生殖道解脲支原体检测方法的比较及应用

王紫燕 张永乐 周强

1苏州大学附属儿童医院检验科 江苏苏州 215003

2杭州第六人民医院检验科 浙江杭州 310014

生殖道解脲支原体检测方法的比较及应用

王紫燕1张永乐2周强2

1苏州大学附属儿童医院检验科 江苏苏州 215003

2杭州第六人民医院检验科 浙江杭州 310014

目的:分析荧光定量PCR法与液体培养法对生殖道解脲支原体的检出率及临床应用。方法:收集1299例患者生殖道分泌物标本，其中302例标本同时采用荧光定量PCR法和液体培养法检测Uu，997例标本仅采用荧光定量PCR法检测Uu。结果:荧光定量PCR法和液体培养法同时检测302例标本，PCR法检出Uu 116例，阳性率为38.41%，液体培养法检出Uu 81例，阳性率为26.82%，PCR法阳性率显著高于培养法(X2=9.23，P＜0.05)。结论:女性感染Uu阳性率较男性要高。Q－PCR法Uu检出率高于液体培养法，临床应二种方法结合使用。

生殖道;解脲支原体;荧光定量PCR

解脲支原体(Ureaplasm urealyticum，Uu)是泌尿生殖道非淋菌性炎症中常见的病原体，在男性易引起非细菌性前列腺炎、非淋菌性尿道炎、男性不育等，在女性易引起尿道及生殖器官感染、不明原因的流产、宫外孕等，也是导致女性不孕不育的病原体之一［1］。目前临床应用最广泛的检测方法有荧光定量PCR法(fluorescence quantitative PCR，Q－PCR)和支原体培养法，现就两种方法学对Uu的检出率及临床应用作一分析。

1 资料与方法

1.1 研究对象收集2009年1－10月在杭州第六人民医院性保门诊就诊的1299例患者生殖道分泌物标本，其中男801例，平均年龄(27.5± 6.6)岁，女498例，平均年龄(28.4±4.5)岁。

1.2 标本采集用无菌棉拭子取男性前尿道1－2cm处分泌物，采集女性分泌物时，在阴道或宫颈内旋转并至少停留20秒，以获得较多细胞。

1.3 方法

1.3.1 荧光定量PCR检测向无菌棉拭子的标本中加1 ml生理盐水，震荡混匀数秒，转入1.5 ml的离心管中，12000 r/min离心5 min，弃上清，在沉淀中加入50 ulDNA裂解液，100℃10min，转入4℃冷却30min，12000 r/min离心5 min，上清即为PCR反应模版。

1.3.2 液体培养法支原体液体培养检测卡第一排第一孔为阴性对照。将采集的标本拭子插入培养瓶挤压旋转数次，使拭子中的分泌物混匀在培养液中，在除阴性孔的检测卡其他孔加入100 ul含标本的培养液，再加两滴石蜡油，盖上盖子放入培养箱培养24－48小时，在48小时后观察结果，反应孔呈清晰透明红色为Uu阳性，混浊红色为污染，黄色或橙黄色为阴性。

1.4 统计学处理采用统计分析用spss17.0统计软件检测分析数据，阳性率的差异性采用X2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

1、两种方法学检测结果比较:302例生殖道分泌物标本同时采用两种检测方法检测结果见表1，其中Q－PCR法检出Uu 116例，阳性率为38.4%，培养法检出Uu 81例，阳性率为26.8%，Q－PCR法敏感性明显高于培养法(X2=9.228，P＜0.05)。

表1 Q－PCR法和液体培养法检测解脲支原体的阳性率差异

3 讨论

支原体是一群大小介于细菌与病毒之间，能够独立生活的微生物，支原体无细胞壁，呈高度多形性，繁殖方式多样。Uu是引起人类泌尿生殖道感染的主要病原体之一，目前临床常用的检测方法为液体培养法和荧光定量PCR技术。

液体培养法准确率高，被人们认为是Uu检测的"金标准"［2］。同时培养法还能通过药敏试验，得出病原体的耐药性，为临床医生提供可靠治疗依据。但是培养要求条件比较高，从标本采集，运送都有较高的要求，同时受是否使用抗生素的影响。当标本采集过少，运送时间过长时可导致培养失败，患者正在使用抗生素或停药时间较短时采集标本也可能会出现假阴性。这些条件的存在是致使液体培养法阳性率不高的关键所在。荧光定量PCR技术是近年兴起的技术，它以灵敏度高、特异性强而受欢迎，但是常规PCR较易出现产物污染导致假阳性的产生，而荧光定量PCR技术在密闭的反应管中检测，可杜绝产物污染。虽然荧光定量PCR有较高的灵敏性和特异性，但是PCR技术不能判断病原体是否存活，病原体的残核存在PCR也能检出。另外，PCR不能进行药物敏感度的判定。

我们通过实验证实302例生殖道分泌物标本采用液体培养法阳性率为26.8%，而Q－PCR法阳性率为38.4%，Q－PCR法敏感性明显高于传统培养法。另外，1299例标本Q－PCR总体阳性率为36.6%，这与报道的结果一致［3］。

综上所述，在解脲支原体感染的临床检测中我们应该培养法与荧光定量PCR相结合，这不仅提高了临床病原体的检出率，达到早期检测避免漏检现象，同时培养的药敏结果也给临床医师提供正确选择抗生素的有效途径。

［1］陈春英，杨舒盈，朱根海.女性生殖道感染治疗前后解脲支原体荧光定量PCR检测的假阳性分析［J］.中国优生与遗传杂志，2007，15 (3):32－33.

［2］Misteli T.Protein dynamics:implications for nuclear architecture and gene expression［J］.Science，2001，291(5505):843－847.

［3］张永乐，章松平，马兰等.检测早期梅毒螺旋体感染的4种方法比较［J］.中国皮肤性病学杂志，2008，22(2):118－119.

R446.1

B

1009－6019(2014)10－0166－02