙红斑3.83分，水肿2.33分﹚，而空白和实验组则皮肤光滑、无红斑、无水肿﹙均为0分﹚，不显示任何过敏反应。

3.5 小鼠骨髓嗜多染红细胞﹙PCE﹚微核试验结果

实验结果显示阴性对照组微核率为(2.33±1.03)‰与日前文献报导5‰以下相符，阳性对照CP诱导小鼠骨髓PCE微核率为（22.16±2.92）‰与阴性对照组比较有显著意义﹙P﹤0.01﹚，而实验组尽管用药剂量为人体有效剂量的100倍以上与阴性对照组比较仍无显著意义﹙P﹥0.05﹚。表明梔翘生肌软膏对小鼠无诱变作用。且各组PCE∕RBC比值均大于0.1，说明骨髓增生不受抑制。

4 讨论

中药的有毒、无毒是中药药性理论的重要组成部分。但长期以来，古今医家对同一味中药毒性大小载述不一，给临床用药带来混乱，究其原因，显然是中药毒性确定无客观标准，也反应中药毒性的确定因素是复杂的。如配伍是否合理、剂量是否适当、炮制是否得法、剂型是否适宜，这些均能影响药物的毒性。另外中药的产地、用药部位、采收时间、储存条件等对中药的毒性也有一定影响。为确保临床用药安全，我们对梔翘生肌软膏进行了急毒、长毒、刺激、过敏和诱变实验研究，实验结果显示梔翘生肌软膏对实验动物皮肤无刺激、不致敏、无吸收中毒，亦无潜在的诱变作用，表明临床应用安全可靠，为临床用药提供了科学依据。

[1]贾玉杰.梔子对大鼠出血坏死性胰腺炎早期内脏血流的影响[J].中国中药杂志，1993，18（7）：431.

[2]刘兴祥.大黄的药理作用及临床应用[J].中国中西医结合杂志，1992，2（9）：571.

[3]中华人民共和国卫生部新药审批办法[S].1992：35.

[4]施新猷.医学动物实验方法[M].北京：人民卫生出版社，1983：357.

[5]黄幸纾.环境化学物致突变致畸致癌试验方法[M].浙江：浙江科技出版社，1985：220.

[6]施新猷.医学动物实验方法[M].北京：人民卫生出版社，1983：442.