长白猪肝脏、肾脏和淋巴结的显微形态及糖原PAS反应研究

张家禾等

摘要

[目的] 对商品长白猪的组织形态学进行研究，了解商品长白猪宰前的生理状态。[方法] 采集长白猪的肝脏、肾脏和淋巴结3种组织器官并制成石蜡切片，采用H.E染色方法对其组织结构进行研究。[结果] 肾脏和肝脏的组织结构形态正常，肾脏和肝脏的细胞核染色明显，淋巴结的皮质和髓质分界不清晰，周围组织没有明显的淋巴索， 淋巴窦较小。糖原PAS染色结果表明肝脏中的糖原颗粒较少，分布不均匀，而肾脏中糖原或糖蛋白多集中于血管球和肾小囊壁上。[结论] 该研究可为今后进一步的商品长白猪理论研究奠定基础。

关键词 长白猪；PAS染色；肝脏；肾脏；淋巴结

中图分类号S828.8+9文献标识码A文章编号0517-6611（2014）06-01704-03

Abstract [Objective] The research aimed to study the tectology of commercial Landrace Pig and understand the physiological state of Landrace Pig before slaughter. [Method] The tissues of liver， kidney and lymph node were collected from Landrace Pig to make paraffin sections. Its organizational structure was studied by using H.E staining. [Result] The kidneys and liver's organization structure form was normal and their nucleus was obviously stained. But the boundary of lymph nodes'cortex and medulla was not very clear. There were no obvious lymph cords around it and the lymph sinus looked small. The results of PAS staining showed that the liver's glycogen granules were very few and showed an uneven distribution. Glycogen and glycoprotein in kidney were mainly concentrated in glomerulus and renal capsule wall. [Conclusion] The research could lay the foundation for further theoretical study on commercial Landrace Pig in the future.

Key words Landrace Pig； PAS staining； Liver； Kidney； Lymph node

長白猪具有生长快、饲料利用率高、瘦肉率高、母猪产仔较多、奶水较足等优点，对于保证国民的动物性食品供应发挥了不可替代的作用。近年来，对长白猪的研究大多集中在肉品质[1]、繁殖性能[2]以及体型特征[3]等方面，对组织形态学和组织细胞化学方面的基础研究甚少。

染色在组织形态学，特别是病理形态诊断、研究和教学工作中，都具有非常重要的意义和使用价值[4]。苏木精-伊红染色（H.E染色），苏木精染液呈碱性，可使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体呈紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分呈红色。PAS染色又称为过碘酸雪夫染色，是一种检测组织细胞内糖类物质的细胞化学方法，常用于组织学研究中，其原理是过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，呈红色定位于胞浆上[5]。PAS反应中存在多种改良法，且各实验室都有自己的经验和习惯，在学术交流中常常因为染色结果不一致，难以进行比较。为此，2002年丹麦、德国、英国和法国的研究者们共同介绍和推出了标准化PAS染色方法，目的是统一该法染色条件和步骤，避免这种经典方法的不规范性，保证结果可重复性，以利于试验结果的比较[6]。

笔者利用组织制片技术对猪3种脏器进行H.E染色和细胞内糖原PAS反应，分析商品长白猪屠宰前的生理状态，以期为商品用长白猪宰前生理状况提供组织形态学依据，通过组织形态学观察可以反映商品用长白猪的免疫状态以及被屠宰猪的泌尿排泄功能和肝脏组织形态。

1 材料与方法

1.1仪器和药品

显微镜、切片机、福尔马林、无水酒精、冰醋酸、苏木紫、甘油、钾明矾、伊红、过碘酸酒精液、品红溶液、Schiff氏液等。肝脏、淋巴结和肾脏中均发现有阳性反应颗粒，但含量不多。肝脏和肾脏中阳性颗粒比较集中，淋巴结较为分散。肾脏中阳性颗粒最多，集中于血管球和肾小囊囊壁。在同一放大倍数下，同一种脏器中阳性颗粒大小不一但分布均匀，不同脏器中阳性反应物质分布密度不一、颗粒大小不一，但分布比较均匀。

2.2 H·E染色

肝脏组织结构染色清晰，各肝小叶分界清楚，呈不规则的多边形状；肝细胞呈索状排列，以中央静脉为轴心呈放射性排列；肝细胞核染色明显，位于细胞中央，部分有双核，核膜清晰可见。肾脏组织结构正常，肾小体位于皮质迷路内，呈球形，由血管球和肾小囊2个部分组成。近端小管和远端小管上皮细胞都呈立方形，近端小管细胞界限不清楚，游离缘有刷状缘，近端小管染色较远端小管颜色更深。淋巴结髓质与皮质分界不清楚。皮质中淋巴小结呈圆形，位于小梁两侧淋巴窦附近，正切面可见淋巴小结帽呈新月形，朝向小梁淋巴窦；淋巴小结内明区和暗区分界不明显。

从图3可以看出，肝脏组织可见肝小叶被结缔组织分开，数个肝小叶围成门管区，肝脏细胞染色较深，清晰可见，未见肝脏中脂肪小泡。肾脏染色图D中，采样肾脏组织完整，皮质、髓质和被膜清晰可见，图E中发现具有免疫功能的大量淋巴细胞聚集成团状，肾小囊中发现大量的红细胞，但肾小囊腔和肾小囊上皮上未发现。淋巴结中可见皮质部在内侧，髓质部在外侧，淋巴小结沿皮质部小梁分布且数量较多，另外可见淋巴组织中有数量不等的巨噬细胞。

安徽农业科学2014年

3 讨论

吴雨岭等[7]对肝脏PAS对整块染色改良中发现，固定与氧化顺序处理法优于固定与氧化同时处理法。鉴于此，笔者对不同的组织PAS反应中采用氧化顺序处理法中，结果表明PAS阳性反应物质分布均匀，与报道基本一致。但是，着色

深浅不同，并且阳性反应颗粒的大小不一，这可能是因为组织中的糖原或糖蛋白本身含量不一致或者分子大小存在差异。糖原是动物组织内唯一的天然多糖且在肝脏中含量最为丰富[7]，但该试验中肝脏内糖原含量不多，有以下原因：①试验长白猪宰杀前饥饿24 h，肝糖原已经被机体分解供能；②试验采用的固定剂为甲醛溶液，此溶液为水溶性固定剂，糖原易溶于水，且在酶的作用下分解为葡萄糖后更易溶于水。其中，肾脏阳性反应物质大多集中于血管球和肾小囊囊壁，颜色呈现鲜艳的桃红色，与王钰等报道肾脏的PAS染色结果相一致[8]。对于肾脏中PAS反应结果的原因，笔者猜测是由于血管球血液中的糖类物质随着原尿渗入肾小囊中，附着在肾小囊壁上，使其PAS染色呈较强阳性，亦或其上的糖蛋白染色。

H.E染色是病理技术中最基本的方法[9]。笔者认为对疾病的诊断除了在分子水平上、细胞水平上、病例解剖水平上、临床诊断水平上等诊断方法外，也要更多地关注组织切片水平上的病例诊断。在该研究中3种脏器均未见病例现象，说明屠宰猪生前生理状况良好。有人认为，淋巴小结的数量和大小与抗原的刺激有关，无菌饲养的动物无淋巴小结[10]。在今后的模型动物研究中，是否可以通过控制饲养条件、抗原免疫原性等，通过在组织切片水平上对淋巴小结研究为其他研究提供参考和借鉴意义，发挥组织切片技术的基础性作用。一般情况下，猪淋巴结比较特殊，无明显的门部[11]。该试验中也没有发现猪淋巴结中有明显的门部，与以前报道一致。在肾脏的H.E染色中，发现肾脏中有大量的淋巴细胞聚集，肾小囊中发现大量红细胞，据此推测肾脏中免疫状态良好，肾小囊中血液循环旺盛，需氧较多。肾脏参与机体的免疫，则有待于进一步研究。

参考文献

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[11] 马仲华.家畜解剖学及组织胚胎学[M].北京：中国农业出版社，2005：279.