抗病毒口服液和儿感退热宁口服液中外源性抗氧剂的含量测定

张 磊，张 玲

（1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品药品检验研究院，安徽 合肥 230051）

抗病毒口服液和儿感退热宁口服液中外源性抗氧剂的含量测定

张 磊1，2，张 玲1

（1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品药品检验研究院，安徽 合肥 230051）

目的 考察高密度聚乙烯材料中抗氧剂向抗病毒口服液和儿感退热宁口服液中迁移情况。方法 用 HPLC法测定两种口服液中抗氧剂的含量。色谱柱：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：四氢呋喃—乙腈—水（60∶30∶10）；流速：1.5 mL·min-1；检测波长：273 nm；柱温：35℃。结果 抗氧剂1010在0.60～361.92 mg·L-1范围内呈良好的线性关系，r ＝0.999 7；抗病毒口服液准确度试验结果为97.03%，RSD为1.59%；儿感退热宁口服液准确度试验结果为97.62%，RSD为1.09%。结论 在抗病毒口服液和儿感退热宁口服液中存在聚乙烯材料中的抗氧剂，需要加强控制，该法简便、可靠，可供测定制剂中抗氧剂1010含量。

抗氧剂；HPLC；口服液

抗氧剂是药用高分子材料中加入的工业助剂之一。它能有效地阻止聚乙烯自由基反应，保护聚乙烯结构稳定。抗氧剂有明确的生物毒性，推荐的安全性阈值（safety concern threshold，SCT）为每天0.15 μg［1］。抗氧剂分子量小，分散在聚乙烯结构中，可能溶入药液，产生非预期的不良反应，甚至与药物反应，降低疗效。欧洲药典明确规定，材料中抗氧剂含量不得过 0.3%［2-3］。

抗病毒口服液、儿感退热宁口服液是临床常用口服制剂，常用高密度聚乙烯口服液体瓶包装。药用聚乙烯材料中往往加入两种或两种以上抗氧剂，其中长效抗氧剂1010是最常用的抗氧剂。目前，国内药用聚乙烯料中均含有这种抗氧剂。制剂中的表面活性剂可能增加抗氧剂的溶出。因此我们对两种制剂中抗氧剂1010进行测定，方法准确、灵敏、简便。

1 试验仪器、试剂及样品

1.1 仪器 液相色谱仪（安捷伦 1260）、电子分析天平（梅特勒 XS105）、固相萃取柱（PEP-SPE 60 mg／3 mL，Agela Cleanert）。

1.2 试剂及样品 抗氧剂 1010（CAS NO：6683-19-8，纯度：99.8%，厂家：色谱科，批号：441783）；抗病毒口服液（安徽某制药公司，批号：130205）；儿感退热宁口服液（安徽某制药公司，批号：130112）；高密度聚乙烯口服液体瓶（安徽省繁昌友谊医药包装材料有限公司，批号：130110、130116、130123）；试验中所用试剂均为分析纯或色谱纯。

2 方法

2.1 检测波长选择 取抗氧剂 1010适量，加甲醇制成对照溶液，在200～400 nm波长范围扫描紫外吸收，结果显示：217 nm和273 nm位置均有吸收，因273 nm处干扰小，因此选择273 nm作为试验波长。

2.2 色谱条件选择 参照有关文献［4-6］选择流动相。色谱柱：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：四氢呋喃—乙腈—水（60∶30∶10）；流速：1.5 mL·min-1；检测波长：273 nm；柱温：35℃。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 取抗氧剂1010对照品约0.3 g，精密称定，用四氢呋喃和乙腈混合液（体积比1∶1）稀释，定容至 50 mL，吸取 5.0 mL至 25 mL容量瓶中，用上述混合液稀释，定容，作为标准储备液（1 206.4 mg·L-1）。

2.3.2 供试品溶液的制备 将高密度聚乙烯口服液体瓶剪碎（30 mm×0.5 mm小条），称取30.0 g，放在烧杯中，水洗，室温干燥后，移至锥形瓶中，分别加入抗病毒口服液和儿感退热宁口服液150 mL，置高压蒸汽灭菌器中，加热至121℃，保持30 min，冷却至室温，移出，即得样品液。用甲醇、水各4 mL活化固相柱，取100 mL样品液，以 3～5 mL·min-1的流速通过固相萃取柱，分别用5 mL甲醇，3 mL四氢呋喃依次洗脱，收集洗脱液，用上述混合液定容至10 mL，待用。

2.3.3 阴性样品溶液的制备 按2.3.2方法，不加聚乙烯瓶制备阴性样品液。

2.4 系统适用性试验 取对照品溶液，注入液相色谱仪，测得tR＝13.04，理论板数为18 736，符合药典规定。取供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测得分离度为5.19，测得拖尾因子为1.01，均符合药典规定。取抗氧剂对照品溶液连续进样6次，峰面积分别为91 246、95 200、95 076、96 879、96 296、96 936，RSD＝2.23%，结果表明系统适用性重复性试验结果良好。

2.5 测定法 按上述色谱条件，分别精密移取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20 μL，注入液相色谱仪中，在此条件下：抗氧剂与其他成分基线分离，保留时间与对照品溶液一致。阴性样品溶液在抗氧剂位置未见峰出现。阴性样品无干扰。见图1～3。

2.6 精密度试验 重复性试验：取抗病毒口服液、儿感退热宁口服液和高密度聚乙烯口服液体瓶（批号：130110），按2.3.2制备供试品溶液，测定其中抗氧剂含量。第一人进行六次测定，以抗病毒口服液为介质制备的供试液中抗氧剂分别为 0.169 5、0.174 3、0.173 7、0.179 5、0.171 3、0.176 1 mg· L-1，平均含量0.174 1 mg·L-1，RSD＝2.03%。以儿感退热宁口服液为介质制备的供试液中抗氧剂分别为0.195 2、0.193 3、0.192 1、0.190 5、0.194 3、 0.196 7 mg·L-1，平均含量0.193 7 mg·L-1，RSD ＝1.14%。

图1 供试品 HPLC色谱图

图2 抗氧剂对照品 HPLC色谱图

图3 阴性样品溶液 HPLC色谱图

中间精密度试验：由两人在不同时间进行抗氧剂含量测定，第一人数据见重复性试验结果。第二人数据分别为：以抗病毒口服液为介质的供试液中抗氧剂分别为0.170 1、0.173 6、0.172 9、0.168 5、0.171 4、0.176 6 mg·L-1，平均含量 0.172 0 mg· L-1，RSD＝1.65%；以儿感退热宁口服液为介质的供试液中抗氧剂分别为0.190 8、0.193 1、0.196 1、0.191 7、0.193 5、0.190 9 mg·L-1，平均含量0.192 7 mg·L-1，RSD＝1.06%。试验结果表明，该方法精密度良好。

2.7 溶液稳定性试验

2.7.1 对照品溶液稳定性 取对照品溶液分别于0、2、4、6、8、12 h进样，峰面积分别为 91 246、95 076、96 879、96 531、97 644、98 529，RSD＝2.70%，结果表明，对照品溶液在12 h内稳定。

取对照品溶液分别放置0、1、2、3 d进样，峰面积分别为96 439、95 141、96 703、94 556，RSD＝1.07%，结果表明，对照品溶液的3 d内稳定性良好。

2.7.2 供试品溶液稳定性 取以抗病毒口服液为介质的供试液分别于0、2、4、6、8、12 h进样，峰面积分别为 301.41、286.05、301.15、285.51、304.05、296.14，RSD＝2.74%，结果表明，供试品溶液在12 h内稳定。

取儿感退热宁口服液为介质制备的供试液分别于0、2、4、6、8、12 h进样，峰面积分别为396.56、387.32、381.13、386.59、387.62、381.31，RSD＝1.46%，结果表明，供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 标准曲线绘制及线性范围的考察 取按“2.3.1”制备的标准储备液用四氢呋喃和乙腈等体积混合液逐级稀释，得浓度为 0.60、1.21、6.03、24.13、48.26、72.38、120.64、241.28、361.92 mg· L-1标准对照液。取上述对照品溶液，注入色谱仪，记录峰面积，以峰面积（X）对浓度（Y）进行线性回归，回归方程为：Y＝1924.8X+2693.7（r＝0.999 7）。结果表明：抗氧剂1010在0.60～361.92 mg· L-1范围内线性关系良好。

2.9 准确度试验 取抗病毒口服液、儿感退热宁口服液和高密度聚乙烯口服液体瓶（批号：130110），按2.3.2步骤操作至“取100 mL样品液”，分别在样品液中加入抗氧剂对照储备液40、80、240 μL，然后接2.3.2步骤进行萃取操作，制备准确度试验液。分别取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积计算，结果见表1，2。

表1 抗病毒口服液准确度试验结果

2.10 检测限 取抗氧剂1010对照品适量，用四氢呋喃和乙腈等体积混合液逐级稀释，定容。对照液浓度0.12 mg·L-1，平均信噪比为 3.91，迁移量检测限为0.01 mg·L-1（n＝3）。

2.11 含量测定 按上述方法，测定了三批高密度聚乙烯口服液体瓶中抗氧剂 1010向两种口服液中的迁移量，结果见表3。

表3 抗氧剂迁移量测定结果

3 结论

文中采用破坏性加速试验的方式制备供试品溶液，所测结果仅用于评价和判断聚乙烯中抗氧剂向制剂迁移的风险大小。另外笔者对常温下存放了6个月和12个月的高密度聚乙烯口服液体瓶包装的抗病毒口服液和儿感退热宁口服液中抗氧剂进行测定，结果均低于检出限。

在上述抗氧化剂测定过程中发现，检测图谱中还有一些未知峰。其种类和来源未知，有进一步研究的必要。

文献记载了多种检测抗氧剂方法，经过筛选，文中确定以水／四氢呋喃／乙腈为流动相可以避免抗氧剂330和1076氧化产物的干扰。

［1］ 国家食品药品监督管理局.化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则（试行）［S］，国食药监注［2012］267号：附件4.

［2］ 欧洲药品质量委员会.欧洲药典 EP［S］，8.0版，2014：338-341.

［3］ 国家食品药品监督管理局.药品包装材料与药物相容性试验指导原则［S］，YBB00142002，2006-10-23.

［4］ 谢兰桂，汤 龙，孙会敏，等.再生塑料及其检测技术研究进展［J］.药物分析杂志，2010，30（10）：1985-1989.

［5］ 张 磊，黄葆华.5%葡萄糖注射液中外源性抗氧剂的测定［J］.安徽医药，2010，14（12）：1400-1402.

［6］ 陈 瑜，王丹丹，金 立.高效液相色谱法测定塑料输液容器中四种常用抗氧剂的含量［J］.中国药品标准，2013，14（4）：279-281.

Determination of the content of exogenous antioxidant in the Antivira oral-liquid and Ergan Tuirening oral-liquid preparations

ZHANG Lei1，2，ZHANG Ling1
（1.Department of Pharmaceutical，Anhui University of Chinese Medicine，Anhui 230031，China；2.Anhui Institutes for Food and Drug Control，Anhui 230051，China）

Objective Determining the antioxidant1010 of the antivira oral-liquid and Ergan Tuirening oral-liquid preparations packing with polyethylene.Methods To use HPLC method for determining the antioxidant1010 in two oral-liquid preparations.Chromatographic column：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；mobile phase：acetonitrile-THF-water（60∶30∶10）；examination wave length：273 nm；column temperature：35℃；velocity：1.5 mL·min-1.Results Antioxidant1010 between in 0.60～361.92 mg·L-1range is good linear relationship，r＝0.999 7；the average recovery is 97.03%，RSD is 1.59%in the antivira oral-liquid and the average recovery is 97.62%，RSD is 1.09%in the ergan tuirening oral-liquid.Conclusions In two oral-liquid preparations exist antioxidant of packing material，we need to strengthen the control of the antioxidant.The method is simple，effective，and suitable for determinating Antioxidant 1010.

antioxidant；HPLC；oral liquid preparation

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.05.011

2014-02-20）