高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定消渴丸中黄芪甲苷的含量

李 培

(聊城市药品检验所，山东 聊城 252000)

消渴丸是由葛根、黄芪、地黄、天花粉等八味药组成，滋肾养阴，益气生津。用于气阴两虚型消渴病［1］。现行标准收载于《中国药典》2010年版(一部)中，因其是自主知识产权的产品，处方中未注明各味药的使用量，而黄芪同地黄同为处方中的君药，起到滋肾养阴、益气生津止渴的功效，故对黄芪中的主要成分黄芪甲苷进行含量测定的研究。经过反复试验，研究制定了合理的供试品溶液制备方法及测定的色谱条件，建立了高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定消渴丸中黄芪甲苷含量的方法，该方法操作简便，重现性好，可作为消渴丸的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);PL－ELSD 2100蒸发光散射检测器(北京绿绵巨贸科贸有限公司);BT 125D电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);Millipore Elix10纯水机(密理博中国有限公司)。

1.2 试药 黄芪甲苷对照品(由中国食品药品检定研究院提供，批号:110718－200613);消渴丸(广州白云山中一药业有限公司，批号:S01237、R03111、R02280)，阴性样品为自制;乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 准确称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成浓度为0.2mg·mL－1的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备 取药品适量，研细，精密称取5.0g，精密量取甲醇50mL，称定重量，静置过夜。再加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇萃取3次，每次30mL，合并正丁醇液，加氨试液洗涤3次，每次30mL，弃去氨试液。蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 阴性供试品溶液的制备 精密称取缺黄芪的阴性样品5.0g，照供试品溶液制备项下方法操作，制备阴性供试品溶液。

2.4 色谱条件及系统适用性 色谱柱:Thermo－C18(4.6mm ×250mm，5μm);流动相:乙腈－水(32∶68);流速:1.0mL·min－1;ELSD 参数:气体流速为1.60mL·min－1，漂移管温度为80℃;进样量:20μL。理论塔板数按黄芪甲苷计算应不低于4000。分别吸取黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液，按上述色谱条件进样。结果表明，供试品在与对照品对应位置上出现色谱峰，且供试品色谱中基线平稳，分离度良好;阴性供试品在该位置上无色谱峰出现。提示本方法测定黄芪甲苷不受杂质干扰，色谱详见图1。

图1 高效液相色谱图

2.5 线性关系考察 分别精密吸取“2.1”项下对照品溶液 5、8、15、10、20μL，注入色谱仪，测定峰面积。以峰面积常用对数(Y)为纵坐标，进样量(X)常用对数为横坐标，进行线性回归，得回归方程Y=1.6449X+2.2032，r=0.9998(n=5)。结果表明，黄芪甲苷进样量在1.016～4.064 μg之间进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取“2.1”项下对照品溶液，重复进样6次，每次10μL，以6次测定的峰面积计算，RSD为1.0%。结果表明，仪器精密度良好。

2.7 重现性试验 取同一批号消渴丸样品，按“2.2”项下供试品溶液制备方法，分别制备6份供试品溶液，并测定其中黄芪甲苷的含量，以6个含量测定结果计算，RSD为1.1%。结果表明，本试验方法重现性良好。

2.8 稳定性试验 精密吸取重复性试验项下供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24 h 注入色谱仪测定，以各次测定的峰面积计算，RSD为0.9%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.9 回收率试验 取同一批号已知含量的样品9份，分别按样品中黄芪甲苷含量的80%、100%、120%加入一定量的对照品溶液，各制备3份供试品溶液。按“2.10”项下方法分别测定黄芪甲苷的含量，结果详见表1。

表1 回收率试验结果

2.10 样品含量测定 取不同批号的3份样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别吸取黄芪甲苷对照品溶液10、20μL与供试品溶液20μL注入色谱仪，以外标两点法计算含量，结果详见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 该处方中药味相对复杂，黄芪在其处方中为臣药，可益气生津改善糖尿病的主要症状，而且是原粉入药，干扰的因素比较少，而黄芪甲苷为黄芪的主要成分，故选择建立黄芪甲苷的含量测定方法利于控制本品质量。

3.2 由于黄芪甲苷在紫外末端有吸收，采用紫外检测器有较大的干扰，基线漂移或噪音过大影响黄芪甲苷含量测定的准确性。而蒸发光散射检测器是一种质量型检测器，与物质本身的光谱吸收无关，所以本方法采用蒸发光散射检测器测定黄芪甲苷［2，3］。

3.3 供试品提取过程中采用了索氏提取和超声提取的方法做了对比，在同样静置一夜的前提下，超声提取的方法有效成分提取的不够完全，索氏提取与普通回流提取无明显差别，但索氏提取浪费试剂，而且操作繁琐，故采用了静置一夜回流提取1 h的方法。

3.4 采用高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定消渴丸中黄芪甲苷的含量，该方法操作简便、快速、准确、重现性好，可作为本制剂的质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:1041－1042.

［2］施佳平，刘洪江.高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定芪黄胶囊中黄芪甲苷的含量［J］.中国药房，2006，17(13):1013 －1014.

［3］李涛，郝武常，徐长根，等.HPLC－ELSD法测定不同产地女贞子中齐墩果酸与熊果酸的含量［J］.中药材，2005，28(5):391 －393.