新型二氢呋喃类化合物的合成及抑制血小板聚集活性研究

钟涵宇，张一凯，张敬一，李 科 (.第二军医大学药学院药物化学教研室，上海 00433，.沈阳军区总医院药剂科，沈阳 006)

近年来，脑血栓、心肌梗死、外周动脉血栓、深静脉血栓等一系列血栓栓塞疾病严重威胁着人类健康，其发病率、致残率和致死率都居各类疾病之首，成为危害人类健康的头号杀手，而大多数心脑血管疾病都与凝血异常所导致的血栓和血栓栓塞有着密切的联系[1,2]。血小板在止血、血栓形成、动脉粥样硬化等过程中起着重要作用，因此阻止血小板凝聚就可以达到抗凝的目的。抗血小板治疗是通过药物阻滞血小板聚集而起到预防血栓形成，减少缺血性卒死事件的发生；同时也是缺血性卒死一级和二级预防的重要组成部分[3,4]。

木脂素类化合物具有多种结构类型，体外活性测试表明，该类型的化合物体外具有抗肿瘤、保肝、调节中枢神经、松弛平滑肌、抗菌、抗病毒等多种生物学活性[5]。本课题组首次以2-(4-甲氧基苯基)-4-乙烯基-2,5-二氢呋喃为母核，对该类木脂素化合物进行抗凝血活性研究，在此基础上设计合成了结构为2-(4-甲氧基苯基)-4-乙烯基-2,5-二氢呋喃-3-羧酸的前体化合物，并在其3位侧链引入不同的杂环基团共设计合成了17个新目标化合物，并对所合成的目标化合物进行抑制血小板凝集的抗凝血活性测试。

1 实验部分

1.1仪器及材料 RY-2型熔点仪，温度未经过校正；核磁共振氢谱用Bruker Spectmspin AC-P300型核磁共振测定，CDCl3为溶剂，TMS为内标；对照品MCI-154[6]由第二军医大学药学院有机教研室合成；合成过程中所用原料及试剂均为市售分析纯。

1.22-(4-甲氧基苯基)-4-乙烯基-2,5-二氢呋喃-3-羧酸的合成 见图1。

图1 中间体V的合成方法

1.2.1芳基次甲基丙二酸二乙酯(Ⅲ)的合成 将60.75 ml对甲氧基苯甲醛、90 ml丙二酸二乙酯及15 ml冰乙酸、6 ml哌啶加入500 ml无水甲苯中，加热至回流，用分水器分出反应过程中生成的水。9 h后终止反应，减压蒸去甲苯，油泵蒸去丙二酸二乙酯得油状粗产品。在粗产品中加乙醇50 ml于冰箱中冰冻结晶，得到白色固体Ⅲ (129.6 g, 收率80%),mp: 145.1～145.5 ℃。

1.2.24-乙烯基-2-对甲氧基苯基-2,5-二氢呋喃-3-羧酸(Ⅴ)的合成 在冰浴条件下，将NaH (17.28 g，0.72 mol)加入100 ml的无水的THF中，搅拌30 min后将1,4丁炔二醇(23.24 g，0.27mol)溶解于60 ml无水THF中，用恒压滴液漏斗滴入上述NaH的无水THF中，剧烈搅拌；将芳基次甲基丙二酸二乙酯(Ⅲ)用100 ml无水THF溶解，缓慢滴入反应液中，继而将研细的CuI一次加入到反应瓶中。将反应烧瓶油浴加热至40 ℃，恒温下搅拌6 h。用TLC监测至反应结束，向反应液中缓慢加入100 ml水，用稀盐酸调pH值至2～3。减压回收THF，用100 ml二氯甲烷反复萃取3次，合并二氯甲烷相，用MgSO4干燥后进行硅胶柱色谱分离，以PE:EA = 10:1洗脱，得关键中间体Ⅴ。

1.3目标化合物的合成

1.3.1苯胺、苄胺及苯乙胺类衍生物的合成(图2) 将2-(4-甲氧基苯基)-4-乙烯基-2,5-二氢呋喃-3-羧酸(0.5 g，1.89 mmol)加入5 ml无水CH2Cl2中，加入1 ml的SOCl2。加热回流4 h，减压蒸去溶剂，用少量无水CH2Cl2除去过量SOCl2，得到固体粗产物。将粗产物加入10 ml的无水CH2Cl2中，将溶液置于冰盐浴中使反应瓶温度降低至0 ℃以下，向CH2Cl2溶液中缓慢加入1.1倍量苄胺(2.12 mmol)和1 ml吡啶，搅拌3 h后撤去冰盐浴常温搅拌过夜。加入3 ml冰乙酸终止反应，浓缩反应液后倒入冰水中，有固体析出，过滤，洗涤，干燥，得到目标产物。

图2 苯胺，苄胺，苯乙胺衍生物系列的合成

1.3.2哌嗪类衍生物的合成(图3) 将2-(4-甲氧基苯基)-4-乙烯基-2,5-二氢呋喃-3-羧酸(0.2 g，0.5 mmol)加入到5 ml无水CH2Cl2中，搅拌，加入1ml的SOCl2，加热回流4 h，减压蒸去溶剂，用少量无水CH2Cl2除去过量SOCl2，得到固体粗产物。将此固体加入10 ml的无水CH2Cl2中，将溶液置于冰盐浴中使反应瓶温度降低至0℃以下，向CH2Cl2溶液中缓慢加入1.5倍量2,3-二氯苯基哌嗪和NaH (0.2 g，8.3 mmol)，搅拌3 h后撤去冰浴常温搅拌过夜。加入3 ml冰乙酸终止反应，浓缩反应液后倒入冰水中，有固体析出，过滤，洗涤，干燥，得到目标产物。

图3 哌啶衍生物系列的合成

1.3.3其他目标化合物均按以上方法合成 17个目标化合物经光谱确证结构，其数据见表1。

表1 合成目标化合物结构，理化常数及氢谱数据

续表1

2 药理实验

参考Born比浊法，测定所有目标化合物对ADP诱导的新西兰大白兔血小板凝集活性，以MCI-154(由本教研室合成)为阳性对照物，MCI-154, [6-]4-(4-吡啶氨基)苯基]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮], 是一种新型强心剂, 它能通过增加心脏对Ca2+的敏感性来促进心脏收缩功能[7,8]。取新西兰大白兔心脏血，离心制备富含血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)。接通聚集仪电源，使之预热30 min，恒温(37±0.1)℃，取2只比色杯，一只加入PPP 200 ml，另一只加入PRP 200 ml，置聚集仪中预热5 min，分别向两杯中加入空白溶剂DMSO 1 ml，用PPP杯调节透光率为100%，用PRP杯调节透光率为0。于装有PRP杯中加入配制好的不同浓度的ADP溶液，搅拌下观察3 min血小板的最大聚集程度，从而得出诱导剂的阈剂量，将目标化合物配成不同浓度的DMSO溶液，加入含200 LPRP的比色管中，同上条件观察血小板的最大聚集程度，计算血小板聚集的抑制百分率，并用回归法求出各目标化合物的50%抑制活性。体外抑制血小板聚集的活性数据见表2。

聚集抑制率 = (对照聚集率-样品聚集率)

/对照聚集率×100%

表2 化合物2～10抗血小板聚集活性

3 结果与讨论

经初步的体外抗血小板凝集实验表明，所合成的目标化合物对ADP引起的血小板聚集有不同程度的抑制作用。其中大部分化合物的活性均优于对照药MCI-154，化合物3， 6和 10的IC50值分别为0.63，1.09和1.62μmol/L，分别是对照药的22.2, 12.8 和 8.6倍。从上面的药理活性数据来看，R基团的引入对抗血小板凝集有一定的影响，其中取代苄胺的引入可以增强其血小板聚集的抑制作用，特别是对位为F取代的化合物对药效提高有帮助，而供电子的引入会降低抗血小板凝聚作用。对于杂化和苯乙胺的引入对于药效影响不显著。但由于目标化合物的数目有限，尚难得出全面的构效关系讨论，有待于进一步的研究。

【参考文献】

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