紫外分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量

2014-07-09董丽荣杨晓梅李宗顺白文莉

中国民族民间医药 2014年7期

董丽荣杨晓梅李宗顺白文莉

1.昆明市食品药品检验所，云南昆明 650032;2．云南省玉溪市食品药品检验所，云南玉溪 653100

近年来，随着自由基生命科学的进展，黄酮类化合物不仅是一种活性物质，还是重要的营养物质，其药理和营养性都得到了国内外的广泛深入研究和临床试验［1］。作为一种新运用的营养素，黄酮类化合物对人体具有重要的生理保健功效，并体现出了如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其它脏器细胞、抗脂肪氧化、抗衰老等［2、3］。目前市场上有较多以黄酮类为功效成分的保健食品，总黄酮也多作为主要的质量控制指标。

1 仪器与试剂

UV－260型紫外可见分光光度计 (日本岛津);AEL－200型电子天平 (日本岛津);BP211D－OCE型电子天平(德国赛多利斯)。

芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所，批号:10080－200707;含量以92．5%计);无水乙醇 (分析纯，利安隆博华医药化学有限公司)。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择［4］取芦丁对照品溶液 (15 μg/ml)在200～600 nm波长内扫描，结果表明:在360nm处，对照品溶液有最大吸收峰，故测定波长选择360 nm。取“2.2项”下样品溶液在200～600 nm波长内扫描，结果表明:在360 nm处有最大吸收峰。

2.2 样品溶液的制备取样品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇100ml，密塞，称定重量，摇匀，超声处理 (功率250 W，频率40 KHZ)30分钟，放冷，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。试验表明微孔滤膜过滤能除去样品杂质，而对指标性成分没有影响 (对照品溶液0.45μm微孔滤膜过滤后在360nm吸光度无明显变化)。结果见表1。

表1 对照品溶液过滤前后吸光度变化情况

2.3 线性关系的考察

2.3.1 储备液的制备精密称定芦丁对照品为10.8mg，置于200ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.3.2 标准曲线的建立分别精密吸取“2.3.1项”储备液0.4、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于 10 ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。取30%乙醇为空白对照，在360 nm波长处测定吸光度，以吸光度A值与浓度C值线性回归，得曲线方程为:C=32.078A+0.003，r=1。结果表明，芦丁在2～30μg/ml浓度范围内，呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验取同一浓度芦丁对照品溶液，连续测定6次，测定吸光度，RSD%为0.1%。

2.3.4 稳定性考察取纽斯葆牌葛维片 (批号为BE263－A)14片，去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理 (功率250 W，频率40 KHZ)30分钟，放冷，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。分别于0、2、4、8、12、24h用紫外－可见分光光度计测定其吸收度 (360nm)，测定结果RSD为0.7%，结果表明样品溶液在24h内稳定。

2.3.5 重复性考察取纽斯葆牌葛维片 (批号为BE263－A)20片，去包衣，研细，精密称取6份，每份约0.5 g，样品处理方法同“2.3.4项”，分别测定其吸收度，测定结果RSD为1.2%，结果表明，样品重复性良好。

2.3.6 回收率试验精密称取纽斯葆牌葛维片 (批号为BE263－A)粉末9份，每份约0.25 g，分别精密加入适量的芦丁对照品溶液，按照“2.2.4项”操作，分别测定吸光度，计算回收率，结果见表2。