Per2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义*

张艳红 赵桂凤 尹奎夫 刘美华 魏秀平

(1.潍坊市妇幼保健院内科；2潍坊市人民医院，山东 潍坊 261011)

生物体中普遍存在的生物钟系统，调控昼夜节律有条不紊的运转。目前研究证实这一系统的紊乱对肿瘤的发生起重要作用，是当今肿瘤研究的前沿课题之一。在哺乳动物中，Period基因(Per)、Clock基因是最早发现的生物钟基因。学者研究证明，在乳腺癌等多种恶性肿瘤中Per2基因的表达明显下降[1]，而在非小细胞肺癌中的研究较少。本研究采用免疫组化法检测非小细胞肺癌(NSCLC)中Per2蛋白的表达，探讨Per2蛋白与非小细胞肺癌发生、发展之间的关系。

1 资料与方法

1.1资料 选取2008年1月至2013年2月在潍坊市人民医院、潍坊市妇幼保健院手术治疗的非小细胞肺癌组织标本60例，全部经过病理组织学证实。其中男性 38例，女性 22例，年龄39～76岁，中央型24例，周围型36例。鳞癌28例，腺癌32例。有淋巴结转移 26例，无淋巴结转移34例。高、中分化34例，低分化26例。Ⅰ期14例，Ⅱ期28例，Ⅲ期18例。20例正常肺组织均经病理HE染色证实为正常肺组织。

1.2方法 鼠抗人per2单克隆抗体购自上海天呈科技有限公司，免疫组化SP试剂盒购自北京北瑞达医药科技有限公司。按照说明书操作，组织蜡块切片，二甲苯脱蜡至水，抗原修复，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。Per2染色阳性标准：细胞核或者细胞质出现黄色或者棕褐色颗粒。随机在高倍镜下选10个视野，各计数100个细胞，0分：无阳性细胞；1分：阳性细胞1%～25%；2分：阳性细胞26%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。

1.3统计学处理 采用SPSS17.0统计学软件，计数资料的比较采用卡方检验。

2 结 果

2.1Per在非小细胞肺癌和正常肺组织中的表达 Per蛋白在正常肺组织中的阳性表达率和在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率分别为95.0%、71.7%，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2Per蛋白表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系 Per蛋白表达缺失与性别、年龄、病理分型、大体分型、淋巴结转移等因素无相关性(P>0.05)，与非小细胞肺癌的分化程度和TMN分期有关(P<0.05，表1)。

表1 Per蛋白表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系

3 讨 论

学者们最早在哺乳动物的下丘脑视交叉上核(SCN)中发现了生物钟基因，后来发现在外周组织中也有生物钟基因表达[2]。至今为止，已在哺乳动物体内发现了clock、Per1、Per2、Bmal1等10种基因起到调节昼夜节律的作用[3]。在这个机制中，Clock/Bmal1异二聚体与Cry、Per、Re-Erba基因启动子部位的e盒结合，使以上基因的转录被激活，Per、Cry蛋白直接作用于Clock/Bmal1异二聚体，从而反馈抑制基因继续出现转录。人体的生物钟由这种负反馈循环所构成。Per2在调节生物周期节律方面起到重要作用，当Per2出现突变或缺失后，节律系统会出现紊乱。在研究家族性和遗传性乳腺癌时，Langmesser S 等[4]发现，在肿瘤组织中，Per2基因的表达明显下降，表明家族性乳腺癌的一个重要原因是生物钟基因的表达出现紊乱。王雅平等[5]通过检测Per2在人结直肠癌中的表达情况，显示在人结直肠癌中Per2的表达较正常降低，与人结直肠癌患者的年龄、组织学分级、浸润深度、TMN分期相关。本项研究显示，Per2蛋白在NSCLC组织和正常肺组织中均有表达，Per2蛋白在NSCLC中的表达较正常组降低明显(P<0.05),Per2蛋白的表达与NSCLC的分化程度和TMN分期有关，肿瘤分化程度越低，Per2蛋白的阳性表达率越低(P<0.05)。显示在NSCLC中Per2蛋白表达异常，与NSCLC的发生、发展关系密切。

通过对原癌基因、抑癌基因的调控，生物钟基因在肿瘤的发展中发挥作用。Wood PA等[7]研究发现，在移植瘤细胞中，Per2蛋白是因为组织缺氧引起的血管内皮生长因子激动剂活性受到抑制，从而使肿瘤血管生成受到抑制。Fu L等[7]发现，在肿瘤发生过程中,小鼠节律基因mPer2起着重要作用，与mPer2突变小鼠相比较，野生型小鼠发生肿瘤的风险明显降低。Xia HC等[8]研究发现，Per2的过表达会引起细胞分化出现减少，细胞凋亡快速，同时也使凋亡相关基因的表达出现改变。

通过对生物钟基因Per 2在非小细胞肺癌中表达的研究，有助于进一步研究其在非小细胞肺癌发生、发展中的作用，为非小细胞肺癌的预防、早期治疗提供新的帮助。

[1] Davis S，M irick D K.Circadian disruption，shift work and the risk of cancer：a summary of the evidence an d studies in Seattle[J].Cancer Causes Control，2006，17(4)：539-545.

[2] Fu L，Pelicano H，Liu J，et al.The circadian gene Period plays an important role in tumor suppression and DNA damage response in vivo[J].Cell，2008，111(1)：41-50.

[3] Chen ST，Choo KB，Hou MF，et al.Deregulated expression of the PER1，PER2 and PER3 genes in breast cancers[J].Carcinogenesis，2009,26(7)：1241-1246.

[4] Langmesser S,Tallone T,Bordon A,et al.Interaction of circadian clock protein mPer2 and CRY with Bmall and Clock [J].BMC Mel Biol,2008,9：41.

[5] 王雅平，华鲁纯，蒿汉坤，等.生物钟基因hPer2在人结直肠癌肿的表达及临床意义[J].中华实验外科杂志,2009,11(7):423-431

[6] Wood PA，Yang X，Taber A，et al.Period 2 mutation accelerates ApeMin/+tumorigenesis[J ].MelCancerRes，2008，6(11)：1786-1793.

[7] Fu L，Pelicano H，Liu J，et al.The circadian gene Period2 plays an important role in tumor suppression and DNA damage response in vivo[J].Cell，2010，(1)：41-50.

[8] Xia HC，Niu ZF，Ma H，et al.Deregulated expression of the Perl and Per2 in human gliomas[J].Can J Neurol Sci，2010，37(3)：365-370.