茸果鹧鸪花不同部位脂溶性成分研究

刘寿柏等

摘 要 为研究茸果鹧鸪花[Trichilia sinensis Bentv.]叶与根的脂溶性成分，采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）对其化学成分进行分离分析，通过Nist2008和Wiley275质谱库检索分别鉴定各化学成分；经面积归一化法测定各样品中化学成分的相对百分含量；用滤纸片琼脂扩散法测定其抗菌活性。结果分别从茸果鹧鸪花叶、根的脂溶性成分中分离出22、41个化合物，分别鉴定了其中的20、41个化合物，所鉴定的化合物其相对含量分别占各脂溶性成分总量的86.99%、91.33%。抗菌活性结果表明：其脂溶性成分对金黄色葡萄球菌均有抑制作用。

关键词 茸果鹧鸪花；根叶；脂溶性成分；气相色谱-质谱联用；抗菌活性

中图分类号 Q949.718.3 文献标识码 A

Study on the Liposoluble Components from Different Parts

of Trichilia sinensis Bentv.

LIU Shoubai1，2，MEI Wenli2，3， GUO Zhikai2，3， ZENG Yanbo2，3， DAI Haofu2，3 *

1 Horticultural and Garden College， Hainan University， Haikou， Hainan 570228， China

2 Hainan Key Laboratory for Research and Development of Natural Products from Li Folk Medicine / Institute of Tropical

Bioscience and Biotechnology， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Haikou， Hainan 571101， China

3 Haikou Key Laboratory for Research and Development of Tropical Natural Products， Haikou， Hainan 571101 China

Abstract The study was aimed to clarify the chemical constituents of the liposoluble extracts from the roots and leaves of T. sinensis Bentv. The chemical compounds were separated and analyzed by GC-MS， and identified by Mass Spectral Database Nist 2008 and Wiley 275. Antibacterial activity was assayed by paper disk diffusion method. The relative content of each component was determined by area normalization. 41， 22 compounds were separated and 41， 20 compounds were identified from the roots and leaves， respectively. The ratios of identified compounds accounted for 91.33%， 86.99% of total liposoluble components in different parts as well. These liposoluble extracts exhibited inhibitory effect on Staphylococcus aureus.

Key words T. sinensis Bentv.； Roots and leaves； Liposoluble Components； GC-MS； Antibacterial activity

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.08.034

茸果鹧鸪花[Trichilia sinensis Bentv.]别名绒果海木、白骨走马，是楝科（Meliaceae）鹧鸪花属（Trichilia）植物，主要产于海南、广东、广西等省（区）[1-3]。茸果鹧鸪花的根、叶苦，寒，有轻毒，用于杀虫、燥湿、止痒、止血[3]。鹧鸪花属植物富含三萜（主要为四降三萜），甾体，酚性化合物，具有抗肿瘤、抗氧化、杀虫等生物活性[4-9]。目前，有关茸果鹧鸪花的化学成分及生物活性报道较少，仅岳建民等[10]对其枝条乙酸乙酯萃取物的四降三萜类化学成分及抗炎活性的研究报道，但对同一植物不同部位的比较研究及其抗菌活性尚未见报道。本研究对茸果鹧鸪花根和叶的石油醚萃取物，经GC-MS对其脂溶性成分及含量进行了定性定量分析，用滤纸片琼脂扩散法测定其抗菌活性，并比较不同部位脂溶性成分的异同，为茸果鹧鸪花这一药用植物资源在临床的应用及其资源的进一步合理开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试材料 茸果鹧鸪花根、叶于2011年11月采于海南省万宁市，由中国热带农业科学院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴定为楝科（Meliaceae）鹧鸪花属（Trichilia）植物茸果鹧鸪花[T. sinensis Bentv.]，凭证标本（20111120）存放于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。

1.1.2 仪器和试剂 美国安捷伦公司HP6890/5975C GC/MS联用仪，色谱柱为ZB-5MSI 5% Phenyl-95% DiMethylpolysiloxane（30 m×0.25 mm×0.25 μm）弹性石英毛细管柱。乙醇、石油醚等均为国产AR。

1.2 方法

1.2.1 提取方法 样品自然风干，粉碎过5目筛，根及叶称重均为500.0 g，分别用95%乙醇（2.0 L）室温浸提3次，每次超声处理30 min，合并提取液，减压浓缩至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取后减压浓缩得到油状提取物。

1.2.2 脂溶性成分的分析鉴定 气相色谱条件：柱温50 ℃（保留2 min），以5 ℃/min升温至310 ℃，保持10 min；汽化室温度250 ℃；载气为高纯He（99.999%）；柱前压7.62 psi，载气流量1.0 mL/min；分流比20 ∶ 1，溶剂延迟时间：4.0 min。

质谱条件：离子源为EI源；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；电子能量70 eV；发射电流34.6 μA；倍增器电压1364 V；接口温度280 ℃；质量范围20～480 u。

数据处理及质谱检索：对总离子流图中的各峰经质谱计算机数据系统检索及核对Nist2008和Wiley275标准质谱图进行鉴定，用峰面积归一化法测定了各化学成分的相对质量分数。

1.2.3 抗菌活性测定 以金黄色葡萄球菌为指示菌，采用滤纸片法[11]测定脂溶性成分的抗菌活性。将金黄色葡萄球菌制成一定浓度的菌悬液（105～107 cfu/mL），用棉签将其均匀涂布于供试无菌平板，制成含菌平板。选用直径为6 mm 灭菌滤纸片，将脂溶性成分配成浓度为20 mg/mL样品溶液，并加25 μL于滤纸片上，待溶剂挥干后放置于含菌平板上，每处理重复3次，以硫酸卡那霉素为阳性对照，37 ℃恒温培养。24 h后观察结果，测量并记录抑菌圈直径。

2 结果与分析

2.1 GC-MS 分析结果

按上述条件对茸果鹧鸪花根、叶脂溶性成分进行GC-MS分析，对总离子流图中的各峰经质谱计算机数据系统检索及核对Nist2008和Wiley275标准质谱图进行鉴定，采用色谱峰面积归一化法计算其相对含量，具体结果见表1和表2，总离子流图见图1和图2。

茸果鹧鸪花根中共鉴定出41个化合物，占总量的91.33%，含量大于1%的有15个，含量大于5%的有5个，其含量较高的成分依次为棕榈酸甲酯（18.39%）、亚油酸甲酯（18.09%）、油酸甲酯（10.86%）、2，3-二甲基-4（E）-己烯酸（5.34%）、油酸（5.13%）；根脂溶性成分主要为脂肪酸类化合物。

茸果鹧鸪花叶脂溶性成分中共鉴定出20个化合物，占总量的86.99%，含量大于1%的有11个，含量大于5%的有6个，其含量较高的成分依次为穿贝海绵甾醇（26.41%）、麦角-5-烯醇（12.65%）、茂瑞烯醇（12.60%）、豆甾醇（7.04%）；叶脂溶性成分主要为甾体类化合物。

茸果鹧鸪花根与叶脂溶性成分中共有成分较少，共有成分分别为棕榈酸甲酯、棕榈酸、硬脂酸，且含量明显不同，棕榈酸甲酯根中含量比叶中高出17.67%，棕榈酸叶中含量比根中高出1.96%。

2.2 活性测定结果

以滤纸片琼脂扩散法测定脂溶性成分的抗菌活性，结果表明，茸果鹧鸪花根与叶脂溶性成分对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，抑菌圈直径分别为11.23 mm（28.85 mm），8.15 mm（26.76 mm）（括号中为阳性对照）。

3 讨论与结论

本研究从茸果鹧鸪花根及叶中共鉴定出59种化学成分，这些化学成分在茸果鹧鸪花化学成分已有研究中均未见报道。根脂溶性成分主要为脂肪酸类化合物，此外，还有一些倍半萜、长链醇、醛、含氮化合物等；叶脂溶性成分主要为甾体类化合物，此外也含有一些脂肪酸类化合物、含氮化合物等。茸果鹧鸪花与鹧鸪花在亲缘关系上较近，为同属植物，同属植物化学成分的类型具有一定的相似性，然而本研究与前人关于该属植物主要脂溶性成分的研究结果具有一定的差异，Agarwal G等[12]用水蒸气蒸馏法从鹧鸪花根中得到的脂溶性成分主要成分是倍半萜类化合物（69.3%），包括β-花柏烯、α-毕橙茄醇、δ-杜松烯、顺-去氢白菖烯、β-石竹烯、β-桉叶醇、金钟烯醇等。Kumar R等[13]用乙酸乙酯提取的鹧鸪花根中脂溶性成分主要是倍半萜类化合物（30.7%），包括β-花柏烯、α-香柑油烯等；单萜类化合物（15.7%），包括甘菊环、Heminellitene等。Senthilkumar N等[14]用甲醇提取鹧鸪花叶中脂溶性成分包括棕榈酸甲酯（13.4%）、萘（8.5%）、Benzene，1-（1，5-dimethyl-4-hexyl-4-methyl（5.2%）、Phenol，2，4-bis（1，1-dimethylethyl）（5.2%）以及一些含氮化合物（8.5%）等。Kumar R等[13]用乙酸乙酯提取的鹧鸪花叶中脂溶性成分主要是单萜类化合物 （9.1%）和倍半萜类化合物（9.7%），包括甘菊环、蒎烯、β-石竹烯等；这些差别可能与生长环境、采集季节以及提取方法的差别有关。

本文首次对茸果鹧鸪花根与叶脂溶性化学成分及其抗金黄色葡萄球菌的活性进行了初步研究，丰富了该植物的化学成分，拓宽了该药用植物的用途，为寻找植物源抗菌剂提供了理论依据，抗菌活性可能是多种物质协同作用的结果，但其主要抗菌物质及其抗菌作用机制还有待进一步研究。

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责任编辑：叶庆亮