鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

金艳丽 （江苏省新沂市动物卫生监督所 221400）)

鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

金艳丽 （江苏省新沂市动物卫生监督所 221400）)

无菌操作采集江苏省新沂市唐店镇一养殖场部分10日龄病死雏鸡组织病料，进行细菌的分离培养与血清型鉴定。结果表明，分离菌株为鸡白痢沙门氏茵，结合雏鸡发病情况、临床症状和病理变化等确诊雏鸡死于鸡白痢沙门氏茵感染。对分离茵株进行药敏试验，发现该分离茵对丁胺卡那、庆大霉素和呋喃妥因敏感。

鸡 白痢 沙门氏 分离 鉴定 药敏 试验

鸡白痢沙门氏菌(SalmonellaPullor啪)极易引发鸡白痢，通常只感染3周龄之内的雏鸡，偶尔会导致成年鸡死亡。该菌除最易引起鸡发病，也可感染鸭、雏鹅 、珍珠鸡 、麻雀、鹌鹑等家禽和鸟类[1,2]。患病禽鸟与带菌禽鸟

体内的鸡白痢沙门氏菌随粪便排出，污染水源和饲料等，经消化道感染健康禽鸟。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 江苏省新沂市唐店镇一养殖场病死鸡数只。

1.1.2 试剂 普通营养琼脂、营养肉汤、麦康凯琼脂、S.S琼脂、鲜血琼脂培养基。

1.1.3 沙门氏菌属诊断血清 购于白兰州生物制品研究所。

1.1.4 药敏片 购于深圳市优康生物技术有限公司。

1.1.5 试验动物 30日龄健康小白鼠20只。

1.2 方法

1.2.1 剖检 剖检病死鸡观察其病理变化，以便对该鸡群所患疾病作出初步诊断 。

1.2.2 真菌的分离培养和寄生虫检查 取病死鸡肺脏组织进行真菌的分离培养以及寄生虫检查。

1.2.3 细菌分离培养 无菌操作挑取病死鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织，接种于营养肉汤培养基、普通营养琼脂、血液琼脂、麦康凯琼脂和S.S琼脂培养基上置37℃条件下恒温培养24h，观察细菌生长情况及菌落特征。将细菌纯培养物接种于三糖铁琼脂，37℃培养24h。

1.2.4 分离菌的形态观察 将病料直接涂片后。经革兰氏染色后镜检；挑取培养基上可疑菌落涂片，经革兰氏染色后镜检。

1.2.5 分离菌运动性观察取分离菌纯培养物。采用悬滴法检查细菌的运动性。

1.2.6 生化反应及血清型鉴定 将分离菌株接种于糖发酵管和其他生化反应管中，置于37℃温箱培养，每日观察；采用沙门氏菌诊断血清对分离菌株进行血清型鉴定。

1.2.7 动物试验 将纯培养的细菌接种于5ml营养肉汤。置于37℃培养24h。取20只小白鼠，雌雄各半。随机分为2组，试验组小白鼠为14只，腹腔注射菌液0.1ml/只；对照组小自鼠6只，注射pH值为7.6的生理盐水0.1ml/只，4h后不定时观察。如有小自鼠发生死亡，则从死亡小白鼠心、肝、脾、肺、肾中分离致病菌，染色后镜检，并进行生化试验和血清型鉴定，以确定分离菌是否为所接菌种。

1.2.8 药敏试验 将最终确定了血清型的沙门氏菌纯培养物分别用灭菌生理盐水冲洗，稀释成浓度为3хlOtcfu/ml的菌液，吸取稀释菌液均匀涂布于普通平板。室温放置5min后，分别贴上各种药敏纸片，37℃条件下培养16～18h，观察并测量抑菌环大小 。

3 结果

3.1 病理变化

剖检可见：病死鸡肝脏肿大，大面积充血、出血，质地极脆，易破裂；小肠段有坏死，腹腔内表面肌肉有点状出血；肺呈深红色，边缘有黑色坏死；有腹膜炎，腹腔器官相粘连。此病理变化与鸡白痢沙门氏菌病相似[3]。

3.2 真菌分离培养与寄生虫检查

取肺组织进行真菌分离培养未分离到任何真菌；于盲肠内检查到异刺线虫7条，于肠道检查到绦虫l条，除此之外，未见其他寄生虫和虫卵。

3.3 分离菌株培养特性

分离菌在营养琼脂培养基上呈圆形、微隆起、光滑湿润、半透明或灰白色、边缘整齐，为针尖大小“露珠状”小菌落；在麦康凯琼脂培养基上长出无色透明、圆形小菌落；在鲜血琼脂培养基上不溶血；在S.S琼脂培养基上形成中心黑色，边缘灰白的透明小菌落；营养肉汤培养呈均匀混浊，管底有少量沉淀物；三糖铁培养基斜面为红色，底层为黑色。

3.4 分离菌株的形态和运动性

油镜下观察病料涂片，可发现少量革兰氏阴性小直杆菌；镜检菌落涂片，可发现大量短小、两端钝圆、多数单个存在的革兰氏阴性小杆菌，无荚膜 、无芽胞。经悬滴法检查发现该分离菌没有运动性。

3.5 血清型鉴定

将分离菌株与沙门氏菌A～F多价血清进行玻片凝集反应，结果为阳性。进一步用单因子血清与分离菌株进行凝集反应，结果均与O因子发生凝集反应。

3.6 生化特性

生化反应结果见附表。从附表可以看出，该分离菌不发酵麦芽糖、卫矛醇、乳糖、蔗糖、木糖，不产生硫化氢，不能利用枸橼酸盐；具有赖氨酸脱羧酶和鸟氨酸脱羧酶。发酵葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇、鼠李糖。

附表 分离菌的生化特性

附图 分离菌株的药敏试验结果

3.7 动物试验

试验组小白鼠于12h内死亡2只，24h内全部死亡；并且能从死亡小白鼠的心、肝、脾、肺、肾等内脏器官分离到细菌，通过革兰氏染色镜检、生化试验和血清型鉴定确定为接种菌。而对照组小白鼠全部健活。

3.8 药敏试验

从纯培养的普通营养琼脂平板上挑取1个典型菌落，接种于5ml营养肉汤中，37℃培养18h，用灭菌棉试子分别蘸取菌液均匀涂布于普通平板，室温下放置3～5min,用无菌镊子夹取药敏纸片，紧贴于琼脂上，37℃培养18～24h后观察，结果见附图。从附图可看出，分离菌株对于丁胺卡那，庆大霉素和呋喃因最敏感，其余药物次之。

4 讨论

4.1 分离菌为鸡白痢沙门氏菌

取病死鸡组织进行真菌培养，未分离到任何真菌，进行体表和体内寄生虫检查，在剖检鸡盲肠内共发现7条依次线虫，在肠道检查到1绦虫，未见其他寄生虫和虫卵，因此，排除该批雏鸡死于真菌感染和寄生虫病。无菌操作挑取病死鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织，进行细菌的分离培养，结果分离出1株细菌，通过血清鉴定，发现分离菌株与沙门氏菌A-F多价血清均发生凝聚反映，说明分离菌是沙门氏菌属的细菌，分离菌能与O因子血清发生凝聚反应，可确定该菌是沙门氏菌D群中的血清型。该菌不举运动性。结合生化反应结果可确认分离菌株属于沙门氏菌属D群中的鸡白痢沙门氏菌。

4.2 沙门氏菌可经种蛋垂直传播

研究表明，沙门氏菌是重要的是肠道致病菌，其致病力可因细菌毒力和宿主反映的不同而异，轻者仅表现腹泻，重者可呈现系统感染，如败血症、迁徙性病灶等。鸡白痢沙门氏菌不仅能水平传播，也能垂直传播。鸡白痢沙门氏菌持续感染产鸡蛋，感染3周后，T细胞免疫增强而产蛋鸡体内细菌的数量减少，特异性抗体在成年鸡只发生很小的变化，当细菌再次侵入，刺激机体再次产生抗体抵御感染，这说明非特异性免疫在鸡白痢沙门氏菌感染扮演主要角色，形成带菌免疫状态，导致沙门氏菌传递给蛋。

4.3 避免产生耐药性

通过药敏试验发现该分离菌对丁胺卡那、庆大霉素和呋喃因最敏感。在生产中，不同地区鸡白痢沙门氏菌对抗生素药物的敏感性不同，同一地区不同养殖场该菌的药敏情况也可能存在差异，故在应用药物防治鸡白痢时，应先进行药敏试验，选择敏感药物进行治疗。同时，应注意交替用药，以防止产生耐药性。

4.4 注意鉴别诊断

近年来，鸡白痢在流行病学、临床症状、病理变化等方面出现了新特点，使得诊断该病的难度增加，只是育成鸡及成年鸡因该病而造成的死淘率较高。在生产中，诊断时尤其要注意该病与禽霍乱、鸡大肠杆菌病、马立克病的鉴别诊断。鸡白痢可造成大批死亡，这点易与禽霍乱发生混淆；鸡白痢可引起患病鸡腹部下垂，卵巢变性等，这与鸡大肠杆菌病的临床症状相似，育成鸡发生鸡白痢时，可发生心脏增生性结节，应注意与内脏型马立克氏病的鉴别诊断，以免造成误诊[4-5]。

[1] 王育章, 岳兴建, 胡锦矗等. 绿尾虹雉消化系统形态学的初步研究[J]. 西华师范大学学报: 自然科学版, 2007(1): 7-10.

[2] 蔡宝祥. 家畜传染病学3版[M]. 北京: 中国农业出版社, 1996:55-61.

[3] 陈宏智, 魏明奎, 吴炽德. 成鸡白痢沙门氏菌病的病理学诊断与防治[J]. 河南农业科学, 2006(12): 110-111.

S852.61

A

1007-1733(2014)01-0012-03

2013–11–22）