脉络宁注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究*

吴 婷 蒋宝平 田 磊 居文政△

（1.南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学药学院，江苏 南京210029）

脉络宁注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究*

吴 婷1蒋宝平2田 磊1居文政1△

（1.南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学药学院，江苏 南京210029）

目的观察脉络宁注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织的保护作用损伤的疗效。方法将24只大鼠随机分成3组，即假手术组、模型组和脉络宁组（每组各8只），后两组采用线栓法造成大鼠多发性脑梗死，脉络宁组给脉络宁注射液尾静脉注射；观察比较3组大鼠行为学改变及脑含水量、脑指数、脑组织内SOD、MDA含量变化。结果 脉络宁注射液可降低脑缺血再灌注大鼠的脑指数与脑含水量，降低大鼠脑组织内MDA含量，提高SOD活性（均P＜0.05或P＜0.01）。结论脉络宁注射液对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用。

脉络宁注射液 脑缺血再灌注 脑指数 脑含水量 SOD MDA

脉络宁注射液由金银花、牛膝、玄参、石斛组成，具有养阴清热、补益肝肾、活血化瘀的功效，其治疗脑梗死疗效最为显著［1］。笔者建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注（MCAO）模型，观察尾静脉注射脉络宁注射液后，大鼠神经行为学的改变及脑梗死率、脑含水量、脑指数指标、SOD、MDA的影响，以验证脉络宁注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 脉络宁注射液，金陵药业股份有限公司，批号20110501。红四氮唑（TTC），上海试剂三厂，批号070410。MDA试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20031012。SOD试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20041010。

1.2 动物 SD大鼠，清洁级，雄性，体质量250～350 g，由南京中医药大学动物中心提供，实验动物合格证号SCXK（浙）2008-0033，大鼠饲养于南京中医药大学动物实验室全屏障清洁级动物实验房内。

1.3 仪器 DGG-9140型电热恒温鼓风干燥箱，上海森信实验仪器有限公司；赛多利斯CAP225D电子天平（德国）；752分光光度计，上海第三分析仪器厂。

1.4 分组与造模 24只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、脉络宁组各8只。腹腔注射10％水合氯醛，待动物麻醉后，用鼠板固定。颈正中切开，分离肌肉和筋膜，显露出右侧颈总动脉 （CCA），沿头部方向分离CCA、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）以及ICA的颅外分支翼突腭动脉。结扎CCA的近端，用眼科剪在距分叉处约1 cm血管壁上剪一小口，将线栓自ECA沿心脏方向插入，剪断与其相连的ECA血管，线栓经CCA分叉处通过ICA入大脑前动脉，将ECA连同线栓一起结扎固定，缝合肌肉和皮肤，青霉素外涂于伤口以防感染。缺血4 h后再灌注20 h，再灌注时外拉线使其球端回至ECA内即可。假手术组除不插线外其余步骤同上。

1.5 给药方法 大鼠术前12h禁食不禁水。假手术组于手术后4 h尾静脉注射0.9％氯化钠注射液4 mL/kg，模型组与脉络宁组分别在缺血 4 h后尾静脉注射0.9％氯化钠注射液4 mL/kg、脉络宁注射液4 mL/kg，而后再灌注20 h。

1.6 标本采集与检测 （1）待MCAO大鼠麻醉清醒后4 h及24 h，进行行为学检测并加以评分。（2）实验结束后，大鼠断头取脑，置于冰盐水中10 min，将脑组织进行冠状切片，均匀切成2 mm厚脑片，放入2％TTC磷酸盐缓冲溶液中37℃水浴20 min，缺血坏死的神经细胞，呈现白色，而非坏死的神经细胞呈现鲜红色。分离并称重梗死区域，求出梗死区质量占脑质量的百分比，即脑梗死率。大鼠断头取脑，称质量后，置烘箱内，106℃烘干后称重。公式：脑指数＝脑湿质量 （g）/体质量（100g）；脑含水量 （％）＝（湿质量-干质量）/湿质量× 100％。（3）取脑组织，称质量，加冰生理盐水制成10％脑组织匀浆，测定MDA含量、SOD活性。

1.7 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析。P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

见表1～表3。与假手术组比较，模型组、脉络宁组大鼠行为学评分均呈显著升高（P＜0.01）；脉络宁组大鼠与模型组比较，行为学评分显著降低（P＜0.01），表明脉络宁注射液对大鼠的神经功能缺损有显著改善作用。脉络宁注射液组大鼠的脑指数、脑含水量及脑梗死率明显低于模型组（P＜0.05）。与假手术组比较，模型组的SOD活性明显下降，MDA含量明显升高 （P＜ 0.05）。与模型组相比，脉络宁组SOD活性升高 （P＜ 0.05），MDA含量下降（P＜0.05），表明脉络宁注射液可以减少全脑缺血、缺氧后脑组织中SOD的消耗及MDA的生成。

表1 各组大鼠行为学评分比较（±s）

表1 各组大鼠行为学评分比较（±s）

与假手术组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组 别 n 清醒后4 h 清醒后24 h假手术组 8 0.63±0.14 0.38±0.12模型组 8 6.88±1.25** 6.50±1.41**脉络宁组 8 3.98±1.32** 3.02±1.01**△△

表2 各组大鼠脑指数、脑梗死率及脑含水量比较（±s）

表2 各组大鼠脑指数、脑梗死率及脑含水量比较（±s）

组 别 n 脑指数C（g/100 g）假手术组 8 0.335±0.016模型组 8 0.366±0.027*脉络宁组 8 0.336±0.026△脑含水量（％）脑梗死率（％）74.85±2.92 0.00±0.00 81.18±3.08* 8.55±3.28**76.27±3.66△ 6.88±1.76**△

表3 各组大鼠脑匀浆SOD活性、MDA含量比较（±s）

表3 各组大鼠脑匀浆SOD活性、MDA含量比较（±s）

组 别 n SOD（U/mg） MDA（nmol/mg）假手术组 8 326.6±63.4 14.16±2.31模型组 8 231.7±57.2* 21.04±7.03*脉络宁组 8 305.2±66.5△ 14.55±2.87△

3 讨论

在脑梗死早期，由于局部血液循环障碍，导致脑组织缺血水肿、脑细胞死亡。同时，由于颅内压升高，压迫脑部血管，影响脑部微循环。脉络宁注射液能够扩张血管、增加脑血流量、降低脑血管阻力、改善微循环，从而达到降低脑指数、减轻脑水肿、防止脑梗死的作用。发生脑梗死后快速促使缺血组织血流恢复，是防治细胞不可逆损伤的重要条件，但是在再灌注的同时，也可能加重缺血所致的损伤，其机制十分复杂。目前认为，自由基连锁反应是多发性脑梗死后造成脑部功能损伤的主要原因之一，也是缺血再灌注损伤的主要机制［2-5］。脑梗患者体内的自由基代谢出现紊乱，动态平衡被破坏，使其含量显著升高，而体内可清除过多自由基的SOD活性下降，导致脑损伤。MDA是脂质过氧化反应中的代谢产物，其含量的测定可以反映脂质过氧化程度，预知机体中自由基的含量，间接反映出细胞造成损伤的程度［6］。

本实验结果显示，脉络宁注射液可降低脑缺血再灌注大鼠的行为指标评分，增加脑组织匀浆中SOD的水平、降低MDA含量、降低脑梗死面积，表明脉络宁注射液具有抗氧化的作用，可减轻脑缺血再灌注所造成的损伤，改善脑功能。

［1］吴婷，张军，储继红，等.脉络宁注射液药理及药代学研究进展［J］.江苏中医药，2011，43（9）：93-94.

［2］White BC，Sullivan JM，Degracia DJ，et al.Brain ischemia and reperfusion：molecular mechanisms of neuronalinjury［J］. J Neurol Sci，2000，179（S 1-2）：1-33.

［3］Jiang MZ，Tsukahara H，Ohshima Y，et a1.Effects of antioxidants and nitric oxide on TNF-alpha-induced adhesion molecule expression and NF-kappaB activation in human dermal microvascular endothelial cells［J］.Life Sci，2004，75（10）：1159-1170.

［4］姜德华，金男革，玄汉石，等.大鼠急性局灶脑缺血再灌注脑组织NO含量和NOS活性的变化［J］.临床神经病学杂志，2000，13（4）：201-203.

［5］Yamawaki M，Sasaki N，Simoyama M，et al.Protective efectof edaravone against hypoxia-reoxygenation injury in rabbitcar diomyocytes［J］.Br J pharmacol，2004，142（3）：618-626.

［6］ 章军建，阮旭中，张苏明.大鼠局灶性脑缺血再灌流半暗带神经细胞坏死与凋亡的动态变化［J］.中华老年医学杂志，1999，18（3）：170-173.

Study of M ailuoning Injection on Rats w ith Focal Cerebral Ischem ia Reperfusion Injury

WU Ting，JIANG Bao-ping，TIAN Lei，et al.Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu Nanjing 210029，China

Objective：To establish rats with focal cerebral ischemia reperfusion model and to investigate effect of Mailuoning injection on injury induced by cerebral ischemia reperfusion.M ethods：twenty-four male SD rats were random ly divided into three groups with eight rats in each group：sham-operation control group，model group，and Mailuoning group.The model was established by middle cerebral artery occlusion.Neurological deficits scores，cerebral water content，activity of SOD，and the content of MDA were observed.Results：Compared with model group，Mailuoning group can significantly reduce the neurological deficits scores and cerebral water content，decrease the content of MDA，and increase SOD activity.Conclusion：Mailuoning injection can alleviate cerebral ischemia reperfusion injury in rats.

Mailuoning injection；Cerebral ischemia reperfusion；Cerebral index；Cerebral water content

R285.5

A

1004-745X（2014）04-0570-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.04.003

科技部重大新药创制科技重大专项——中药新药临床评价研究技术平台（南京）建设（No 2012ZX09303009-002）；江苏省中医药领军人才（LJ200906）；江苏高校优势学科建设工程资助项目（2010）

△通信作者

2013-12-26）