洁阴洗剂的质量标准研究

王宏源姚千足

（1 江苏省昆山市中医医院，江苏 昆山 215300；2 南京中医药大学，江苏 南京 210046）

洁阴洗剂的质量标准研究

王宏源1姚千足2

（1 江苏省昆山市中医医院，江苏 昆山 215300；2 南京中医药大学，江苏 南京 210046）

目的建立洁阴洗剂的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别蛇床子素，采用酸性染料比色法测定洁阴洗剂中生物总碱的含量。结果洁阴洗剂中含有蛇床子素，且小檗碱浓度在0.0187～0.0936 mg/mL范围内线性关系良好，平均回收率为99.03%，RSD为2.34%。结论薄层色谱法快速简便。含量测定方法简便易行，稳定性、重复性、精密度高，具有较好的专属性和准确度。

洁阴洗剂；蛇床子素；小檗碱；薄层色谱；酸性染料比色法

洁阴洗剂是我院自制的外用中药洗剂，其处方由蛇床子、苦参、土荆皮、百部、马鞭草、黄柏、冰片等药味组成，具有清热燥湿，杀虫止痒的功效，临床用量较大。为有效控制其产品质量，确保临床疗效，本文建立了制剂中有效成分蛇床子素的薄层色谱鉴别方法，并采用酸性染料比色法对主要药味黄柏中含有的小檗碱进行含量测定，取得了较为理想的结果，可作为该制剂质量控制的依据。

1 仪器与试药

760CRT型紫可见分光光度计；硅胶预制板G。甲醇，三氯甲烷等试剂均为分析纯，蛇床子素标准品；盐酸小檗碱标准品；洁阴洗剂（昆山市中医医院制剂室提供，500毫升/瓶，批号131207、131117、131013）。

2 方法与结果

2.1 蛇床子素薄层色谱鉴别

2.1.1 供试品的制备：取洁阴洗剂制剂500 mL，蒸干，残渣加入5 mL 95%乙醇，超声溶解30 min，移至25 mL容量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度为止，备用。

2.1.2 阴性对照的制备：按比例称取制剂处方药材，不加蛇床子，置500 mL容量瓶中第一次加水320 mL煎煮2 h，第二次加水200 mL，煎煮1 h。合并滤液，过滤。加入冰片，蒸干，残渣加入5 mL 95%乙醇，超声溶解30 min，过滤，移至5 mL容量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度为止，备用。

2.1.3 对照品溶液的制备：精密称取蛇床子素标准品1.0 mg，置于2 mL容量瓶中，用适量的95%乙醇溶解，再用95%乙醇稀释至刻度为止，制成0.50 mg/mL的对照品溶液，备用。

2.1.4 薄层色谱的鉴别：吸取供试品溶液、阴性对照溶液、标准品溶液各1 µL，分别点样于硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯（20∶1）为展开剂[1]，检视斑点的位置。供试品溶液在色谱中含有对照品溶液在色谱中的斑点，而阴性对照溶液不含有对照品溶液在色谱中的斑点，实验结果表明供试品溶液中含有蛇床子素（图1）。

2.2 总生物碱含量测定（以盐酸小檗碱计）：精密称取盐酸小檗碱对照品5.4 mg制成浓度为0.0936 mg/mL的对照品溶液，取医院自制的洁阴洗剂制剂三份，为批号131207、131117、131013的三个批次，备用。以溴甲酚紫为酸性染料，柠檬酸-柠檬酸钠为缓冲液、pH为3.2，缓冲液用量为10.0 mL，酸性染料用量为1.0 mL，三氯甲烷用量为10 mL，萃取2次，每次5 mL。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液1 mL置分液漏斗中，加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH=3.2）10.0 mL，溴甲酚紫溶液1.0 mL摇匀，加入三氯甲烷，振摇提取2次，每次5.0 mL分取三氯甲烷层，合并两次提取液，用紫外分光光度仪在200～500 nm范围内扫描（图2、3）。

由扫描结果可知，盐酸小檗碱标准品与供试品在409 nm处均有明显的吸收峰，故可用409 nm作为该实验的检测波长。

2.3 线性关系考察：精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置5 mL容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度。分别精密量取稀释后的对照品溶液各1.0 mL，分别置分液漏斗中，加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH=3.2）10.0 mL，溴甲酚紫溶液1.0 mL摇匀，加入三氯甲烷，振摇提取2次，每次5.0 mL分取三氯甲烷层，合并两次提取液，以相应的试剂为空白。照紫外可见分光光度法[3]，于409 nm波长处测定吸光值，得到线性回归方程：Y=6.0038X+0.0911，R=0.9963。结果见表1。

表1 标准曲线考察结果

2.4 精密度试验：精密量取对照品溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，精密量取1 mL，照2.3项下的方法自“置分液漏斗中”起，重复测定5次，结果RSD=1.09%，精密度良好。

图1 蛇床子素薄层的薄层色谱图(1：蛇床子素对照品；2：洁阴洗剂（批号131117）；3：阴性对照)

图2 盐酸小檗碱对照品溶液的全波长扫描

图3 供试品溶液的全波长扫描

2.5 稳定性试验：精密量取供试液1 mL，置25 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，精密量取1 mL，照2.3项下方法自“置分液漏斗中”起，每隔10 min，共60 min内测定吸收度，吸光度平均值0.222，RSD=2.57%，结果表明供试品液在60 min内稳定性良好。

2.6 重复性试验：取医院制剂制备6份供试品液，精密量取各供试品液1 mL，置于25 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，再精密量取1 mL，依法测定吸光度。见表2。

表2 重复性实验结果

2.7 加样回收率实验：精密量取已知含量供试品溶液1 mL，置于25 mL容量瓶内，精密吸取上述溶液1 mL和浓度为0.0187 mg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液1 mL，混合后取1 mL，依法测定吸光度，平行操作六份，回收率均值为99.03%。

2.8 含量测定：按上述方法，测定三批洁阴洗剂总生物碱含量（以小檗碱计），各3份，共9份供试品。所测得的含量为稀释25倍的样品含量，经计算得到最终的样品含量，批号：131013平均含量0.5541 mg/mL，RSD1.63%；批号：131013平均含量0.5531 mg/mL，RSD1.64%；批号：131013平均含量0.5550 mg/mL，RSD1.24%。

2.9 制剂含量标准：依据2.8，取三个批次样品的总生物碱（以小檗碱计）平均含量的80%暂作为该制剂的质量标准，供医院今后生产该制剂时作为参考，即暂定每瓶样品中总生物碱（以小檗碱计）含量不得低于0.4433 mg/mL。

3 讨 论

小檗碱的含量测定我们最初采用紫外分光光度法直接测定，分别将盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，阴性对照品溶液和供试品溶液蒸干后加入甲醇溶解，再依次测各溶液的吸光度[2]。实验对小檗碱对照品、制剂供试品和阴性对照品进行全波长扫描。结果显示：盐酸小檗碱对照品溶液在330 nm处有明显的吸收峰，供试品溶液及阴性对照品溶液在330 nm处也含有明显吸收但峰形不明显，且阴性对照品与供试品相差不大，考虑洁阴洗剂中的中药成分较多，不排除含其他生物碱或物质在该处也含有吸收峰，对实验结果有影响，故放弃直接测定吸光度。

选择利用酸性染料与生物碱的有色离子对形成反应可以去除其他成分对其吸光度的影响，且在405 nm处有吸收峰[3]，经实测，由于受对照品、溶剂、操作等因素的影响，测得酸性染料比色法处理后盐酸小檗碱在409 nm处有明显的吸收峰且干扰较小，故最后确定采用酸性染料比色法进行含量测定。

此次通过对洁阴洗剂质量标准的研究，建立了对蛇床子素的薄层色谱鉴别方法以及酸性染料比色法对洁阴洗剂中总生物碱的含量测定方法。薄层色谱法快速简便，色谱斑点清晰、圆整、无拖尾。含量测定方法简便易行，稳定性、重复性、精密度高，具有较好的专属性和准确度。目前，按照省食药监局的要求，医院制剂均要逐步完善及提高质量标准体系，逐步建立定性、定量测定方法，本次研究结果，可作为洁阴洗剂质量标准的重要参考和依据，今后条件许可，可进行更深入的研究，从而不断完善其质量标准，确保临床疗效。

[1] 张晓丽,曹爱民.薄层扫描法测定抗风湿胶囊中蛇床子素含量[J].时珍国医国药,2004,15(9):646.

[2] 汪怡.酸性染料比色法测定黄连解毒汤中总生物碱的含量[J].安徽医药,2013,17(5):759-761.

[3] 罗国平,孟会宁,张云龙,等.小陷胸颗粒中盐酸小檗碱的含量测定[J].河北医药,2012,34(10):1568-1569.

R282.710.2

B

1671-8194（2014）29-0072-02