浅谈磷的检测原理方法和临床意义

杜海龙

摘要：目的：探讨磷的检测的原理、方法和临床意义。方法：是基于磷酸盐离子和钼酸铵反应生成磷钼酸盐复合物，然后用光度法测定。结论：直接测定磷钼酸盐复合方法的优点是简单、快速和稳定。但缺点是受溶血、黄疸、脂血的干扰较大。酶学测定方法的优点是不受胆红素干扰，在中性pH环境中反应，可减少有机磷酸酯的水解；缺点是酶法试剂昂贵，临床实验室应用不多。

关键词：血浆;无机磷酸盐; 磷检测【中图分类号】R446.11【文献标识码】B【文章编号】1672-8602(2014)04-0210-01

通常测定的血磷是指血浆中无机磷酸盐所含的磷，正常人仅有0．6～1．6 mmol／L，儿童稍高。磷元素符号为P；其原子量力30．97。磷酸盐形式为H2PO4、HPO42+；其分子量分别为96．98，95．97。人体内含磷17 mol(530 g)，其中87％存在骨骼中，其余在软组织中、细胞内。血液的磷可分为4部分：无机磷，以H2PO4-及HPO42-的形式存在。其中H2PO4-占20％，HPO42-占80％；②有机磷或磷酸酯亭如甘油磷酸酯、磷酸核苷酸、磷酸己糖等；③含磷脂类：如卵磷脂、脑磷脂、鞘磷脂等；④少量的其他磷化物。测定无机磷酸盐的最古老、最常用的方法是基于磷酸盐离子和钼酸铵反应生成磷钼酸盐复合物，然后用光度法测定。磷钼酸盐复合物可以用紫外吸收(340 nm)直接测定；也可以用还原剂将磷钼酸盐复合物还原成有色的钼蓝，然后用比色法测定。直接测定磷钼酸盐复合方法的优点是简单、快速和稳定。但缺点是受溶血、黄疸、脂血的干扰较大。酶学测定方法的优点是不受胆红素干扰，在中性pH环境中反应，可减少有机磷酸酯的水解；缺点是酶法试剂昂贵，临床实验室应用不多。下面将磷的检测原理、方法和临床意义分析汇报如下。

1硫酸亚铁钼蓝比色法

1.1原理:以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合成磷钼酸盐复合物，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成蓝色化合物，进行比色测定。与同样处理的标准进行比较求得血清中磷含量。反应式如下：(NH4)6Mo7O24+3H2SO4→7H2MoO4+3(NH4)2SO412H2MoO4+H3PO4→12MoO3•H3PO4+12H2O12MoO3•H2PO4+还原剂→钼蓝(MB)

1.2试剂:(1)三氯醋酸-硫酸亚铁溶液：称取硫脲10g硫酸亚铁(FeSO4•7H2O)10．6 g和三氯醋酸100g，以去离子水溶解并稀释至l L，置冰箱保存。(2)钼酸铵溶液：称取钼铵4．4g溶解于约40ml去离子水中，取浓硫酸9ml，滴加入约40ml去离子水中，将两液合并，以去离子水稀释至100ml。(3)无机磷标准贮存液(32．29 mmol／L)：称取无水磷酸二氢钾(KH2PO4，AR)4．39 g，用去离子水溶解后移入1 L容量瓶中，并稀释至刻度，再加入氯仿2ml防腐，置冰箱中保存。(4)无机磷标准应用液(1．29 mmol／L)：取无机磷标准贮存液4 ml加入100 ml容量瓶中，以去离子水稀释至刻度，加人1 ml氯仿防腐，置冰箱中保存。

1.3操作:取血清0．2 ml，加入三氯醋酸-硫酸亚铁液4．8 ml，充分混匀，放置10分钟后，离心沉淀。无机磷标准也同样处理。

1.4计算:血清无机磷(mmol／L)=×1．292

1.5参考值:(1)血清无机磷：成人0．96～1．62 mmol／L，儿童1.45～2．10 mmol／L。(2)尿磷排泄量：成人16．14～41．98 mmol／24 h。(3)脑脊液无机磷：0．29～O．65 mmol／L。

2紫外分光光度法

2.1原理:血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵作用所形成的复合物，直接用340 nm或325 nm波长测定其吸光度。

2.2试剂 :(1)360 mmol／L硫酸：准确吸取浓硫酸(AR)2ml加至98 ml丑水中，混匀即可。 (2)0．15mmol／L钼酸铵：称取钼酸铵(AR)111．2mg、NaN350mg至小烧杯中，加50ml蒸馏水溶解并转入加Triton X-100 0．2 ml，然后加水至刻度。 (3)应用液：应用前根据标本的数量，将上述100 ml容量瓶中，"(1)"液和"(2)"液等量混合。 (4)无机磷标准液：1 ml=C=0．04 mg P或1．292 mmoL／L，配制方法见前法。

2.3操作:取试管3支，标明测定管、标准管和空白管。

2.4计算: 血清无机磷(mmol／L)=×1．，292

2.5参考值0．9～1．34 mmol／L(2．78～4．15 mg／d1)。

3米吐尔直接显色法

3.1原理:利用磷在酸性溶液中与钼铵起反应生成磷酸钼酸络合物，用对甲氨基酚硫酸盐(米吐尔)还原生成钼蓝。在试剂中加吐温80以抑制蛋白质的干扰。

3.2试剂:(1)钼酸铵溶液：在50ml去离子水中加浓硫酸3．3ml，再加钼酸铵0．2g，溶解后加吐温-800．5ml，最后加去离子水至100ml。(2)对甲氨基酚硫酸盐(米吐尔)溶液：称取对甲氨基酚硫酸盐2 g，溶于80 ml去离子水中，加无水硫酸钠5 g，最后加去离子水至100ml。(3)显色应用液：取l液10 ml，2液1．1 ml混合即可应用。 (4)磷标准液配制方法同前法。

3.3操作: 取试管3支，标明测定、标准和空白管。

3.4计算: 血清无机磷(mmol／L)=测定管吸光度／标准管吸光度×1．292。

4临床意义

4.1血清无机磷增高：（1）甲状旁腺功能减退症由于激素分泌减少，使肾小管对磷的重吸收失去控制而增强吸收，因而使血磷增高。 （2）假性甲状旁腺功能减退症也伴有血清磷增高。（3）维生素D过多症时维生素D促进肠道吸收钙磷，血清钙磷均可增高。（4）肾功能不全或衰竭，尿毒症或慢性肾炎晚期等磷酸盐排泄障碍，而使血磷潴留。（5）多发性骨髓瘤血磷可轻度增高。（6）骨折愈合期。

4.2血清无机磷减低：（1）甲状旁腺功能亢进症肾小管重吸收磷受抵制而减弱，尿磷排泄增多，血磷常见减低，可低至0．8 mmol／L以下。（2）维生素D缺乏病或软骨病由于维生素D吸收不足，或魂少日光照射，伴有继发性甲状旁腺增生，使尿磷排泄增多而血磷减低。（3）连续静脉注射葡萄糖同时注射胰岛素的治疗措施，或患胰腺癌，伴有胰岛素过多症，使糖的利用增加，而糖代谢必须经过磷酸化作用，需用大量无机磷酸盐，而使血磷下降。（4）肾小管变性病变，使肾小管重吸收功能发生障碍，使尿中丢失大量无机磷，血磷偏低，如Fanconi综合征。（5）乳糜泻等由于肠内有多量脂肪存在，抵制钙磷的吸收，使血磷减低。

4.3尿磷排泄增多：见于甲状旁腺功能亢进症、方氏综合征、代谢性碱中毒。

4.4尿磷排泄减少：见于甲状旁腺减退症、维生素D缺乏病、乳糜泻、肾衰竭，伴有酸中毒的肾炎、糖利用增加等情况。

参考文献

[1]于颖.孟建中.血磷和降钙素原检测在脓毒症早期诊断的应用现状《实用医药杂志》 2008年08期 .

[2]蒋晓婷 刘建栋 普外科病人围手术期血磷水平的变化及其意义浙江医学 2002年24卷10期 .

[3]林穎，王深明，黄雪玲. 普外科病人术后低磷血症发生和防治的临床研究中国实用外科杂志 2001年21卷05期 .

[4]孙成栋,张淑文,王宝恩;血磷水平在脓毒症患者中的临床意义[J];中国全科医学;2005年20期.