HPLC法测定牛黄上清胶囊中栀子苷含量*

杨长琴

(天津市滨海新区食品药品检验检测中心， 天津 300457)

HPLC法测定牛黄上清胶囊中栀子苷含量*

杨长琴

(天津市滨海新区食品药品检验检测中心， 天津 300457)

目的：建立HPLC法测定牛黄上清胶囊中栀子苷的含量。方法：采用Agela C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm),以甲醇-水(20∶80)为流动相，流速为0.8 ml/min，检测波长为238 nm。结果：栀子苷线性范围为0.101 7～0.610 2 μg/ml(r=0.999 9)，平均回收率为99.53%，RSD为0.57%(n=6)。结论：本方法可靠、灵敏、准确，适用于牛黄上清胶囊中栀子苷的质量控制。

HPLC，牛黄上清胶囊，栀子苷

牛黄上清胶囊处方由人工牛黄、薄荷、菊花、荆芥穗、白芷、川芎、栀子等中药材组成，具有清热泻火，散风止痛的功效。为了更加有效控制该制剂质量，本文采用HPLC法对处方栀子中栀子苷进行含量测定，该方法操作简便、分离度好、专属性强。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪LC-2010A，岛津高效液相色谱仪工作站LC-Solution；十万分之一分析天平(日本岛津)；Agela C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQ3200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。栀子苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号110749-201115，含量99.7%)；牛黄上清胶囊(江西天施康弋阳制药有限公司，批号13090102、12070502、12060801)；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Agela C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(20∶80)；检测波长：238 nm；流速：0.8 ml/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品20.40 mg，置200 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀；精密量取10 ml,置25 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 取本品“装量差异”项下的内容物，混匀，取约0.4 g，精密称定，置25 ml量瓶中,加甲醇适量溶解，超声处理(功率150 W，频率40 kHz)30 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀,滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备 按处方比例制备不含栀子的样品，按“2.2.2”项下的方法制成阴性对照溶液。

2.2.4专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。结果显示阴性对照在栀子苷相同保留时间处无干扰峰，见图1。

1 栀子苷

2.3线性考查 精取对照品溶液5、10、15、20、25和30 μl，按“2.1”项下的色谱条件，以峰面积Y为纵坐标，进样量X为横坐标，得回归方程Y=14 591.9X+1 630.9(r=0.999 9)。结果表明栀子苷在0.101 7～0.610 2 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.4精密度试验 取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测定栀子苷峰面积，RSD为0.14%，说明该法精密度良好。

2.5重现性试验 取同批号的样品0.4 g(批号13090102)，精密称取6份，按“2.2.2”项下方法制备，测定栀子苷含量，其RSD为0.10%，说明该法重现性良好。

2.6稳定性试验 取按“2.2.2”项下方法制备的供试品溶液(批号13090102)，分别在0、4、8、12、24、48和72 h测定，栀子苷峰面积RSD为0.67%，说明该溶液在72 h内稳定。

2．7回收率试验 取同批样品(批号13090102，含量0.95 mg/粒)约0.2 g，精密称取6份，分别置25 ml量瓶中，各精密加入栀子苷对照品溶液至刻度，按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果栀子苷的平均回收率为99.53%，RSD为0.57%，见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

2.8样品含量测定 取3批次的样品，按“2.2.2”项下的方法制备，按“2.1”项下的色谱条件分析，根据供试品和对照品的峰面积，按外标法计算样品含量，见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1检测波长的选择 栀子苷在《中国药典》2010年版一部栀子含量测定方法中波长选择为238 nm[1]，本品采用药典选用波长为该品种的测定波长，且栀子苷与其相邻峰取得了较好的分离效果。

3.2流动相的选择 根据文献报道，考查了不同组分的流动相，将甲醇-水(20∶80)[1]、乙腈-水(15∶85)[2]、乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液(8∶1∶91)[3]三种流动相进行比较，结果显示以甲醇-水(20∶80)为流动相色谱分离效果最佳，系统保留时间适中，故将其确定为流动相。

3.3提取溶剂及提取方法的选择 本实验选择50%甲醇和纯甲醇作溶剂，分别超声提取30 min，结果纯甲醇提取样品含量较高；又以纯甲醇为溶剂，回流提取30 min，结果超声提取较回流提取更为完全。因此最终选择纯甲醇超声提取30 min，该法提取较为完全，且简便易行，结果准确可靠。

1 中国药典[S].一部.2010：231，491

2 冯亦颖，王巨存，徐学锐.高效液相色谱法测定龙胆泻肝丸中栀子苷的含量[J].天津药学，2008，20(3)： 11-13

3 纪晓影，毕开顺，王洋，等.HPLC法同时测定抗感解毒颗粒中绿原酸、栀子苷和葛根素的含量[J].药物分析杂志，2010，30(1)：56-58

DeterminationofgeniposideinNiuhuangshangqingCapsulesbyHPLC

Yang changqin

(Tianjin Binhaixinqu Center for Food and Drug Control,Tianjin 300457)

Objective: To establish a HPLC method for determinative of geniposide in Niuhuangshangqing Capsules.Method∶The Agela C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with the mobile phase consisted of methanol-water(20∶80),the flow rate was 0.8 ml/min,the detection wavelength was set at 238 nm.Result:The linear range of geniposide was 0.101 7～0.610 2 μg/ml(r=0.999 9),the average recovery rate was 99.53%,RSD was 0.57%(n=6).Conclusion∶The method is reliable,sensitive,accurate and can be used for the quality control of Niuhuangshangqing Capsules.

HPLC,Niuhuangshangqing Capsules,geniposide

2014-02-14

R927.2

A

1006-5687(2014)04-0018-03