春柴胡中柴胡皂苷a与d的含量测定

朱明恒

(南京医科大学附属苏州医院， 江苏 苏州 215002)

柴胡是伞形科(Umbelliferae)柴胡属Bupleurum植物，为我国传统的中药，在《神农本草经》中被列为上品。具有解表和里、疏肝解郁、升举阳气之功效，是治疗少阳证的首选用药，中国药典收载的柴胡为伞形科植物柴胡(BupleurumchinenseDC).或狭叶柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWilld.)的根[1]。由于我国柴胡属植物品种众多.资源分布广泛，各地根据当地所产柴胡作为习惯用药的较为普遍，江苏省大部分地区即习用狭叶柴胡春季采挖带根的全草，又称“春柴胡”，(收录于《江苏省中药材标准》(1989年版))。本院现在使用的即为此品种。而2010年版药典新增了柴胡的含量测定标准，即含柴胡皂苷a和d的总量不得少于0.30%。故本文运用HPLC法测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量，希望对地方用药的质量控制和规范用药提供借鉴[2～3]。

1 仪器与试药

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，Sartorius CP224S型电子分析天平。甲醇、乙腈均为色谱纯，氨水为分析纯，重蒸馏水为自制。柴胡皂苷a对照品(110777-200507)，柴胡皂苷d对照品(110778-200506)，均由中国药品生物制品检定所提供。春柴胡药材购自苏州天灵中药饮片有限公司(批号110918，120211，120603)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈为流动相A、以水为流动相B照表1进行梯度洗脱；流速：1 mL·min-1；柱温为室温，检测波长210 nm；进样量10 μL。

表1 流动相的洗脱梯度

2.2 对照品溶液的制备 精密称定柴胡皂苷a、d对照品适量，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成柴胡皂苷a浓度为0.4018 mg·mL-1、柴胡皂苷d浓度为0.5238 mg·mL-1的溶液，备用。

2.3 供试品溶液的制备 取样品粉末(过四号筛)约0.5 g，精密称定，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25 mL，30℃水温超声处理30 min，滤过，用甲醇20 mL分2次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.4 标准曲线的制备 精密吸取柴胡皂苷a、d对照品溶液1、2、5、10、15 μL，注入高效液相色谱仪中测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，分别得到回归方程：柴胡皂苷a：Y=148203X+20919，r=0.9990，柴胡皂苷d：Y=149457X+16283，r=0.9992。表明柴胡皂苷a在0.4018～6.027 μg，柴胡皂苷d在0.5238～7.857 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验 精密吸取柴胡皂苷a、d对照品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测定峰面积，计算柴胡皂苷a、d的RSD分别为1.70%、1.28%。

2.6 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样分析，计算得柴胡皂苷a、d的RSD分别为1.77%、1.81%。

2.7 重复性试验 取同一批样品按“2.3”项下供试品溶液制备方法平行制备6份，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算柴胡皂苷a、d的RSD分别为1.84%、1.92%。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量样品粉末6份，每份约1g，分别加入柴胡皂苷a 对照品溶液2mL，柴胡皂苷d对照品溶液4 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件测定，柴胡皂苷a的平均回收率为91.19%，RSD为1.83%；柴胡皂苷d的平均回收率为92.76%，RSD为1.43%。(见表2、3)

表2 柴胡皂苷a加样回收率试验结果(n=6)

表3 柴胡皂苷d加样回收率试验结果(n=6)

2.9 样品测定 取各样品适量按按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件测定，结果见表4。

表4 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

柴胡皂苷a、d均属于五环三萜类皂苷，具有类似的化学结构。在提取过程中若受高温或酸性的影响，易使其环氧醚键开环，稳定性较差，所以本实验采用弱碱性溶剂5%氨水一甲醇溶液提取，效果较好。而对照品溶液配成后亦应避光低温保存。

柴胡通常只将根作为药用部位，这样就造成其地上部分药材的浪费。春柴胡药材以春季带根的全草入药，把柴胡地上部分同样也作为药用资源。但这部分药材中还含有黄酮、挥发油、木脂素等活性成分。通过对春柴胡有效成分进一步的研究，从而达到全面的质量控制，对于柴胡资源充分而合理的利用具有重要的意义。

参考文献：

[1]中华人民共和国药典.2010年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：264.

[2]肖功胜，杨云，刘富岗，等.柴胡皂苷提取和含量测定方法研究[J].中成药，2009，31(4)：595-598.

[3]余菁，梁卫青.高效液相法测定不同产地柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量[J].浙江中医药大学学报，2007，31(3)：374-375.