茯苓菌核不同药用部位有效成分含量
2014-08-12徐雷张群刘常丽等
徐雷+张群+刘常丽+等
摘要：采用苯酚-浓硫酸比色法测定茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]菌核不同药用部位茯苓多糖、三萜类成分含量，结果显示，白茯苓、茯苓皮中多糖含量分别为72.77%、63.45%，三萜类成分含量分别为0.173%、0.419%，茯苓皮中多糖含量略逊于白茯苓，三萜类成分含量是白茯苓的2倍多。
关键词：茯苓皮；白茯苓；多糖；三萜
中图分类号： TQ464；R284.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0289-02
收稿日期：2013-09-24
基金项目：国家科技重大专项子课题（编号：2012ZX09304006）；湖北中医药大学2013年科研课题青年项目。
作者简介：徐雷（1982—），男，博士研究生，讲师，从事中药资源及其品质研究。E-mail：wuhanxulei@163.com。
通信作者：陈科力，教授，从事中药资源及其品质研究。E-mail：kelichen@126.com。茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]为担子菌亚门（Basidiomycotina）层菌纲（Hymenomycetes）非褶菌目（Aphyllophoracws）多孔菌科（Poliporaleae）真菌，其菌核具有利水渗湿、健脾、宁心的功效，是传统的大宗中药材。中医临床常用方剂中茯苓配伍率高达70%以上，以茯苓为原料的中成药约300余种[1]。茯苓菌核经过发汗处理后，削下的外皮即为“茯苓皮”，内部白色部分切成茯苓块或茯苓片，即为“白茯苓”。茯苓菌核的化学成分包括多糖类、三萜类、甾体类、蛋白质等，以三萜类、多糖类化合物为主要成分，因此可将多糖、三萜类化合物作为茯苓药材的有效成分含量测定指标，以衡量茯苓药材的质量[2]。当前茯苓临床用药以茯苓块或茯苓片为主，无人收购茯苓皮，或者茯苓皮收购价格远低于白茯苓，造成资源浪费。本研究对茯苓皮及白茯苓中的多糖、三萜类化学成分进行分析，旨在为茯苓皮资源开发提供依据。
1材料与方法
1.1材料
茯苓菌核采自湖北省黄冈市罗田县九资河镇。
1.2仪器
SK2200H型分光光度计、WG-136型电热鼓风干燥箱、DK-98-1型电热恒温水浴锅、电子分析天平等。所用试剂均为分析纯，对照品购自中国药品生物制品检定所。
1.3方法
1.3.1对照品溶液的制备称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL容量瓶中，溶解并定容，摇匀。精密吸取5 mL溶液，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得100 μg/mL对照品溶液。
1.3.2标准曲线的制备吸取对照品溶液0、0.1、0.2、04、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞试管中，各加水至1.0 mL，加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，再加入浓硫酸5 mL，摇匀，100 ℃ 水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，在490 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，糖含量为横坐标，回归方程为y=0.008 4x-0.000 9，r=0.999 5，线性范围为10～100 μg。
1.3.3精密度测定分别吸取对照品溶液0.4 mL，按“1.3.2”所述步骤，测定6次吸光度，RSD值为0.56%，表明仪器精密度良好。
1.3.4重复性考察分别吸取供试品溶液0.2 mL，按“1.3.2”节所述步骤，测定6次吸光度，RSD值为2.8%，表明重现性良好。
2结果与分析
2.1加样回收率测定
称取5份茯苓粉末1.0 g，制成供试品溶液，分别吸取 0.1 mL 溶液，加入0.3 mL葡萄糖对照品溶液，按“1.3.2”所述步骤，测定吸光度，根据回归方程计算糖含量，平均回收率为109.75%。
2.2三萜类成分含量测定
2.2.1对照品溶液制备称取齐墩果酸对照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解，定容，摇匀，吸取10 mL置于100 mL容量瓶中，定容即得20 μg/mL对照品溶液。
2.2.2标准曲线的制备吸取上述对照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分别置于具塞试管中，水浴挥去溶剂，冷却，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液及1.0 mL高氯酸溶液，混匀，70 ℃恒温水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，加5 mL无水乙醇，摇匀，在560 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，三萜类含量为横坐标制作标准曲线，回归方程为y=0.011 4x-0.006 7，r=0.999 9。
2.2.3精密度考察吸取对照品溶液2 mL，按“2.2.2”所述步骤，测定6 次吸光度，RSD值为0.58%，表明仪器精密度良好。
2.2.4重复性试验吸取供试品溶液2 mL，按“2.2.2” 所述步骤，测定6 次吸光度，RSD值为2.2%，表明重现性良好。
2.2.5加样回收率测定称取5份茯苓粉末600 mg，制成供试品溶液，吸取1.5 mL溶液，分别加入对照品1.0 mL，按“2.2.2” 所述步骤，测定吸光度，根据回归方程计算糖含量，平均回收率为100.12。
2.3供试品溶液的制备和成分测定
称取过60目筛的茯苓皮、白茯苓粉末各1.0 g置于具塞三角瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50mL，80 ℃水中超声提取50 min，过滤，吸取续滤液1 mL置于50 mL容量瓶中，加水定容，得茯苓多糖供试品溶液[3]。称取过40目筛的茯苓皮、白茯苓粉末各600 mg，置于50 mL烧杯中，加无水乙醇 30 mL，超声波提取30 min，2 000 r/min离心5 min，取上清液置于 50 mL 容量瓶中，再用无水乙醇定容，即得茯苓三萜类成分供试品溶液。由表3、表4可知，白茯苓、茯苓皮多糖含量分别为72.77%、63.45%，三萜类成分含量分别为0173%、0419%。
3结论
茯苓多糖具有保肝、降谷丙转氨酶、增强免疫、镇静、抗衰老、降血糖、抗肿瘤等药理作用，三萜类化合物具有利尿、抗溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低胆固醇、杀软体动物、抗生育等药理作用[4]。本研究表明，茯苓皮中多糖含量虽然低于白茯苓，但也高达63.45%，茯苓皮中总三萜类成分含量是白茯苓的2倍多。当前应加紧制定白茯苓、茯苓皮饮片质量标准，临床用药过程中应根据病情有针对性的选用茯苓皮，以促进茯苓皮资源合理开发。
参考文献：
[1]徐雷，陈科力，苏玮. 九资河茯苓栽培关键技术及发展演变[J]. 中国中医药信息杂志，2011，18（6）：106-108.
[2]沈玉萍，李军，贾晓斌. 中药茯苓化学成分的研究进展[J]. 南京中医药大学学报，2012，28（3）：297-300.
[3]胡明华，梁永威，彭川丛. 不同产地不同规格的茯苓水溶性多糖含量比较[J]. 中国药业，2012，21（7）：10-12.
[4]冯亚龙，赵英永，丁凡，等. 茯苓皮的化学成分及药理研究进展（Ⅰ）[J]. 中国中药杂志，2013，38（7）：1098-1102.李楠，许文凤，叶振南，等. 9种植物粗提总黄酮的体外降脂及抑制非酶糖基化的活性[J]. 江苏农业科学，2014，42（6）：291-293.endprint
摘要：采用苯酚-浓硫酸比色法测定茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]菌核不同药用部位茯苓多糖、三萜类成分含量，结果显示，白茯苓、茯苓皮中多糖含量分别为72.77%、63.45%，三萜类成分含量分别为0.173%、0.419%，茯苓皮中多糖含量略逊于白茯苓，三萜类成分含量是白茯苓的2倍多。
关键词：茯苓皮；白茯苓；多糖；三萜
中图分类号： TQ464；R284.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0289-02
收稿日期：2013-09-24
基金项目：国家科技重大专项子课题（编号：2012ZX09304006）；湖北中医药大学2013年科研课题青年项目。
作者简介：徐雷（1982—），男，博士研究生，讲师，从事中药资源及其品质研究。E-mail：wuhanxulei@163.com。
通信作者：陈科力，教授，从事中药资源及其品质研究。E-mail：kelichen@126.com。茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]为担子菌亚门（Basidiomycotina）层菌纲（Hymenomycetes）非褶菌目（Aphyllophoracws）多孔菌科（Poliporaleae）真菌，其菌核具有利水渗湿、健脾、宁心的功效，是传统的大宗中药材。中医临床常用方剂中茯苓配伍率高达70%以上，以茯苓为原料的中成药约300余种[1]。茯苓菌核经过发汗处理后，削下的外皮即为“茯苓皮”，内部白色部分切成茯苓块或茯苓片，即为“白茯苓”。茯苓菌核的化学成分包括多糖类、三萜类、甾体类、蛋白质等，以三萜类、多糖类化合物为主要成分，因此可将多糖、三萜类化合物作为茯苓药材的有效成分含量测定指标，以衡量茯苓药材的质量[2]。当前茯苓临床用药以茯苓块或茯苓片为主，无人收购茯苓皮，或者茯苓皮收购价格远低于白茯苓，造成资源浪费。本研究对茯苓皮及白茯苓中的多糖、三萜类化学成分进行分析，旨在为茯苓皮资源开发提供依据。
1材料与方法
1.1材料
茯苓菌核采自湖北省黄冈市罗田县九资河镇。
1.2仪器
SK2200H型分光光度计、WG-136型电热鼓风干燥箱、DK-98-1型电热恒温水浴锅、电子分析天平等。所用试剂均为分析纯，对照品购自中国药品生物制品检定所。
1.3方法
1.3.1对照品溶液的制备称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL容量瓶中，溶解并定容，摇匀。精密吸取5 mL溶液，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得100 μg/mL对照品溶液。
1.3.2标准曲线的制备吸取对照品溶液0、0.1、0.2、04、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞试管中，各加水至1.0 mL，加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，再加入浓硫酸5 mL，摇匀，100 ℃ 水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，在490 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，糖含量为横坐标，回归方程为y=0.008 4x-0.000 9，r=0.999 5，线性范围为10～100 μg。
1.3.3精密度测定分别吸取对照品溶液0.4 mL，按“1.3.2”所述步骤，测定6次吸光度，RSD值为0.56%，表明仪器精密度良好。
1.3.4重复性考察分别吸取供试品溶液0.2 mL，按“1.3.2”节所述步骤，测定6次吸光度，RSD值为2.8%，表明重现性良好。
2结果与分析
2.1加样回收率测定
称取5份茯苓粉末1.0 g，制成供试品溶液，分别吸取 0.1 mL 溶液，加入0.3 mL葡萄糖对照品溶液，按“1.3.2”所述步骤，测定吸光度，根据回归方程计算糖含量，平均回收率为109.75%。
2.2三萜类成分含量测定
2.2.1对照品溶液制备称取齐墩果酸对照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解，定容，摇匀，吸取10 mL置于100 mL容量瓶中，定容即得20 μg/mL对照品溶液。
2.2.2标准曲线的制备吸取上述对照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分别置于具塞试管中，水浴挥去溶剂，冷却，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液及1.0 mL高氯酸溶液，混匀，70 ℃恒温水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，加5 mL无水乙醇，摇匀，在560 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，三萜类含量为横坐标制作标准曲线，回归方程为y=0.011 4x-0.006 7，r=0.999 9。
2.2.3精密度考察吸取对照品溶液2 mL，按“2.2.2”所述步骤，测定6 次吸光度，RSD值为0.58%，表明仪器精密度良好。
2.2.4重复性试验吸取供试品溶液2 mL，按“2.2.2” 所述步骤，测定6 次吸光度，RSD值为2.2%，表明重现性良好。
2.2.5加样回收率测定称取5份茯苓粉末600 mg，制成供试品溶液，吸取1.5 mL溶液，分别加入对照品1.0 mL，按“2.2.2” 所述步骤，测定吸光度，根据回归方程计算糖含量，平均回收率为100.12。
2.3供试品溶液的制备和成分测定
称取过60目筛的茯苓皮、白茯苓粉末各1.0 g置于具塞三角瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50mL，80 ℃水中超声提取50 min，过滤，吸取续滤液1 mL置于50 mL容量瓶中，加水定容，得茯苓多糖供试品溶液[3]。称取过40目筛的茯苓皮、白茯苓粉末各600 mg，置于50 mL烧杯中，加无水乙醇 30 mL，超声波提取30 min，2 000 r/min离心5 min，取上清液置于 50 mL 容量瓶中，再用无水乙醇定容，即得茯苓三萜类成分供试品溶液。由表3、表4可知，白茯苓、茯苓皮多糖含量分别为72.77%、63.45%，三萜类成分含量分别为0173%、0419%。
3结论
茯苓多糖具有保肝、降谷丙转氨酶、增强免疫、镇静、抗衰老、降血糖、抗肿瘤等药理作用，三萜类化合物具有利尿、抗溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低胆固醇、杀软体动物、抗生育等药理作用[4]。本研究表明，茯苓皮中多糖含量虽然低于白茯苓，但也高达63.45%，茯苓皮中总三萜类成分含量是白茯苓的2倍多。当前应加紧制定白茯苓、茯苓皮饮片质量标准，临床用药过程中应根据病情有针对性的选用茯苓皮，以促进茯苓皮资源合理开发。
参考文献：
[1]徐雷，陈科力，苏玮. 九资河茯苓栽培关键技术及发展演变[J]. 中国中医药信息杂志，2011，18（6）：106-108.
[2]沈玉萍，李军，贾晓斌. 中药茯苓化学成分的研究进展[J]. 南京中医药大学学报，2012，28（3）：297-300.
[3]胡明华，梁永威，彭川丛. 不同产地不同规格的茯苓水溶性多糖含量比较[J]. 中国药业，2012，21（7）：10-12.
[4]冯亚龙，赵英永，丁凡，等. 茯苓皮的化学成分及药理研究进展（Ⅰ）[J]. 中国中药杂志，2013，38（7）：1098-1102.李楠，许文凤，叶振南，等. 9种植物粗提总黄酮的体外降脂及抑制非酶糖基化的活性[J]. 江苏农业科学，2014，42（6）：291-293.endprint
摘要：采用苯酚-浓硫酸比色法测定茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]菌核不同药用部位茯苓多糖、三萜类成分含量，结果显示，白茯苓、茯苓皮中多糖含量分别为72.77%、63.45%，三萜类成分含量分别为0.173%、0.419%，茯苓皮中多糖含量略逊于白茯苓，三萜类成分含量是白茯苓的2倍多。
关键词：茯苓皮；白茯苓；多糖；三萜
中图分类号： TQ464；R284.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0289-02
收稿日期：2013-09-24
基金项目：国家科技重大专项子课题（编号：2012ZX09304006）；湖北中医药大学2013年科研课题青年项目。
作者简介：徐雷（1982—），男，博士研究生，讲师，从事中药资源及其品质研究。E-mail：wuhanxulei@163.com。
通信作者：陈科力，教授，从事中药资源及其品质研究。E-mail：kelichen@126.com。茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]为担子菌亚门（Basidiomycotina）层菌纲（Hymenomycetes）非褶菌目（Aphyllophoracws）多孔菌科（Poliporaleae）真菌，其菌核具有利水渗湿、健脾、宁心的功效，是传统的大宗中药材。中医临床常用方剂中茯苓配伍率高达70%以上，以茯苓为原料的中成药约300余种[1]。茯苓菌核经过发汗处理后，削下的外皮即为“茯苓皮”，内部白色部分切成茯苓块或茯苓片，即为“白茯苓”。茯苓菌核的化学成分包括多糖类、三萜类、甾体类、蛋白质等，以三萜类、多糖类化合物为主要成分，因此可将多糖、三萜类化合物作为茯苓药材的有效成分含量测定指标，以衡量茯苓药材的质量[2]。当前茯苓临床用药以茯苓块或茯苓片为主，无人收购茯苓皮，或者茯苓皮收购价格远低于白茯苓，造成资源浪费。本研究对茯苓皮及白茯苓中的多糖、三萜类化学成分进行分析，旨在为茯苓皮资源开发提供依据。
1材料与方法
1.1材料
茯苓菌核采自湖北省黄冈市罗田县九资河镇。
1.2仪器
SK2200H型分光光度计、WG-136型电热鼓风干燥箱、DK-98-1型电热恒温水浴锅、电子分析天平等。所用试剂均为分析纯，对照品购自中国药品生物制品检定所。
1.3方法
1.3.1对照品溶液的制备称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL容量瓶中，溶解并定容，摇匀。精密吸取5 mL溶液，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得100 μg/mL对照品溶液。
1.3.2标准曲线的制备吸取对照品溶液0、0.1、0.2、04、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞试管中，各加水至1.0 mL，加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，再加入浓硫酸5 mL，摇匀，100 ℃ 水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，在490 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，糖含量为横坐标，回归方程为y=0.008 4x-0.000 9，r=0.999 5，线性范围为10～100 μg。
1.3.3精密度测定分别吸取对照品溶液0.4 mL，按“1.3.2”所述步骤，测定6次吸光度，RSD值为0.56%，表明仪器精密度良好。
1.3.4重复性考察分别吸取供试品溶液0.2 mL，按“1.3.2”节所述步骤，测定6次吸光度，RSD值为2.8%，表明重现性良好。
2结果与分析
2.1加样回收率测定
称取5份茯苓粉末1.0 g，制成供试品溶液，分别吸取 0.1 mL 溶液，加入0.3 mL葡萄糖对照品溶液，按“1.3.2”所述步骤，测定吸光度，根据回归方程计算糖含量，平均回收率为109.75%。
2.2三萜类成分含量测定
2.2.1对照品溶液制备称取齐墩果酸对照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解，定容，摇匀，吸取10 mL置于100 mL容量瓶中，定容即得20 μg/mL对照品溶液。
2.2.2标准曲线的制备吸取上述对照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分别置于具塞试管中，水浴挥去溶剂，冷却，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液及1.0 mL高氯酸溶液，混匀，70 ℃恒温水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，加5 mL无水乙醇，摇匀，在560 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，三萜类含量为横坐标制作标准曲线，回归方程为y=0.011 4x-0.006 7，r=0.999 9。
2.2.3精密度考察吸取对照品溶液2 mL，按“2.2.2”所述步骤，测定6 次吸光度，RSD值为0.58%，表明仪器精密度良好。
2.2.4重复性试验吸取供试品溶液2 mL，按“2.2.2” 所述步骤，测定6 次吸光度，RSD值为2.2%，表明重现性良好。
2.2.5加样回收率测定称取5份茯苓粉末600 mg，制成供试品溶液，吸取1.5 mL溶液，分别加入对照品1.0 mL，按“2.2.2” 所述步骤，测定吸光度，根据回归方程计算糖含量，平均回收率为100.12。
2.3供试品溶液的制备和成分测定
称取过60目筛的茯苓皮、白茯苓粉末各1.0 g置于具塞三角瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50mL，80 ℃水中超声提取50 min，过滤，吸取续滤液1 mL置于50 mL容量瓶中，加水定容，得茯苓多糖供试品溶液[3]。称取过40目筛的茯苓皮、白茯苓粉末各600 mg，置于50 mL烧杯中，加无水乙醇 30 mL，超声波提取30 min，2 000 r/min离心5 min，取上清液置于 50 mL 容量瓶中，再用无水乙醇定容，即得茯苓三萜类成分供试品溶液。由表3、表4可知，白茯苓、茯苓皮多糖含量分别为72.77%、63.45%，三萜类成分含量分别为0173%、0419%。
3结论
茯苓多糖具有保肝、降谷丙转氨酶、增强免疫、镇静、抗衰老、降血糖、抗肿瘤等药理作用，三萜类化合物具有利尿、抗溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低胆固醇、杀软体动物、抗生育等药理作用[4]。本研究表明，茯苓皮中多糖含量虽然低于白茯苓，但也高达63.45%，茯苓皮中总三萜类成分含量是白茯苓的2倍多。当前应加紧制定白茯苓、茯苓皮饮片质量标准，临床用药过程中应根据病情有针对性的选用茯苓皮，以促进茯苓皮资源合理开发。
参考文献：
[1]徐雷，陈科力，苏玮. 九资河茯苓栽培关键技术及发展演变[J]. 中国中医药信息杂志，2011，18（6）：106-108.
[2]沈玉萍，李军，贾晓斌. 中药茯苓化学成分的研究进展[J]. 南京中医药大学学报，2012，28（3）：297-300.
[3]胡明华，梁永威，彭川丛. 不同产地不同规格的茯苓水溶性多糖含量比较[J]. 中国药业，2012，21（7）：10-12.
[4]冯亚龙，赵英永，丁凡，等. 茯苓皮的化学成分及药理研究进展（Ⅰ）[J]. 中国中药杂志，2013，38（7）：1098-1102.李楠，许文凤，叶振南，等. 9种植物粗提总黄酮的体外降脂及抑制非酶糖基化的活性[J]. 江苏农业科学，2014，42（6）：291-293.endprint
