抑郁模型大鼠海马中BDNF含量与抑郁样行为的相关性分析

杨 宇 施 鹏 张歆悦 王煜晔 崔 莹 李 爽

抑郁模型大鼠海马中BDNF含量与抑郁样行为的相关性分析

杨 宇1施 鹏2张歆悦1王煜晔1崔 莹1李 爽1

目的 研究抑郁模型大鼠海马中BDNF含量与抑郁样行为的相关性。方法选择雄性Wistar大鼠作为实验对象，随机分为抑郁模型组和健康对照组，依次给予足底电击、冰水游泳、热应激、夹尾、禁水、禁食建立抑郁模型，采用Western-blot的方法检测海马组织中BDNF含量的蛋白含量，采用糖水实验和悬尾实验测定抑郁样行为。结果抑郁模型组海马组织中BDNF的蛋白含量低于健康对照组，且与糖水消耗量呈正相关、与悬尾不动时间呈负相关。结论抑郁大鼠模型海马中BDNF含量降低，且与抑郁样行为具有相关性。

抑郁症；脑源性神经营养因子；抑郁样行为

抑郁症是精神科的常见疾病，但发病机制仍未阐明，这也给药物治疗造成了较大难度。BDNF是一类与神经功能密切相关的细胞因子，其含量异常可导致精神神、经症状的发生。在下列研究中，分析了抑郁模型大鼠海马中BDNF含量与抑郁样行为的相关性，现汇报如下。

1 材料与方法

1.1 材料由沈阳医学院实验动物中心提供30只健康Wistar雄性大鼠作为本次研究对象，体重（250 ±10）g。常规试剂和耗材购买于生工生物公司，抗体购买于Sigma公司，手术器械等由机能实验中心提供。大鼠编号后，采用随机数表法分为抑郁模型组和健康对照组，每组15只。抑郁模型组按照模型建立方法进行手术，健康对照组按照常规方法进行饲养。

1.2 方法

1.2.1 饲养方法 在动物实验中心的动物房饲养，温度（25±1）℃、湿度60%～70%，自然昼夜节律光照，自由获得食物和饮水。

1.2.2 模型建立方法 每日随机挑选以下刺激中的一种，包括电流 1.0mA、频率1Hz的足底点击，共30次；4℃冰水游泳、10m in；45℃热应激、30min；夹尾1m in；禁水24h；禁食24h。持续刺激21d，保证每种刺激不少于2次。

1.2.3 Western-Blot 处死大鼠后分离海马组织，加入RIPA后提取总蛋白，100℃变性后进行Western-blot。按配配方和流程配置浓缩胶、分离胶，以此进行垂直电泳和电转膜，完成后取出NC膜并用脱脂牛奶封闭2h。TBST洗涤5min×3遍后加入BDNF和actin的第一抗体，4℃摇床孵育过夜。第2天取出NC膜，于HRP标记的第二抗体中孵育2h，TBST洗涤后显影，并读取蛋白条带的灰度值。

1.2.4 糖水实验 刺激21d后，进行糖水实验：给予1%蔗糖水溶液，测定24h内糖水的消化量。

1.2.5 悬尾实验 刺激21d后，进行悬尾实验：在大鼠尾部距尖端约1cm处用胶布固定，与悬尾测试仪相连接，使大鼠呈悬空倒挂状、与台面距离约15cm。当大鼠由挣扎转为静止不动时开始计时，记录6min内大鼠的累计悬尾不动时间。

1.3 统计学方法采用SPSS 18.0软件进行分析，计量资料采用t检验分析；相关性分析采用以BDNF蛋白含量为自变量、抑郁样行为为应变量的单因素回归分析。检验标准以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠海马组织中的 BDNF含量抑郁模型组海马组织中BDNF的蛋白含量[（46.4±6.4）vs（100.0 ±16.2），t=10.985、P＜0.05]低于健康对照组，差异有统计学意义。

2.2 海马组织中 BDNF含量与抑郁样行为的相关性抑郁模型组海马组织中BDNF的蛋白含量与糖水消耗量呈正相关、与悬尾不动时间呈负相关，见表1。

表1 海马组织中BDNF含量与抑郁样行为的相关性分析结果

3 讨论

抑郁症是临床常见疾病，危害极大，但发病机制仍未阐明。5-羟色胺、去甲肾上腺素等神经递质在抑郁症发病中的作用已得到了一致认可，针对其设计的再摄取抑制剂药物也被应用于抑郁症的治疗。但该类药物起效需要4～6周，提示5-HT、NE异常仅是抑郁症发病，也限制了其临床应用价值。脑源性神经营养因子BDNF在神经系统中发挥了重要作用，参与了神经元的生长、分化等过程，并于神经的可塑性有关。其含量异常可能导致神经元的损伤，进而产生一系列的神经精神症状[1]。

在本研究中，从鼠海马中BDNF含量与抑郁样行为相关性的角度分析了BDNF这一细胞因子在抑郁症发病过程中的作用[2]。糖水消耗实验和悬尾实验是评价大鼠抑郁程度的常用方法，处于慢性应激和抑郁状态中的大鼠会出现糖水摄入量减少、悬尾不动时间延长[3]。通过单因素回归分析的方法分析相关性可知，抑郁模型组海马组织中BDNF的蛋白含量与糖水消耗量呈正相关、与悬尾不动时间呈负相关。这就提示海马组织中BDNF含量减少可导致抑郁样行为的发生，与抑郁症的发病密切相关。

由此可以得出，抑郁大鼠模型海马中BDNF含量降低，且与抑郁样行为具有相关性，可作为临床治疗抑郁症的靶点。

[1] 王丹.海马BDNF和iNOS与慢性应激性抑郁的关系[J].信阳师范学院学报(自然科学版),2010,23(2):237-242.

[2] 董爱国,赵丽丽,李海红,等.BDNF在抑郁症发病机制中的作用及其抗抑郁作用机制的研究进展[J].中国医疗前沿,2011,6(6):16-19.

[3] 王涵,李娜,文威,等.慢性应激致大鼠抑郁行为涉及海马形态变化和BDNF表达降低[J].基础医学与临床,2011,31(5):565-569.

R749.4

A

1673-5846(2014)05-0232-02

1沈阳医学院基础医学院，辽宁沈阳 110034

2沈阳医学院附属中心医院，辽宁沈阳 110034