仙人草中总黄酮体外抗氧化研究

张 雪,孙雨娇，乔 圆，何永兰，史传林，陈 力，汪瑶菲，韩丽琴

(吉林医药学院药学院，吉林 吉林 132013)

·论 著·

仙人草中总黄酮体外抗氧化研究

张 雪,孙雨娇，乔 圆，何永兰，史传林，陈 力，汪瑶菲，韩丽琴*

(吉林医药学院药学院，吉林 吉林 132013)

目的 研究仙人草中总黄酮提取及体外抗氧化活性。方法 采用超声辅助醇提法提取黄酮，测定黄酮对邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率。结果 测定结果显示，黄酮对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率分别为54.85%和96.95%。结论 黄酮对超氧阴离子自由基和羟自由基具有明显的抗氧化作用。

仙人草；超声；抗氧化

1 材料与方法

1.1 主要原料与仪器

仙人草(福建武平)，芦丁标准品(F20060930，国药集团化学试剂有限公司)，邻苯三酚、水杨酸、乙醇、石油醚、乙醚等均为分析纯，实验用水为重蒸水。RE-3000型旋转蒸发仪，UV1800型紫外可见分光光度计，PHs-3CW微型酸度计。

1.2 仙人草黄酮类化合物提取

准确称取仙人草粉末30 g于索氏提取器中，150 mL乙醚加热回流6 h至无色。按1∶10(g/v)料液比加入70%乙醇并不断搅拌，超声(T=60 ℃，t=45 min，P=100 W)提取，趁热抽滤得滤液呈棕红色。浓缩液后加入等体积石油醚，萃取3次。准确量取浓缩后的提取液0.5 mL，紫外可见分光光度计在200～400 nm波长范围内扫谱,得仙人草醇提物在286 nm波长处有最大吸收。

1.3 绘制芦丁标准曲线

精密称取干燥至恒重的芦丁标准品0.076 0 g，用30%乙醇在超声波40 kHz条件下溶解后，转移至250 mL容量瓶中，30%乙醇定容，摇匀备用。溶液浓度为0.304 0 mg/mL。准确移取上述芦丁标准溶液0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00 mL于25 mL容量瓶中，分别加入12.5、12.1、11.7、11.3、10.9、10.5 mL 30%乙醇，加入0.8 mL 5%的NaNO2溶液，放置5 min，加入0.8 mL 5%的Al(NO3)3溶液，放置6 min，加入5 mL 4%的NaOH溶液，30%乙醇定容至刻度线，放置10 min，紫外可见分光光度计于510 nm处测定吸光度，绘制标准曲线，得回归方程：

A=0.011 64C+0.000 62，相关系数r=0.999 9

1.4 仙人草总黄酮含量测定

准确移取稀释后提取液0.5mL于25 mL容量瓶中，按标准曲线测定方法在510 nm处测定吸光度A。

1.5.1 邻苯三酚自氧化最大吸收波长测定

在容量瓶中加入4 mL pH=8.2的50 mmol/L Tris-HCL缓冲液，加入1 mL蒸馏水，于25 ℃恒温水浴中放置20 min，再加入0.1 mL 25mmol/L邻苯三酚溶液，立即混匀于25 ℃恒温水浴中反应5 min，紫外可见分光光度计在200～400 nm波长范围内扫谱得邻苯三酚自氧化最大吸收波长在324 nm。

在容量瓶中加入4mL pH=8.2的50 mmol/L Tris-HCL缓冲液，加入1 mL蒸馏水，于25 ℃恒温水浴中放置20 min，再加入0.1 mL 25mmol/L邻苯三酚溶液， 25 ℃恒温水浴中反应5 min，立即加入1 mL 8 mol/L盐酸终止反应， 324 nm波长处测得吸光度A，即为A0；A1为加样品后的吸光度；A2为不加邻苯三酚溶液的样品吸光度。以不加邻苯三酚溶液和样品试剂做空白[2]。

清除率%=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

1.6 ·OH清除率测定

1.6.1 ·OH最大吸收波长扫描

在容量瓶中加入1 mL 9 mmol/L FeSO4溶液和1 mL的30%H2O2溶液，混合均匀后加入2 mL 9 mmol/L水杨酸-乙醇溶液和2 mL蒸馏水。在37 ℃恒温水浴中反应30 min，紫外可见分光光度计在400～600 nm波长范围内扫谱得·OH最大吸收波长为524 nm。

1.6.2 测定·OH清除率

在容量瓶中加入1mL 9mmol/L FeSO4溶液和1 mL的30% H2O2溶液，混合均匀后加入2 mL 9 mmol/L水杨酸-乙醇溶液和2 mL蒸馏水。在37 ℃恒温水浴中反应30min,然后以UV1800型紫外可见分光光度计在524 nm波长处测得吸光度值为A0值，A1为加入样品的吸光度；A2为不加H2O2的吸光度。以蒸馏水为参比空白[2]。

清除率%=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

2 结 果

仙人草黄酮对·OH的清除作用见图2。由图2可知，仙人草中黄酮类化合物对·OH具有相对较强的清除能力，随浓度增加，清除率随浓度的变化趋势不平缓，反映二者之间良好的量效关系，而且在给定浓度范围内，·OH的清除率均达到50%以上。

图 1 仙人草黄酮对的清除作用

图 2 仙人草黄酮对·OH的清除作用

3 讨 论

黄酮类化合物作为天然植物中主要的抗氧化成分[2-3]，在治疗心血管疾病[4-5]、肝病[6-7]、肿瘤[8-9]、代谢及其他疾病时有很好的作用，还能够发挥其抗氧化活性延缓衰老[10-11]。通过测定结果也证实仙人草中黄酮类化合物对超氧自由基和·OH表现了较强的清除活性。

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Study the antioxidant of total flavonoids in fairy grass

ZHANG Xue,SUN Yu-jiao,QIAO Yuan,HE Yong-lan,SHI Chuan-lin,CHEN Li,WANG Yao-fei,HAN Li-qin*

(School of Pharmacy,Jilin Medical College,Jilin 132013,China)

Objective To study the antioxidant activity of total flavonoids extraction from fairy grass in vitro. Methods The ultrasonic assisted ethanol extraction were used to extract flavonoids,the clearance effect of flavonoids on superoxide anion radical and hydroxyl radical produced in pyrogallol autoxidation were determination. Results The clearance rates of flavonoids on superoxide anion radical and hydroxyl radical were 54.85% and 96.95%. Conclusion Flavonoids has significant antioxidant effect.

fairy grass;ultrasound;antioxidant

1673-2995(2014)01-0026-03

吉林医药学院大学生科研课题(2011-10).

张 雪(1991-)，女(汉族)，在读本科.

韩丽琴(1970-)，女(锡伯族)，教授，硕士.

R285

A

2013-10-27)