生化标志物联合检测在急性冠脉综合征诊断中的临床意义

蒋卫霞 尹栩芳

上海交通大学苏州九龙医院检验科，苏州 215000

生化标志物联合检测在急性冠脉综合征诊断中的临床意义

蒋卫霞 尹栩芳

上海交通大学苏州九龙医院检验科，苏州 215000

目的 探讨生化标志物联合检测在急性冠脉综合征诊断中的临床意义。 方法 检测50例急性冠脉综合征患者、30例健康体检者的CRP、IL-6、P-选择素、ICAM-1、MMPs-1的水平。 结果观察组的CRP、IL-6、P-选择素、ICAM-1、MMPs-1阳性率均显著高于对照组（P＜0.05）。CRP、IL-6、P-选择素、ICAM-1、MMPs-1联合检测阳性率显著高于各项单独检测阳性率 （P＜0.05）。 结论 生化标志物的联合检测有助于急性冠脉综合征患者的早期诊断，值得推广应用。

联合检测；生化标志物；急性冠脉综合征

急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）涵盖了从不稳定型心绞痛（unstable angina，UA）、急性非ST段抬高性心肌梗死到ST段抬高性心肌梗死等一系列临床病理生理状态[1]，病理生理基础是冠状动脉粥样硬化斑块的不稳定及伴随血小板聚集血栓的形成[2-7]，从而导致不同程度的心肌缺血。近年来，越来越多的研究表明，感染炎症与斑块形成及不稳定密切相关，ACS可能是一个炎症过程。冠状动脉炎症加重内皮功能障碍，促进粥样斑块进展，最终粥样斑块破裂和栓塞。目前，对于冠状动脉炎症和斑块破裂还缺乏有效的检测手段。在一定程度上，局部和全身的炎症因子水平能反映冠状动脉炎症的严重程度，但缺乏获得公认的诊断指标。斑块破裂越严重往往表现出炎症标志物上升越高。本文重点探讨联合检测各项生化标志物在ACS患者诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年4月～2013年4月在本院住院的50例经临床表现、心电图及超声检查确诊为ACS的患者设为观察组，将30例同期健康体检者设为对照组。观察组：男32例，女18例；年龄32～74岁，平均（56.87± 11.26）岁；UA 11例、急性心肌梗死17例、稳定型心绞痛22例。对照组：男19例，女11例；年龄31～75岁，平均（58.01±12.74）岁。两组的性别及年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

清晨空腹静脉取血2～3 ml，待血块收缩后（＜2 h）分离血清，采用ELISA检测试剂盒测定C-反应蛋白（CRP）（购自上海科兴商贸有限公司）、白介素-6（IL-6）（购自上海前尘生物科技有限公司）、P-选择素 （购自上海恒远生物科技有限公司）、细胞间黏附分子-1 （ICAM-1）（购自上海锐聪科技发展有限公司）、基质金属蛋白酶-1（MMPs-1）（购自上海基免生物科技有限公司）水平。操作方法：①使用不含热原和内毒素的试管，收集血液后，1000×g离心10 min，将血清和红细胞迅速小心地分离；②使用前将所有试剂充分混匀，不要使液体产生大量泡沫，以免加样时加入大量气泡，产生加样误差；③根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，每个标准品和空白孔建议做复孔，每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔，标本用标本稀释液1∶1稀释后加入50 μl于反应孔内；④加入稀释好的标准品50 μl于反应孔，加入待测样品50 μl于反应孔内，立即加入50 μl的生物素标记抗体，盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1 h；⑤甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干，重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加1次；⑥每孔加入80 μl的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30 min；⑦甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干，重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加1次；⑧每孔加入底物A、B各50 μl，轻轻振荡混匀，37℃温育10 min，避免光照；⑨取出酶标板，迅速加入50 μl终止液，加入终止液后应立即测定结果；⑩在450 nm波长处测定各孔的OD值。

1.3 判定标准

当CRP>10 mg/L，IL-6>10 ng/L，P-选择素>75 ng/ml，ICAM-1>304 ng/ml，MMPS-1>1.5 ng/ml时可认为各指标呈阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组5项生化标志物阳性率的比较

观察组的CRP、IL-6、P-选择素、ICAM-1、MMPs-1阳性率均显著高于对照组（P＜0.05）（表1）。

表1 两组5项生化标志物阳性率的比较[n（%）]

2.2 5项生化标志物联合检测阳性率和单项检测阳性率的比较

CRP、IL-6、P-选择素、ICAM-1、MMPs-1单独检测时分别有28例（56.0%）、26例（52.0%）、29例（58.0%）、22例（44.0%）、23例（46.0%）表现出异常增高，上述5项生化标志物联合检测时，确诊例数为49例（98.0%），5项生化标志物联合检测阳性率显著高于每项指标单独检测的阳性率 （χ2=24.9012、28.2133、23.3100、 35.4055、33.5317，P＜0.05）。

3 讨论

3.1 CRP

大量炎症因子已被阐明，其大部分被相关资料证实能起炎症介质的作用。CRP是研究最多的炎症标志物[8]，CRP浓度在UA和心肌梗死患者中是升高的，其是预测冠心病严重程度的重要指标。在所有的已知炎症因子中，只有高敏感性CRP适合于临床的快速诊断和治疗，特别在ACS中，其是一个很好的选择。与非ST段抬高性心肌梗死相比，ST段升高伴高水平CRP患者的住院死亡率和3年心性死亡率更高。在非ST段抬高性心肌梗死的ACS患者中，高水平的CRP提示更高的死亡率，即使在肌钙蛋白正常的患者也存在同样情况。CRP预示更糟的预后，其中包括成功的PCI后的死亡，且CRP升高与猝死存在相关性，粥样斑块破溃或斑块侵蚀作用所致的猝死患者，其血清及粥样斑块中均有较高的CRP水平。在动脉狭窄手术中，高水平的CRP可能与不稳定粥样斑块相关，可能由斑块中的巨噬细胞和T细胞所致。细胞因子介导的炎症反应之间的不平衡所激发的内源性抗炎或促炎反应是ACS结局的主要决定因素，反映循环CRP水平。CRP增高不仅与ACS的发生相关，而且直接关系到ACS短期和长期不良预后，还能独立预测血管重建术后再狭窄以及包括死亡在内的主要事件的发生，因此，CRP促进了内皮细胞功能的损伤、炎症、粥样斑块不稳定和血栓[9-10]，均是不利于或增加ACS的风险。

3.2 白介素

白介素属于一类细胞间功能调节因子，介导各种炎症反应，如动脉粥样硬化、风湿、自身免疫疾病、感染等。各类白介素作用不尽相同，可降低或促进炎症反应的发生，其中IL-6属于ACS患者病情恶化致死的典型炎性标志物，可指导此病的诊治，如在早期进行IL-6水平的检测有助于早期治疗，降低病死率。在Fragmin和FRISC-2对ACS患者的分析中发现，IL-6可视为一个冠心病死亡风险的独立危险因素。如果将患者的IL-6水平控制在介入治疗前水平，能显著降低死亡率。即使是健康人群，在正常范围内有相对高的IL-6水平，也预示着将来发生心肌梗死的危险大大增加。IL-6水平和CRP水平相互影响，可以作为一个独立因素来评价风险。

3.3 选择素

选择素一般是指L-选择素、E-选择素、P-选择素，分别是指白细胞选择素、血小板选择素及内皮细胞选择素。L-选择素研究较少，活化的内皮细胞常表达E-选择素，内皮细胞及多形核中性粒细胞的黏附经由E-选择素介导。P-选择素主要包括两类，即可溶性及跨膜性，前者可溶于血浆，无法跨膜，主要功能为可与白细胞表面的受体结合，从而阻碍跨膜选择素与此受体结合，与跨膜选择素存在竞争关系，最终使白细胞黏附、活化受到抑制；后者表达短暂，仅在内皮细胞及血小板活化时在细胞膜上有所表达，迅速而短暂，主要功能为参与炎症反应，即内皮细胞及白细胞黏附、移动、积聚、活化的介导及进而参与炎症因子的释放，成为血小板活化有力的参考指标。在临床上，心肌梗死患者可表现P-选择素的升高，特别是急性期及UA时，其表达水平明显升高，但升高水平受发病时间的限制，据Hope等测定，发病时间在2.3～17.3 h的患者及发病24 h的患者P-选择素升高均不明显，而在另外一组研究中提到胸痛患者3个月内发生严重心脏事件为终点进行统计发现P-选择素显著升高[11]。

3.4 免疫球蛋白

免疫球蛋白大体上可分为血小板内皮细胞黏附分子-1、VCAM-1及ICAM，前两者研究较后者少，均为炎症表达因子，位于血管内皮，后者进一步分为3种及ICAM-1、ICAM-2及ICAM-3，可结合于整合素MAC-1及LFA-1，作为黏附分子作用于免疫系统，发挥重要的功能，尤其在淋巴细胞的特异抗原反应中极其关键，同时参与内皮细胞与白细胞相互作用介导炎症的过程。以心肌细胞举例说明，细胞因子刺激或低氧状态，心肌细胞表面出现较多的ICAM-1，中性粒细胞表面分布的其配体LFA-1与之结合，最终使中性粒细胞与心肌细胞黏附增多，促进心肌细胞坏死。

3.5 MMPs

已发现的MMPs共有16种之多，其中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9及MMP-12表达于平滑肌细胞，均属于内肽酶家族，依赖于Zn2+。其中MMP-9是不稳定性动脉粥样硬化的高危因素，其属于巨噬细胞分泌的激活巨噬细胞的关键因素之一，主要是经降解细胞外基质，出现粥样斑块的不稳定。

全身和局部的动脉炎症都是ACS的相关因素，促进其发生和发展。通过检测炎症因子水平，结合临床症状、心电图和心肌标志物变化，对ACS患者进行危险分层比仅仅根据临床危险因素更有价值。本研究结果提示，生化标志物的联合检测对于ACS患者的早期诊断、高确诊率具有重要的临床意义。抗炎治疗在ACS治疗中日趋重要，对目标炎症的靶向治疗正在研制开发，随着对炎症相关基因的深入了解，炎症在ACS中的作用将会更加明确。

[1]操明，吕彩霞，董璇，等.合并糖尿病的急性冠脉综合征患者共刺激分子与炎症指标的研究[J].中华老年多器官疾病杂志，2013，12（2）：125-128.

[2]李道麟.急性冠脉综合征患者血中CgA、BNP与NE水平变化的临床观察[J].中国实验诊断学，2012，16（7）：1314-1316.

[3]王斌.NSTE-ACS患者的识别与处理[J].中国全科医学·医生读者版，2012，15（4）：2-5.

[4]文卫红.急性冠脉综合征冠状动脉造影112例分析[J].中国现代医药杂志，2011，13（5）：89-90.

[5]刘汉华，晏凯利，胡晓军，等.普罗布考对急性冠脉综合征患者颈动脉粥样硬化斑块稳定性及血清hs-CRP和MMP-9的影响[J].实用医学杂志，2010，26（12）：2199-2201.

[6]赵文淑.急性冠脉综合征[J].中国临床医生，2010，38（1）：15-18.

[7]王翠英，王宇朋，李敏.BNP水平在急性冠脉综合症危险分层中的意义[J].中国医学工程，2010，9（4）：159-160.

[8]李春敬，左琳琳，陈晖，等.流行性腮腺炎患者血浆超敏C-反应蛋白检测的意义[J].中华实验和临床感染病杂志·电子版，2013，7（2）：105-106.

[9]张伟，杨银利，吴洁琼，等.溃疡性结肠炎患者血清肿瘤坏死因子-α与C反应蛋白水平变化及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志，2013，27（7）：681-682.

[10]王勃.CRP和D-二聚体水平对PCI术前不稳定型心绞痛预后评价[J].当代医学，2013，19（10）：67-68.

[11]沈彩云.冠心病患者脂类代谢及炎症因子与代谢综合征关系探究[J].当代医学，2012，18（23）：43-44.

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Clinical value of combined detection of biochemical markers in the diagnosis of acute coronary syndrome

JIANG Wei-xia YIN Xu-fang
Department of Laboratory,Suzhou Jiulong Hospital of Shanghai Jiaotong University,Suzhou 215000,China

ObjectiveTo study the clinical value of combined detection of biochemical markers in the diagnosis of acute coronary syndrome.Methods50 patients with acute coronary syndrome and 30 healthy adults were recruited.CRP, IL-6,P-selection,ICAM-1,MMPs-1 in two groups was measured rspectively.ResultsCRP,IL-6,P-selection,ICAM-1, MMPs-1 in observation group was significantly higher than that in control group respectively(P＜0.05).The combined detection positive rate of CRP,IL-6,P-selection,ICAM-1 and MMPs-1 was significantly higher than that of single detection respectively(P＜0.05).ConclusionThe combined detection of biochemical markers might be helpful for the early diagnosis of acute coronary syndrome,it is worthy of promotion and application.

Combined detection;Biochemical markers;Acute coronary syndrome

R541.4

A

1674-4721（2014）03（c）-0093-03

2014-02-08本文编辑：李亚聪）