贵州省牛传染性鼻气管炎、副结核病和新孢子虫病血清学调查

皮 泉，陈善忠，洪尼宁

（1.贵州省动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550008；2.贵州省夏云农场，贵州安顺 561104；3.贵阳医学院基础医学院生理学教研室，贵州贵阳 550004）

养牛业是畜牧业的重要组成部分，积极预防控制严重影响养牛业及社会稳定的口蹄疫、牛海绵状脑病等重大传染病的同时，加强其他病毒、细菌和寄生虫类传染病防控也日益显得重要。牛传染性鼻气管炎（Infectious bovine rhinotracheitis，IBR）是由牛疱疹病毒1型（Bovine hepervirus-1，BHV-1）引起的以牛呼吸道为主要症状的急性、热性、接触胜传染病，其流行病学潜伏性及再活化周期对控制BHV-1格外重要［1］。该病在世界各地都有发生，常引起大规模饲养场暴发流行，影响奶牛产奶量、公牛繁殖力、役牛使役力，还可导致孕牛流产、犊牛死亡，给养牛业造成巨大经济损失，被世界动物卫生组织（OIE）定为必须报告的动物传染病，也是我国二类动物疫病，血清学调查表明该病在我国部分省（区）普遍存在［2-6］。副结核病是分支杆菌属副结核分支杆菌（Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis，MAP）引起的一种以发病后期过度消瘦和持续腹泻为主要症状的牛慢性传染病，该病属多种动物共患病，主要影响牛等反刍动物，也可能与人类克罗恩病有关［7］。牛新孢子虫病是原生动物顶覆门的犬新孢子虫（Neosporacaninum）引起的一种主要以孕畜流产、死胎及新生畜运动、神经系统疾病为特征的传染病，其病原体可寄生于牛、绵羊、山羊、犬、马、鹿、小鼠等中间宿主或终末宿主犬，主要传播途径是先天性感染和卵囊散播，该病是奶牛流产一个重要的原因，迄今已有70多个国家和地区报道奶牛感染新孢子虫［8］，国内大部分牛场也不能幸免［9-12］。为深入了解牛传染性疫病在贵州省的流行状况，我们对牛传染性鼻气管炎、副结核病和新孢子虫病这3种病毒、细菌及寄生虫代表性疫病进行了血清学调查。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 待检血清采自省内28个场（户），按常规方法采血、分离血清，置-20℃冷冻备用。

1.1.2 试剂 牛疱疹病毒1型，CATTLETYPE BHV1gB Ab（德国 Labor Diagnostik Leipzig）；副结核分支杆菌 Cattle typeA Map Ab（德国 Labor Diagnostik Leipzig）；犬新孢子虫抗体检测试剂，Neospora Caninum Antbody Test（美国Idexx）。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 按商业试剂盒说明书进行操作，样品稀释时说明书中规定的血清及稀释液体积增加1倍，便于充分混匀以减少检测误差。

1.2.2 数据分析 χ2检验使用下载软件《卡方检验计算器》，使用发生数格式，将发生数（阳性数）和样本数（总数）输入相应位置，即可得χ2值及P范围。

2 结果

随机抽取9市（州）11县的13个乡（镇）散养户及存栏数超过50头的15个规模养殖场，采集牛血清920份，抗体检测结果（表1）表明牛血清牛疱疹病毒1型、副结核分支杆菌和犬新孢子虫抗体牛群阳性率分别为64.29%（18／28）、57.14%（16／28）和53.57%（15／28），其中规模养殖场群阳性率分别为73.33%（11／15）、66.67%（10／15）和66.67%（10／15），散养户群阳性率分别为 46.15% （6／13）、46.15%（6／13）和38.46%（5／13）；奶牛群阳性率分别为62.50%（5／8）、100%（8／8）和100%（8／8），肉牛群阳性率分别为65.00%（13／20）、40.00%（8／20）和35.00%（7／20）。牛疱疹病毒1型和副结核分支杆菌、牛疱疹病毒1型和犬新孢子虫以及副结核分支杆菌和犬新孢子虫双抗体群阳性率分别为35.71%（10／28）、35.71%（10／28）和 50.00%（14／28），3种抗体群阳性率为25.00%（7／28），其中规模养殖场2种抗体群阳性率分别为46.67%（7／15）、53.33%（8／15）和60.00%（9／15），3种抗体牛群阳性率为40.00%（6／15）。散养户群2种抗体阳性率分别为23.07%（3／13）、15.38%（2／13）和38.46%（5／13），3种抗体牛群阳性率为7.69%（1／13）；奶牛2种抗体群阳性率分别为62.50%（5／8）、62.50%（5／8）和 100% （8／8），3种抗体牛群阳性率为62.50%（5／8），肉牛2种抗体群阳性率分别为25.00%（5／20）、25.00%（5／20）和30.00%（6／20），3种抗体牛群阳性率为10.00%（2／20）。

表1 贵州牛血清抗体检测结果Table 1 Results of bovine serum antibody detection in Guizhou

牛血清牛疱疹病毒1型、副结核分支杆菌和犬新孢子虫抗体总体阳性率分别为66.85%（615／920）、29.89%（275／920）和32.61%（300／920），其中规模养殖场阳性率分别为78.47%（565／720）、27.78%（200／720）和35.42%（255／720）。散养户阳性率分别为25.00%（50／200）、37.50%（75／200）和22.50%（45／200），两种养殖方式同病种阳性率差异显著（P＜0.01）；奶牛群总体阳性率分别为82.50%（495／600）、28.33%（170／600）和36.67%（220／600），肉牛群总体阳性率分别为 37.50%（120／320）、32.81% （105／320）和 25.00% （80／320），奶牛与肉牛副结核病阳性率差异不显著（P＞0.05），牛传染性鼻气管炎和新孢子虫病阳性率差异显著（P＜0.01）。牛疱疹病毒1型和副结核分支杆菌、牛疱疹病毒1型和犬新孢子虫以及副结核分支杆菌和犬新孢子虫2种抗体阳性率分别为15.76%（145／920）、23.37%（215／920）和9.24%（85／920），3种抗体阳性率为4.35%（40／920），其中规模养殖场2种抗体阳性率分别为18.06%（130／720）、28.47%（205／720）和6.94%（50／720），3种抗体阳性率为4.17%（30／720），散养户2种抗体阳性率分别为7.50%（15／200）、5.00%（10／200）和17.50%（35／200），3种抗体阳性率为5.00%（10／200），两种养殖方式同病种2种抗体阳性率差异显著（P＜0.01），3种抗体阳性率差异不显著（P＞0.05）；奶牛2种抗体阳性率分别为19.17%（115／600）、28.33%（170／600）和7.50%（45／600），3种抗体阳性率为4.17%（25／600），肉牛2种抗体阳性率分别为9.38%（30／320）、14.06%（45／320）和12.50%（40／320），3种抗体阳性率为4.69%（15／320），奶牛与肉牛同病种2种抗体阳性率差异显著（牛疱疹病毒1型和副结核分支杆菌、牛疱疹病毒1型和犬新孢子虫P＜0.01，副结核分支杆菌和犬新孢子虫0.01＜P＜0.05），3种抗体阳性率差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论

本次牛传染性疫病血清学调查涉及贵州省内9市（州）11县的13个乡（镇）散养户及15个规模养殖场，样品随机抽取，采样畜群未接种过所调查病种疫苗。血清牛疱疹病毒1型、副结核分支杆菌和犬新孢子虫抗体总体阳性率分别为66.85%、29.89%和32.61%，群阳性率分别为64.29%、57.14%和53.57%，这为区别防控这类疫病提供了依据。

希尼尼根等［2］报道内蒙古牛疱疹病毒1型抗体总体阳性率为29.5%（135／457），贺晓龙等［3］报道青海阳性率为47.62%（200／420），杨泽林等［4］报道重庆总体阳性率为4.61%，其中奶牛、黄牛和水牛阳性率分别为5.34%、4.92%和0%。相比之下，贵州省牛血清牛疱疹病毒1型抗体检测阳性率相对较高（P＜0.01），虽然群阳性率64.29%（18／28）低于河南省场阳性率100%（24／24）［5］（P＜0.01）。这次调查奶牛总体阳性率为82.50%（495／600），明显高于2004年血清中和试验5.43%（29／534）的总体阳性率［6］（P＜0.01），考虑到检测试剂及采样地点等因素的影响，该病在贵州省的流行情况有待进一步调查。

动物机体感染副结核分支杆菌后，呈现细胞免疫和体液免疫的规律变化，机体抵抗力强时，常表现为细胞免疫反应，机体出现腹泻、消瘦，甚至衰竭时，抗体水平提高，ELISA可用于识别感染牛群、筛选确定可能受感染的动物个体，相对于粪便培养检测感染动物早期疾病过程，ELISA检测率在27%～45%之间，但这也取决于所抽样的牛群，重度排菌者检出率可达75%，轻度排菌者检出率仅15%［13-14］。亚临床感染动物过境的结果不仅仅是感染动物进入未感染牛群，而是一个国家牛群整体MAP患病率的提高，2002年—2007年间美国阳性奶牛群增加了一倍多、日本检出54%的感染／患病动物来自美国就是例证［15］。此次调查显示我省副结核分支杆菌抗体总体阳性率为29.89%、总体群阳性率为57.14%，其中奶牛总体阳性率为 28.33% （170／600），群阳性率为100%（8／8），考虑我省畜群管理和经济效益的实际情况，选用国际上认可的商业ELISA试剂，在引种、分群等环节加强监测对防控副结核病非常重要。

奶牛犬新孢子虫病呈世界分布，我国及周边国家和地区均有报道，感染率在10%～40%不等，严重危害养牛业发展，邹世颖等［9］曾报道我国北方6省市的血清阳性率为8.6%，沈莉萍等［10］报道上海奶牛阳性率为5.08%（63／1 239），各场阳性率变幅较大（0～44.23%）。此次调查显示贵州省新孢子虫抗体总体阳性率为32.61%、群阳性率为53.57%，而奶牛总体阳性率为36.67%（220／600）、群阳性率为100%（8／8），检测结果不容乐观。

血清学调查表明贵州省部分牛群存在不同程度的牛疱疹病毒1型、副结核分支杆菌或犬新孢子虫感染，深入开展病原学调查、采取综合防控措施显得非常必要。

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