HPLC法测定复肝宁胶囊中绿原酸的含量

潘积常 周凤娇

摘要：目的：建立测定复肝宁胶囊中绿原酸的方法。方法：色谱柱为C18 （5μm4.6×250mm）；流动相:乙腈－0.4％磷酸溶液（13:87）；检测波长327 nm；流速1.0ml/min。结果：绿原酸线性范围0.039μg～0.780μg（r=0.9999），平均回收率为98.69%，RSD=0.611 % (n=6)。结论：方法准确、专属性强，可作为复肝宁胶囊中绿原酸的定量分析方法。

关键词：复肝宁胶囊；绿原酸；高效液相色谱【中图分类号】R965【文献标识码】B【文章编号】1672-8602(2014)04-0099-01

复肝宁胶囊［1］是由板蓝根、金银花、柴胡、牡丹皮、山楂、麦芽(炒)、六神曲(炒)七味药经提取制成，具有清舒肝健脾，清热利湿。用于乙型肝炎奥亢阳性属于肝旺脾虚，热毒较盛者。但其现行质量标准尚无含量测定方法［3］。为完善产品质量标准，本文建立了采用HPLC单波长同时测定复肝宁胶囊中绿原酸的方法。

1仪器、试剂和样品

仪器：岛津高效液相色谱仪，输液泵型号：LC-10ATVP；检测器:SPD-10AVP；GR-202型电子天平。试剂：乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。绿原酸对照品：中国药品生物制品检定所提供（110753-200212，供含量测定用）。样品：复肝宁胶囊及缺金银花的阴性样品由广西万寿堂药业有限公司提供。

2方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱： C18 （5μm4.6×250mm）；流动相：乙腈－0.4％磷酸溶液（13:87），流速：1ml/min，检测波长：327 nm；柱温：室温。

2.2样品制备及专属性考察：（1）对照品溶液精密称取绿原酸对照品适量置量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释，摇匀，加50％甲醇至刻度制成每1ml含40μg的溶液（10℃以下保存）。（2）供试品溶液制備取本品的内容物，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％甲醇50ml，称定重量，用超声（40kHz,250W）处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（10℃以下保存）。（3） 阴性样品溶液制备另取不含金银花药材的阴性样品［按复肝宁胶囊配方（删除金银花药材），采用该胶囊剂制备工艺制得的样品］，照供试品溶液项下操作制备成阴性样品溶液。（4） 测定方法分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。结果阴性样品在相同位置无干扰。

附图对照品、供试品及阴性样品的HPLC图谱

2.3线性关系考察：精密称取绿原酸对照品9.75mg，用50％甲醇溶解并稀释至50ml量瓶中，精密吸取5ml置25ml量瓶中，用50％甲醇溶解并稀释至刻度，制成39μg/ml的溶液（10℃以下保存）。精密吸取上述对照品溶液1μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl进样，记录色谱图，测得峰面积，以峰面积（A）对进样量（C）进行回归，得标准曲线方程为A=2296273.94×C-26028.28， r＝0.9998。结果表明：绿原酸的峰面积与进样量在进样量为0.039μg～0.780μg之间线性关系良好。

2.4仪器精密度和样品稳定性、重复性试验 ：精密吸取对照品溶液（浓度为39μg/ml）10μl，连续进样5次，RSD=0.55%结果表明：进样精密度良好。取样品（批号040403）供试液分别于0、2、4、6、8h进样10μl，测得样品中绿原酸峰面积值，相对平均偏差为1.11%，RSD=0.60%；样品供试液在8小时内稳定性较好。取样品（批号：040403）五份分别制备样品供试液，依法检测其含量，含量平均值为：12.69mg/g，RSD=0.255%，试验表明：本法重复性试验结果良好。

2.5回收率试验取六份已知含量的样品（批号：040403,含量为12.69 mg/g ）各约0.5 g，精密称定，分别加入绿原酸对照品，照本品含量测定方法测定，结果绿原酸平均回收率为98.69%，RSD为0.611 %，试验结果表明本方法准确度良好。

2.6 样品测定： 取10批样品按"2.2.2"项下制备成供试品溶液，依法测定，结果见下表。

批号 绿原酸含量（mg/粒）040401 4.91040402 5.17040403 5.11040404 5.0040405 4.93040406 4.99040407 5.36040501 5.11040502 5.09040503 5.053讨论

3.1金银花为本方臣药，本方法选择金银花主要有效成分绿原酸为检测成分，共检测了10批成品的含量，结果表明该方法稳定可行，方法简便准确。

3.2本方法准确灵敏，可作为复肝宁胶囊中金银花有效成分的定量分析方法，为进一步制复肝宁胶囊质量标准提供了依据，并对含有金黄银花药材的其他产品的检测也具有一定的参考价值。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部.