黄瓜和甜瓜中噻苯隆残留量检测方法研究

陆道训

摘要[目的]建立高效液相色谱法测定黄瓜和甜瓜中噻苯隆残留量的方法。[方法]样品经匀浆处理后用乙腈提取，弗罗里硅土柱层析净化，用高效液相色谱仪测定。[结果]该方法的最低检测浓度为0.01 mg/kg，在0.01～0.50 mg/kg加标浓度范围内方法的回收率在75.7%～91.1%，变异系数0.54%～8.02%。[结论]该方法具有较高的灵敏度，其准确度和精密度均可满足农药残留分析要求。

关键词噻苯隆；残留分析；黄瓜；高效液相色谱

中图分类号S481+.8文献标识码A文章编号0517-6611（2014）36-13070-02

Abstract[Objective] The aim was to establish an HPLC detection method of Thidiazuron residue in cucumber and melon. [Method] The samples of cucumber and melon after homogenates were extracted by acetonitrile， purified by Florisil column， and detected by HPLC. [Result] The minimum detectable concentration of the method was 0.01 mg/kg， and the recovery was 75.7%-91.1% at the concentration from 0.01 to 0.50 mg/kg， and the coefficient of variation was 0.54%-8.02%. [Conclusion] The method has high sensitivity， and its accuracy and precision can satisfy the demand of pesticide residue analysis.

Key wordsThidiazuron； Residue analysis； Cucumber； HPLC

农药的使用对消除农作物病、虫、草害，提高农业产量作出巨大贡献。但是，随着农药使用量的不断加大，农药残留问题也日益突出。随着生活水平的提高，人们对农药残留问题也越来越重视，许多国家制定了农药在农产品中的最高残留限量（MRLs）。噻苯隆属苯基脲类衍生物，是近年来国外发现的一种新型高效植物生长调节剂，不仅在棉花种植上用作落叶剂[1-2]，也用作瓜果的膨大剂，提高瓜果的产量及贮运性[3-5]。瓜果生产中使用噻苯隆后，瓜果中噻苯隆的残留问题势必受到人们的关注。因此，开展瓜果中噻苯隆的残留检测方法研究具有重要的实际意义。

为此，笔者建立了高效液相色谱法测定黄瓜和甜瓜中噻苯隆残留量的方法，以期为该农药的残留检测提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药品与试剂。

噻苯隆（纯度96.5%）；乙腈、甲醇为色谱纯，乙酸乙酯、正己烷、氯化钠、无水硫酸钠、弗罗里硅土等均为分析纯。

1.1.2仪器。

高效液相色谱仪（Agilent 1200型，美国Agilent公司）、多功能食品加工机（SQ2199N型，上海帅佳电子科技有限公司）、调速多用振荡器（ZD2型，江苏金坛国胜实验仪器厂）、离心机（TDZ5WS型，湖南长沙湘仪离心机仪器有限公司）、旋转蒸发仪（N1100型，上海爱朗仪器有限公司）。

1.2方法

1.2.1样品制备。

黄瓜和甜瓜样品经切碎后用多功能食品加工机匀浆成糊状。

1.2.2样品的提取。

称取制备好的样品20.00 g于100 ml的离心管中，加入40 ml乙腈，超声萃取10 min，然后加入500 g氯化钠，4 000 r/min离心5 min，吸出上层乙腈相，无水硫酸钠脱水并转入250 ml浓缩瓶中，残渣再重复提取2次，合并提取液，用旋转蒸发仪（45 ℃）浓缩至干，待净化。

1.2.3样品净化。

采用柱层析法。层析柱从下往上依次装入2 cm无水硫酸钠、5.00 g弗罗里硅土、2 cm无水硫酸钠，用10 ml甲醇预淋后，5 ml甲醇转移上样，用40 ml乙酸乙酯-正己烷（1∶9，V/V）淋洗液淋洗，收集全部淋洗液，用旋转蒸发仪（35 ℃）浓缩至干，最后用5 ml甲醇溶解定容，待进样分析。

1.2.4分析測定。

液相色谱检测条件：色谱柱Agilent HCC18柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：35 ℃；流动相：乙腈-水（40∶60，V/V），流速0.8 ml/min；检测波长288 nm；进样体积20 μl。

2结果与分析

2.1提取溶剂的选择

由于噻苯隆在甲醇和乙腈中的溶解度都很大，所以分别比较该2种提取剂的效果。结果表明，分别用相同体积（40 ml）的甲醇和乙腈提取3次，甲醇提取液中杂质明显比乙腈提取液多，色素颜色很深，且经过柱层析净化后仍有很多杂质，干扰和影响噻苯隆的定量分析。而乙腈提取液经过净化后，基本没有干扰分析测定的杂质，且回收率均在75%以上。因此，选择乙腈为提取剂。

2.2净化方法的确定

样品净化方法有多种，常用的是柱层析净化，因此，重点考查柱层析净化方法。以弗罗里硅土为吸附剂，以乙酸乙酯和正己烷混合溶液为淋洗剂，比较不同比例（4∶6、3∶7、2∶8、1∶9、0∶10）的乙酸乙酯和正己烷混合溶液对样品净化效果和回收率的影响。结果表明，当乙酸乙酯和正己烷比例为1∶9时，净化效果好且回收率高（大于75%）。乙酸乙酯和正己烷比例大于1∶9时净化效果较差，色谱图中有干扰分析测定的杂峰；乙酸乙酯和正己烷比例为0∶10时，色谱图中杂质峰较少，但噻苯隆的回收率低（小于50%）。因此，选择乙酸乙酯和正己烷比例为1∶9的淋洗剂。

2.3色谱条件的确定

紫外扫描结果表明噻苯隆的最大吸收波长为288 nm，因此，选择288 nm为测定波长。以乙腈和水为流动相，比较流动相

不同比例和流速对色谱分离的影响。结果表明，

当乙腈和水比例为40∶60（V/V）、流速为0.8 ml/min时，目标化合物噻苯隆的保留时间为13.1 min左右，其色谱响应较高（图1），目标化合物与杂质的分离也较好，杂质峰不干扰噻苯隆的定量（图2）。

2.4标准曲线的绘制

分别配制0、0.05、0.10、0.20、1.00 mg/L的噻苯隆标准溶液，在“1.2.4”色谱条件下进样测定。以浓度（mg/L）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。噻苯隆在0～1 mg/L浓度范围内，峰面积与浓度成良好的线性关系（图3）。

2.5方法的灵敏度、准确度和精密度

从表1可见，分别在匀浆后的空白黄瓜和甜瓜样品中添加0.01、0.10、0.50 mg/kg噻苯隆，用上述方法提取、净化、测定，计算回收率和变异系数。结果表明，噻苯隆的最低检出量为0.2 ng，最小检测浓度（LOQ）为0.01 mg/kg。目前，我国尚无黄瓜和甜瓜中噻苯隆的MRL值限量标准，欧盟规定水果、蔬菜中噻苯隆的MRL值为0.02 mg/kg；韩国规定葡萄中噻苯隆的MRL值为0.20 mg/kg[6]。该方法的最低检测浓度均低于上述限量标准，可见，该方法具有较高的灵敏度。

在加标浓度范围内，该方法的回收率在75.7%～911%，变异系数0.54%～8.02%。方法的回收率较高，变异系数较小。因此，方法的灵敏度、准确度和精密度均符合农药残留分析要求。

3结论

建立了高效液相色谱法测定黄瓜和甜瓜中噻苯隆残留量的方法。黄瓜和甜瓜样品经匀浆处理后用40 ml乙腈超声提取3次，提取液浓缩干后，用弗罗里硅土柱层析净化，淋洗液为40 ml乙酸乙酯∶正己烷（1∶9，V/V）。淋洗液浓缩干后用甲醇定容，用高效液相色谱仪测定。

加标回收试验表明，该方法的最低检测浓度为0.01 mg/kg，在0.01～0.50 mg/kg加

标浓度范围内，方法的回收率在75.7%～91.1%，变异系数054%～8.02%。方法的灵敏度、准确度和精密度均符合农药残留分析要求。

参考文献

[1] 张毅.噻苯隆油懸浮剂脱叶效果试验[J].新疆农垦科技，2012（8）：43-44.

[2] 郑本明.棉花脱叶剂50%噻苯隆脱叶试验[J].新疆农业科技，2011（6）：46-47.

[3] 王明芳，李志强.噻苯隆在红地球葡萄上的施用效果[J].新疆农垦科技，2010（3）：61.

[4] 陈庆良，白瑞芳，单鸿臣，等.噻苯隆在无核白鸡心葡萄上的应用效果试验[J].西北园艺，2010（4）：43-44.

[5] 杨博，司春爱.0.1%噻苯隆制剂在苹果上的应用研究[J].西北园艺，2009（2）：44-46.

[6] 庄无忌.国际食品饲料中农药残留限量法规（第一卷）[M].北京：化学工业出版社，2010.