IL-17、COX-2在口腔扁平苔藓和口腔鳞癌中的表达分析

陈启林,胡孝丽,徐琼莉,严 艳

(湖北医药学院附属太和医院,湖北 十堰 442000)

IL-17、COX-2在口腔扁平苔藓和口腔鳞癌中的表达分析

陈启林,胡孝丽,徐琼莉,严 艳

(湖北医药学院附属太和医院,湖北 十堰 442000)

目的 研究白细胞介素-17(IL-17)与环氧化酶-2(COX-2)在口腔扁平苔藓、口腔鳞状细胞癌中的表达情况，分析两者的关系和临床意义。方法 取20例口腔扁平苔藓及20例口腔鳞状细胞癌组织标本为研究对象，并选取20例正常口腔黏膜标本作为对照，采用免疫组化法检测IL-17、CXO-2的表达情况，分析IL-17、CXO-2的表达水平与口腔黏膜病变的关系。结果 ①对照组中6例(30%)IL-17呈阴性表达，14例(70%)呈不同程度的阳性表达；扁平苔藓组1例(5%)IL-17阴性表达，19例(95%)阳性表达；鳞癌组中均有阳性表达。经比较发现，IL-17在扁平苔藓组与鳞癌组阳性表达率均显著高于对照组(P均<0.05)，但扁平苔藓组与鳞癌组IL-17阳性率比较无显著性差异(P>0.05)。②对照组中未见CXO-2阳性表达，扁平苔藓组10例(50%)阳性表达，鳞癌组16例(80%)阳性表达。经比较发现，CXO-2在扁平苔藓组与鳞癌组阳性表达率均显著高于对照组(P均<0.05)，且鳞癌组显著高于扁平苔藓组(P<0.05)。结论 IL-17与CXO-2在口腔扁平苔藓以及鳞癌组织均高度表达，可能通过改变局部微环境而影响癌前病变及恶性肿瘤的进展。

白细胞介素17；环氧化酶-2；口腔扁平苔藓；口腔鳞癌

口腔癌是我国常见的恶性肿瘤之一，发病率较高[1]，近年来在东亚国家及地区均有上升趋势。口腔癌容易复发，复发率为20%～48%，5 a生存率约为60%，且部分患者发病年龄较低，有年轻化趋势。近年来研究发现炎性因子可通过改变局部微环境而影响肿瘤的发生、发展过程，而环氧化酶-2(COX-2)与细胞凋亡、肿瘤发生等密切相关[2]。本研究通过观察白介素-17(IL-17)与COX-2在口腔扁平苔藓，口腔鳞状细胞癌中的表达况，分析两者的关系和临床意义。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2009年1月—2012年1月我院初诊的20例口腔扁平苔藓和20例口腔鳞癌患者的病理组织为研究对象，分别纳入扁平苔藓组和鳞癌组。病理组织均取自手术切除并经石包处理，术前未进行免疫、激素、放疗、化疗等相关治疗，患者本身未合并其他自身免疫性疾病。选取20例正常口腔黏膜组织作为对照组，均取自口腔外伤患者，排除口腔黏膜疾病或全身免疫系统疾病，镜下组织表现为复层鳞状上皮，包括基底层、细胞层、颗粒层、角化层。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 超净工作台，微型常温离心机，超纯水及除菌系统，电冰箱，OLYMPUS光学显微镜及数码成像系统等；抗IL-17单克隆抗体购自北京博奥森生物有限公司；抗COX-2多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；SP免疫组化试剂盒以及DAB显色试剂盒购自北京中山生物有限公司。

1.2.2 试验步骤 切片机连续切片，厚度取4 pm,并置于经多聚赖氨酸处理的载玻片上。常规脱蜡水洗后置于3%双氧水中约10 min，灭活内源性过氧化物酶。室温下采用柠檬酸缓冲液，微波加热修复抗原，并以正常羊血清封闭20 min，蒸馏水冲洗后将载玻片上的水渍擦干，滴加一抗，37 ℃孵育1h，滴加山羊抗小鼠IgG，37 ℃静置30 min，然后滴加SP复合物，静置30 min，DAB浓缩试剂盒显示，显微镜下控制显示时间，冲洗后苏木精复染，然后脱水、透明、封片。所有试验步骤及操作严格按试剂盒说明进行，设立阴性对照并将PBS代替一抗重复操作。

1.3 方法和评价标准 所有切片在镜下随机选取5个以上高倍视野(×400)观察，浅黄色—棕褐色细胞粒状为阳性表现，观察COX-2、IL-17在正常口腔黏膜细胞、扁平苔藓组织以及鳞癌组织中的阳性表达情况，并计算阳性细胞百分比。按阳性细胞所占的百分比进行分级，阳性细胞表达率低于10%为阴性(-)，10%～20%为弱阳性(+)，>20%～50%为阳性()，>50%为阳性()。

1.4 统计学方法 实验数据均由SPSS 13.0软件进行统计学分析。计数资料以率表示，采用2检验。双侧检验。检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 3组IL-17表达情况比较 对照组中6例(30%)TL-17呈阴性表达，16例(70%)呈不同程度的阳性表达，主要位于胞浆，分布于颗粒层、角化层、部分棘细胞层，间质细胞中可见少量阳性表达；扁平苔藓组中1例(5%)为阴性表达，19例(95%)呈阳性表达，主要在固有层浅层上皮细胞内表达。鳞癌组中均有阳性表达，肿瘤细胞及周围间质细胞均可见阳性表达。经比较发现，IL-17在扁平苔藓组与鳞癌组阳性表达率均显著高于对照组(P均<0.05),但扁平苔藓组与鳞癌组IL-17阳性率无显著差异(P>0.05)。见表1。

2.2 3组COX-2表达强度情况比较 对照中未见COX-2阳性表达，扁平苔藓组中10例(50%)阳性表达，以细胞质或核膜为主，多见于上皮棘细胞层、颗粒层以及角化层、基底细胞未见阳性表达；在鳞癌组中16例(80%)阳性表达，鳞状癌细胞中呈强阳性表达。经比较发现，COX-2在扁平苔藓组与鳞癌组阳性表达率均显著高于对照组(P<0.05),且鳞癌组显著高于扁平苔藓组(P<0.05)。见表2。

表1 3组IL-17表达强度比较 例

表2 3组COX-2表达强度比较 例

3 讨 论

口腔扁平苔藓是口腔黏膜的慢性非感染性炎疾病，Th1/Th2失衡等免疫因素在疾病的发生、发展中具有重要作用。因口腔扁平苔藓有癌变潜能，故WHO将其列入潜在恶性病范畴。口腔扁平苔藓病损区以T淋巴细胞聚集为主，包括辅助性和抑制性T细胞，而B细胞、自然杀伤细胞却相对少见。活化的T淋巴细胞可产生多种炎性因子来调控，促进免疫反应过程，引起大量活化的T淋巴细胞在局部组织浸润[3]。部分T淋巴细胞可分泌IL-17(Th 17亚群)，并可促炎症反应，调节免疫应答，促炎细胞因子分泌，在自身免疫疾病中具重要作用[4]。

口腔扁平苔藓具有慢性持续性，免疫抑制功能降低，病变区可见毒性T细胞克隆等自身免疫性疾病的特征。目前在实体瘤与周围间质关系的研究中发现，慢性炎症过程中细胞因子的变化可影响局部微环境，进而改变正常细胞质的存活、增殖、分化周期，是肿瘤起始、进展并具有侵袭性和转移能力的关键因素之一[5]。在胃癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、肝癌、肠癌、乳腺癌恶性肿瘤中均可发现Th17细胞及IL-17；进一步研究局部微环境，发现恶性肿瘤细胞可分泌MCP-1、促炎因子等促进Th17细胞分化并维持其生长过程[6]。本次研究发现约30%正常口腔黏膜组织不表达IL-17，70%阳性表达以胞浆多见，包括颗粒层、角化层、部分棘细胞层以及间质细胞。95%扁平苔藓组织IL-17呈阳性表达，多见于固有层浅层上皮细胞，而鳞癌组织中均有阳性表达，肿瘤细胞及周围间质细胞均可阳性表达。经比较发现，IL-17在扁平苔藓组与鳞癌组织表达率显著高于对照组，扁平苔藓组与鳞癌组IL-17阳性质率无显著性差异，但鳞癌组强阳性表达率，IL-17在口腔扁平苔藓，口腔鳞癌中均有高度表达，提示口腔扁平苔藓上皮长期受炎症细胞浸润，随着局部细胞因子水平改变，炎性因子网络化激活可能促进口腔鳞癌的发生。但也学者认为，IL-17高表达是非霍奇金淋巴瘤预后较好的指标之一[7]。因此，IL-17在癌前病变及鳞癌中的表达水平与预后的关系尚需进一步深入研究。

COX-2属于诱导型酶，在大多数正常组织中不表达，在炎性因素等刺激下可诱导性表达。其在炎症、肿瘤等病理状态下受炎性刺激物、损伤、有丝分裂原和致癌物质等促炎递质诱导后，呈表达增高趋势，参与多种病理生理过程，具体是细胞膜磷脂通过磷脂酶A2途径被水解释放出花生四烯酸，在COX-2的催化下，合成前列腺素E2(PGE2)，最后产生系列炎症递质，并通过瀑布式级联反应参与机体各生理、病理过程。COX-2的过度表达在癌前病变组织中较早出现，甚至早于细胞凋亡周期改变。有学者分析舌鳞状细胞癌中COX-2表达水平，结果提示其表达水平与肿瘤侵袭性、转移能力、预后等相关[8]。近年来对肿瘤微环境及发生、发展的研究发现，COX-2表达水平上升与肿瘤血管形成关系密切[9-10]。本次研究发现，COX-2在正常口腔黏膜细胞中几乎不表达，50%的扁平苔藓阳性表达，80%鳞癌阳性表达。经比较发现，CXO-2在扁平苔藓组与鳞癌组阳性表达率均显著高于对照组，且鳞癌组阳性率高于扁平苔藓组，与其他学者研究结果相近。Pandey等[11]研究发现CXO-2在正常口腔黏膜组织、癌前病变组织、口腔鳞癌组织中表达水平依次增高。

口腔黏膜癌变的机制是临床研究的热点之一，特别是癌前病变进展为肿瘤的过程，例如局部微环境的变化，细胞因子间的正、负反馈网络，多种因子共同作用引起细胞生长周期变化，刺激肿瘤血管生成等[12]。本研究初步发现IL-17与CXO-2在口腔扁平苔藓及鳞癌组中均有不同程度的表达，但具体机制及对肿瘤环境的影响尚需进一步深入研究，例如动态观察肿瘤的发生与发展与IL-17、CXO-2的关系，从而为临床治疗预后评估提供参考。

[1] Warnakulasuriya S. Global epidemilology of oral and oropharyngeal cancer[J]. Oral Oncology,2009,45(3):309-316

[2] 钱毅，乔文静，马叶华，等. 人健康和炎性牙槽骨成骨细胞COX-2、PGE2、OPG，RANKL的表达[J]. 口腔医学研究，2010,26(4):529-531

[3] 卢锐，周刚. 辅助性T淋巴细胞极化相关细胞因子在口腔扁平苔藓中的研究进展[J]. 国际口腔医学杂志，2008,35(6)：627-629

[4] Nguyen CQ,Hu MH,Li Y,et al. Salivary gland tissue expression of inter leukin-23 and inter leukin-17 in Sjogren’s syndrome:findings in humans and mice[J]. Arthritis Rheum,2008,58(3):734-743

[5] 刘国林，闫威，陈勇，等. 口腔扁平苔藓癌变的研究进展[J]. 肿瘤防治研究,2010,37(7):848-851

[6] Su XM,Ye J,Hsueh EC,et al. Tumor microenvironments direct the recruitmentAnd expansion of human th17 cells[J]. J Immunol,2010,184(3):1630-1641

[7] Yang ZZ,Novak AJ,Ziesmer SC,et al. Malignant B cells skew the balance of regulatory T cells and TH17 cells in B-cell non-Hodgkins lymphoma[J]. Cancer Res,2009,69(13):5522-5530

[8] Renkonen J,Wolff H,Paavonen Y. Expression of cyclooxygenase-2 in human tongue carcinoma and its precursor lesions[J]. Virchows Arch,2002,440(6):594-597

[9] 许国祺，李秉琦，李辉. 口腔癌前病变：白斑与扁平苔藓[M]. 北京：中国医药科技出版社，1992：173-222

[10] 周曾同，张水龙，唐国瑶. 口腔黏膜癌前病变研究进展[J]. 临床口腔医学杂志，2000，16(2)：75-76

[11] Pandey M,Prakash O,Santhi WS,et al. Over expression of COX-2gene in oral cancer is independent of stage of disease and degree of differentiation[J]. Int J Oral Maxillofacial Surge,2008,37(4):379-383

[12] Sudha VM,Hemavathy S. Role of bcl-2 oncoprotein in oral potentially malignant disorders and squamous cell carcinoma:and immunohistochemical study[J]. Indian J Dent Res,2011,22(4):520-525

Expression of COX-2 and IL-17 in the oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma

Chen Qilin, Hu Xiaoli, Xu Qiongli, Yan Yan

(The Affiliated Taihe Hospital of Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei, China)

Objective It is to investigate the expression of COX-2 and IL-17 in the oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma, and analyze their relationships and clinical significance. Methods The expression of Cox-2 and IL-17 of 20 cases of oral lichen planus (lichen planus group), 20 cases of oral squamous cell carcinoma (oscc group) and 20 cases of normal oral mucosa (control gorup) were examined with immunohistochemical technique. The relationships of the expression of Cox-2 and IL-17 with oral mucosal lesions were analyzed. Results ①The IL-17 positive rate in control group, lichen planus group and oscc group were 70%, 95% and 100% respectively. The IL-17 positive rate both in lichen planus group and oscc group were markedly higher than that in control group (allP<0.05). But there was no obvious difference of IL-17 positive rate between lichen planus group and oscc group. ②The Cox-2 positive rate in control group, lichen planus group and oscc group were 0%, 50% and 80% respectively. The Cox-2 positive rate both in lichen planus group and oscc group were markedly higher than that in control group (allP<0.05), and COX-2 positive rate in oscc group were markedly higher than that in lichen planus group (P<0.05). Conclusion The expression of Cox-2 and IL-17 in the oral lichen planus and mucosa squamous cell carcinoma are increased, they may be play an important role to influence the tumor microenvironment in tumor development.

IL-17; COX-2; oral lichen planus; oral squamous cell carcinoma

陈启林，男，副主任医师， 副教授，从事口腔正畸基础与临床研究。

严艳，E-mail: 13597888081@163.com

湖北省教育科学“十二五”规划2012年度重点课题(2012A050);十堰市科技局科研基金项目(ZD2011019)

10.3969/j.issn.1008-8849.2014.30.002

R758.65;R739.8

A

1008-8849(2014)30-3310-03

2013-12-30