顶空进样法测定罗氟司特中的残留溶剂

宋劲燕+曹建英

[摘要] 目的 建立罗氟司特原料中残留溶剂的测定方法。 方法 罗氟司特中异丙醇、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）的残留量采用顶空进样气相色谱法，使用DB-624毛细管柱，FID检测器。采用程序升温法测定，氮气为载气，流速为2.5 ml/min，以二甲基亚砜（DMSO）为溶剂。 结果 被测溶剂均能得到良好的分离，异丙醇的浓度在199.4～598.1 μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9998，平均回收率为96.3%，RSD为2.13%；乙酸乙酯的浓度在200.1～600.2 μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9996，平均回收率为98.8%，RSD为1.79%；DMF的浓度在35.2～105.5 μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9997，平均回收率为98.8%，RSD为2.42%。 结论 该方法能够准确测定罗氟司特中的残留溶剂，可用于罗氟司特原料药有机溶剂的检测。

[关键词] 顶空进样气相色谱法；罗氟司特；残留溶剂

[中图分类号] O657.7+1[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）04（c）-0058-03

Residual solvents of roflumilast determined by headspace capillary gas chromatography

SONG Jin-yan CAO Jian-ying

Tianjin Nankai Yungong Pharmaceutical Science and Technology Co.,Ltd.,Tianjin 300384,China

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of residual solvents in roflumilast material. Methods The residual solvents of isopropanol,ethyl acetate and N,N-dimethylformamide in roflumilast were determined by headspace gas chromatography,and DB-624 capillary column,FID detector were used.The column was subjected totemperature programming,the carrier gas was nitrogen,the flow rate was 2.5 ml/min,the solvent was dimethyl sulfoxide(DMSO). Results The result shows that the solvents were completely separated.The standard curves of isopropanol was linear in the concentration range of 199.4-598.1 μg/ml,r=0.9998,the average recovery was 96.3%,with RSD of 2.13%.The standard curves of ethyl acetate was linear in the concentration range of 200.1-600.2 μg/ml,r=0.9996,theaverage recovery rate was 98.8%,with RSD of 1.79%.The standard curves of N,N-dimethylformamide waslinear in the concentration range of 35.2-105.5μg/ml,r=0.9997,the average recovery rate was 98.8%,with RSD of 2.42%. Conclusion This method is proved to be accurate and reliable for the accurate determination of residual solvents in roflumilast.It can be used in the detection for the organic solvent of roflumilast crude drug.

[Key words] Headspace gas chromatography;Roflumilast;Residual solvents

罗氟司特是由Nycomed公司生产上市的磷酸二酯酶-4 （ PDE-4） 抑制剂，商品名Daxas。2011年2月28日，罗氟司特经美国FDA 批准上市，用于慢性阻塞性肺病（COPD）的治疗。本品为选择性PDE-4抑制剂，是10多年来首次获得欧盟批准的新一类治疗COPD的药物。本品为一日1 次用药的口服片剂，须与其他支气管扩张药合用，适用于有频繁加重病史的成人患者慢性支气管炎相关严重COPD的维持治疗。研究证明，本品可显著改善患者中至重度加重发作和舒张前FEV1，不管是否与长效β2 激动剂联用。研究还证明，与安慰剂相比，本品可显著改善患者的肺功能。本品在合成、精制过程中用到了ICH限制的溶剂，包括三类溶剂异丙醇和乙酸乙酯和及二类溶剂N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。本文按照中国药典2010年版[1]与ICH[2-3]相关要求，建立了顶空气相色谱法测定该药中异丙醇、乙酸乙酯、DMF的残留量[4-9]。

1 仪器与试剂

Agilent 7820 A气相色谱仪、Agilent 7697 A顶空自动进样装置、安捷伦色谱工作站；赛多利斯BP211D电子分析天平。异丙醇、乙酸乙酯、DMF、二甲基亚砜（DMSO）均为分析纯。罗氟司特原料样品由天津南开允公医药科技有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 气相色谱条件

色谱柱为DB-624（30 m×0.32 mm，1.80 μm），柱温采用程序升温：30℃保持6 min，以10℃/min升温至120℃后，再以20℃/min升温至220℃，保持10 min；采用氮气作为载气，流速为2.5 ml/min，分流比为5∶1；检测器为FID，温度为250℃；顶空平衡温度为110℃，平衡时间为45 min，进样口温度为200℃，进样体积为1 ml。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中约含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF0.088 mg的溶液，精密量取2 ml，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品，精密称定，加二甲基亚砜溶解并稀释制成每1 ml约含0.1 g的溶液，精密量取2 ml，置顶空瓶中，密封，作为供试品溶液。

2.3 系统适用性试验

取本品对照品溶液，依法测定，连续进样5次，记录色谱图，由图1可知，各溶剂峰均能分开，峰形良好。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂峰面积的RSD分别为1.69%、1.75%和2.33%。

图1 对照品溶液色谱图

2.4线性关系考察

加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精密量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml分别置10 ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，依法检查。以浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标进行线性回归，结果见表1。

表1 线性试验结果

2.5 精密度试验

供试品溶液加入100%指示浓度的各试剂，制备6份，依次测定，记录色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD分别为2.13%、1.79%和2.42%（表2）。

表2 精密度检查结果

2.6 中间精密度试验

另一分析人员独立建立系统，供试品溶液加入100%指示浓度的各试剂，制备6份，依次测定，记录色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD分别为1.03%、1.50%和1.49%。两人之间回收率的RSD分别为1.86%、1.64%和1.93%，故该方法的重现性良好（表3）。

表3 中间精密度检查结果

2.7 回收率试验

精密称取异丙醇、乙酸乙酯、DMF适量，加供试品溶液溶解，并稀释制成每1 ml中含异丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精密量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml分别置10 ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液；另取对照品溶液和供试品溶液，依法测定。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂平均回收率分别为96.3%、98.8%和98.8%， RSD分别为2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。

表4 残留溶剂异丙醇测定回收率试验结果

表5 残留溶剂乙酸乙酯测定回收率试验结果

表6 残留溶剂N,N-二甲基甲酰胺测定回收率试验结果

2.8 检出限确定

精密称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，分别加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3种溶液。分别取以上3种溶液，逐级稀释，取信噪比为3∶1时的进样浓度作为检出限，异丙醇的检出限浓度为：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的检出限浓度为0.102 μg/ml；DMF的检出限浓度为2.110 μg/ml。

2.9 样品测定

取本品3批依法检查，结果见表7。

表7 3批样品检查结果

3 讨论

3.1 程序升温的选择

异丙醇、乙酸乙酯、DMF3种溶剂中，异丙醇与乙酸乙酯的沸点非常接近，在80℃左右，而DMF的沸点较高，达到150℃以上，为了达到有效的分离，采用了程序升温，在220℃时保持10 min，保证溶媒DMSO全部被吹出，不会影响下一次进样的测定。

3.2 溶媒的选择

根据罗氟司特的溶解特性——在水中几乎不溶，同时考虑沸点与出峰时间，采用DMSO作为溶媒，增加了本品的溶解度，提高了对残留溶剂检出的灵敏度，异丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比较理想的分离。

综上所述，经过方法学考察，本方法专属性强，经过检测限的测定，说明本方法有较高的灵敏度，能够保证对低限度的溶剂进行准确的测定。通过线性试验及回收率试验的测定，进一步说明本品能够对残留溶剂进行准确定量。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国药典.二部.[M].北京：中国医药科技出版社，2010：附录61.

[2]周海均.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京：人民卫生出版社，2000.

[3]胡昌勤.药物残留溶剂分析[Ｍ].北京：化学工业出版社，2008.

[4]张晓娟，朱晓斌.气相色谱法测定来曲唑中甲醇、异丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的残留量[J].广东化工，2012，39（3）：166-167.

[5]顾红.药物合成过程中有机残留量的检测[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.

[6]江冬英，胡巧云.顶空进样法测定更昔洛韦的残留溶剂[J].中国医药导报，2011，8（25）：56-58.

[7]林斌.气相色谱法测定他克莫司中的8种残留溶剂[J].海峡药学，2012，24（7）：60-62.

[8]陈丽萍，丁邦东，谭志刚，等.顶空气相色谱法测定醋酸地塞米松原料药中残留溶剂的含量[J].天津药学，2012， 24（1）：12-14.

[9]俞建君.气相色谱法测定奥氮平原料药中6种残留溶剂含量[J].广东化工，2011，10（38）：159-160.

（收稿日期：2014-03-12本文编辑：许俊琴）

图1 对照品溶液色谱图

2.4线性关系考察

加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精密量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml分别置10 ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，依法检查。以浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标进行线性回归，结果见表1。

表1 线性试验结果

2.5 精密度试验

供试品溶液加入100%指示浓度的各试剂，制备6份，依次测定，记录色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD分别为2.13%、1.79%和2.42%（表2）。

表2 精密度检查结果

2.6 中间精密度试验

另一分析人员独立建立系统，供试品溶液加入100%指示浓度的各试剂，制备6份，依次测定，记录色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD分别为1.03%、1.50%和1.49%。两人之间回收率的RSD分别为1.86%、1.64%和1.93%，故该方法的重现性良好（表3）。

表3 中间精密度检查结果

2.7 回收率试验

精密称取异丙醇、乙酸乙酯、DMF适量，加供试品溶液溶解，并稀释制成每1 ml中含异丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精密量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml分别置10 ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液；另取对照品溶液和供试品溶液，依法测定。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂平均回收率分别为96.3%、98.8%和98.8%， RSD分别为2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。

表4 残留溶剂异丙醇测定回收率试验结果

表5 残留溶剂乙酸乙酯测定回收率试验结果

表6 残留溶剂N,N-二甲基甲酰胺测定回收率试验结果

2.8 检出限确定

精密称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，分别加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3种溶液。分别取以上3种溶液，逐级稀释，取信噪比为3∶1时的进样浓度作为检出限，异丙醇的检出限浓度为：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的检出限浓度为0.102 μg/ml；DMF的检出限浓度为2.110 μg/ml。

2.9 样品测定

取本品3批依法检查，结果见表7。

表7 3批样品检查结果

3 讨论

3.1 程序升温的选择

异丙醇、乙酸乙酯、DMF3种溶剂中，异丙醇与乙酸乙酯的沸点非常接近，在80℃左右，而DMF的沸点较高，达到150℃以上，为了达到有效的分离，采用了程序升温，在220℃时保持10 min，保证溶媒DMSO全部被吹出，不会影响下一次进样的测定。

3.2 溶媒的选择

根据罗氟司特的溶解特性——在水中几乎不溶，同时考虑沸点与出峰时间，采用DMSO作为溶媒，增加了本品的溶解度，提高了对残留溶剂检出的灵敏度，异丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比较理想的分离。

综上所述，经过方法学考察，本方法专属性强，经过检测限的测定，说明本方法有较高的灵敏度，能够保证对低限度的溶剂进行准确的测定。通过线性试验及回收率试验的测定，进一步说明本品能够对残留溶剂进行准确定量。

[参考文献]

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[4]张晓娟，朱晓斌.气相色谱法测定来曲唑中甲醇、异丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的残留量[J].广东化工，2012，39（3）：166-167.

[5]顾红.药物合成过程中有机残留量的检测[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.

[6]江冬英，胡巧云.顶空进样法测定更昔洛韦的残留溶剂[J].中国医药导报，2011，8（25）：56-58.

[7]林斌.气相色谱法测定他克莫司中的8种残留溶剂[J].海峡药学，2012，24（7）：60-62.

[8]陈丽萍，丁邦东，谭志刚，等.顶空气相色谱法测定醋酸地塞米松原料药中残留溶剂的含量[J].天津药学，2012， 24（1）：12-14.

[9]俞建君.气相色谱法测定奥氮平原料药中6种残留溶剂含量[J].广东化工，2011，10（38）：159-160.

（收稿日期：2014-03-12本文编辑：许俊琴）

图1 对照品溶液色谱图

2.4线性关系考察

加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精密量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml分别置10 ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，依法检查。以浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标进行线性回归，结果见表1。

表1 线性试验结果

2.5 精密度试验

供试品溶液加入100%指示浓度的各试剂，制备6份，依次测定，记录色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD分别为2.13%、1.79%和2.42%（表2）。

表2 精密度检查结果

2.6 中间精密度试验

另一分析人员独立建立系统，供试品溶液加入100%指示浓度的各试剂，制备6份，依次测定，记录色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD分别为1.03%、1.50%和1.49%。两人之间回收率的RSD分别为1.86%、1.64%和1.93%，故该方法的重现性良好（表3）。

表3 中间精密度检查结果

2.7 回收率试验

精密称取异丙醇、乙酸乙酯、DMF适量，加供试品溶液溶解，并稀释制成每1 ml中含异丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精密量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml分别置10 ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液；另取对照品溶液和供试品溶液，依法测定。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂平均回收率分别为96.3%、98.8%和98.8%， RSD分别为2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。

表4 残留溶剂异丙醇测定回收率试验结果

表5 残留溶剂乙酸乙酯测定回收率试验结果

表6 残留溶剂N,N-二甲基甲酰胺测定回收率试验结果

2.8 检出限确定

精密称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，分别加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3种溶液。分别取以上3种溶液，逐级稀释，取信噪比为3∶1时的进样浓度作为检出限，异丙醇的检出限浓度为：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的检出限浓度为0.102 μg/ml；DMF的检出限浓度为2.110 μg/ml。

2.9 样品测定

取本品3批依法检查，结果见表7。

表7 3批样品检查结果

3 讨论

3.1 程序升温的选择

异丙醇、乙酸乙酯、DMF3种溶剂中，异丙醇与乙酸乙酯的沸点非常接近，在80℃左右，而DMF的沸点较高，达到150℃以上，为了达到有效的分离，采用了程序升温，在220℃时保持10 min，保证溶媒DMSO全部被吹出，不会影响下一次进样的测定。

3.2 溶媒的选择

根据罗氟司特的溶解特性——在水中几乎不溶，同时考虑沸点与出峰时间，采用DMSO作为溶媒，增加了本品的溶解度，提高了对残留溶剂检出的灵敏度，异丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比较理想的分离。

综上所述，经过方法学考察，本方法专属性强，经过检测限的测定，说明本方法有较高的灵敏度，能够保证对低限度的溶剂进行准确的测定。通过线性试验及回收率试验的测定，进一步说明本品能够对残留溶剂进行准确定量。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国药典.二部.[M].北京：中国医药科技出版社，2010：附录61.

[2]周海均.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京：人民卫生出版社，2000.

[3]胡昌勤.药物残留溶剂分析[Ｍ].北京：化学工业出版社，2008.

[4]张晓娟，朱晓斌.气相色谱法测定来曲唑中甲醇、异丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的残留量[J].广东化工，2012，39（3）：166-167.

[5]顾红.药物合成过程中有机残留量的检测[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.

[6]江冬英，胡巧云.顶空进样法测定更昔洛韦的残留溶剂[J].中国医药导报，2011，8（25）：56-58.

[7]林斌.气相色谱法测定他克莫司中的8种残留溶剂[J].海峡药学，2012，24（7）：60-62.

[8]陈丽萍，丁邦东，谭志刚，等.顶空气相色谱法测定醋酸地塞米松原料药中残留溶剂的含量[J].天津药学，2012， 24（1）：12-14.

[9]俞建君.气相色谱法测定奥氮平原料药中6种残留溶剂含量[J].广东化工，2011，10（38）：159-160.

（收稿日期：2014-03-12本文编辑：许俊琴）