常用梅毒检测方法的比较和评价

范烨华 钱金李

【摘 要】目的：本文主要比较和评价梅毒的4种检测方法的灵敏度和特异性，为选择筛查梅毒的方法提供参考，进而总结出简单快捷的最佳筛查方法，用于大批量标本的诊断。方法：用快速血浆反应素试验（RPR）、甲苯胺红快速反应素试验（TRUST）、梅毒螺旋体抗体体外诊断胶体金法（SYP）、酶联免疫吸附试验（ELISA）同时检测226例血清标本，其中经梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）法确证97份为梅毒患者血清，129份血清为对照组。结果：RPR、TRUST、SYP、ELISA这四种方法的灵敏度分别为93.81%、94.84%、97.94%、98.97%，特异性分别为95.35%、96.12%、98.45%、99.22%。结论：ELISA法的灵敏度和特异性明显高于其他三种方法，RPR、TRUST这两种方法适用于筛选试验，也可应用于梅毒治疗疗效观察，SYP法适用于大规模体检、急诊手术，ELISA法适于用复检试验、手术或输血前的试验。

【关键词】梅毒；快速血浆反应素试验（RPR）；甲苯胺红快速反应素试验（TRUST）；梅毒螺旋体抗体体外诊断胶体金法（SYP）；酶联免疫吸附试验（ELISA）

【中图分类号】R377+.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）04-01920-02

梅毒（Syphilis）是由苍白螺旋体（Treponema pallidum，TP）所引起的一种性传播疾病，其传染性强，感染后可引起全身各组织、器官的损害，危害较大。今年来，在我国梅毒的发病率呈上升趋势。在梅毒诊断中，由于抗体效价或方法灵敏性特异性等原因使诊断结果常出现偏差。因此选择灵敏度高、特异性强的检测方法，对控制梅毒传播意义重大。实验室合理、有效的选用检验方法，避免错诊、误诊和漏诊是至关重要的。目前我国梅毒螺旋体抗原血清试验方法主要有快速血浆反应素试验（RPR）、甲苯胺红快速反应素试验（TRUST）、梅毒螺旋体抗体体外诊断胶体金法（SYP）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）、梅毒印迹试验（WB）、TP-DNA测定实验（PCR）等试验方法。本文就梅毒血清学检测中常用的4种（RPR、TRUST、SYP、ELISA）方法进行了对比分析。

1材料和方法

1.1 标本来源 226份待测血清其中97份确诊梅毒患者血清，129份为对照血清。待测血清全部来自2012年3月至2012年5月到本保健所进行婚前检查以及梅毒筛查者共2568份血清，其中对照组血清129例为随机抽取。129例非梅毒患者中孕妇33例，病毒性肝炎患者9例，类风湿性疾病患者5例，慢性肾炎患者6例，75岁以上健康老年人21例，健康体检者55人。

1.2 试剂 试验用RPR试剂由上海科华生物药业有限公司提供，TRUST试剂由上海荣盛生物药业有限公司提供，SYP试剂由艾康生物技术（杭州）有限公司提供，ELISA试剂由英科新创（厦门）科技有限公司提供，TPPA由日本富士株式会社提供。

1.3方法 用RPR、TRUST、SYP、ELISA法同时检测，所有检测方法操作和实验条件与试剂说明书保持一致，试剂均在有效期内使用。

1.3.1快速血浆反应素试验（RPR）

快速血浆反应素试验是一种常用的梅毒血清学试验，检查的是人体内的反应素。该试验原理是用未经过处理的活性炭颗粒（直径3～5）吸附VDRL抗原（0.03%心拟脂、0.21%卵磷脂、0.9%胆固醇，用无水乙醇配置）。此颗粒如果与待检血清中反应素结合，便形成黑色凝集块，可肉眼观察结果。

1.3.2.甲苯胺红快速反应素试验（TRUST）

TRUST试验是检测梅毒患者血清中存在着的反应素，采用VDRL抗原重悬于特制的甲苯胺红溶液中，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的粉红色凝块。

1.3.3梅毒螺旋体抗体体外诊断胶体金法（SYP）

梅毒抗体试纸条是采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析分析技术来定性检测全血、血清、血浆中是否有梅毒抗体，试剂盒含有被事先固定于膜上测试区（T）的鼠抗人抗体和质控区（C）的相应抗体。

1.3.4酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA是利用重组梅毒螺旋体TP47、TmPA抗原包被微孔板和辣根过氧化物酶标记的TP47、TmPA抗原夹心法检测血清中的梅毒特异性抗体。

1.4统计方法 采用χ2检验。

2 结果

四种检测方法对待测血清检测的敏感度和特异性比较见表1。

3 讨论

目前临床对梅毒螺旋体感染的诊断方法越来越多，但临床应用不一。人感染梅毒螺旋体后，血液产生两种抗体，一种是非梅毒螺旋体特异性抗体，是梅毒螺旋体在破坏组织时释放的抗原性物质（心磷脂）刺激机体产生的有抗体性质的反应素（抗心磷脂抗体），检测方法如RPR、TRUST、VDRL、USR等；另一种是梅毒螺旋体特异性抗体包括IgM和IgG，检测方法如TPHA、ELISA、SYP等。

本研究用4种方法对标本进行检测，结果显示RPR以及TRUST的灵敏度和特异性低于其他2种方法，这是因为人体感染梅毒4～10周血清中才可产生一定数量的抗体，非特异性抗体比特异性抗体晚1周出现，在疾病的非活动期和治疗后容易消失，易造成漏检。而且在人体某些生理或病理状态下，RPR和TRUST易出现假阳性，如怀孕、病毒性肝炎、结核、亚急性细菌性心内膜炎、类风湿性疾病、系统性红斑狼疮、慢性肾炎等，健康老年人中也可出现假阳性结果。但这两种方法可以用于梅毒的治疗观察、随访和复发的辅助诊断。

SYP胶体金法是近几年迅速发展起来的一种体外快速诊断技术，它结合了特异的抗原抗体反应与免疫层析技术，应用现代生物工程技术制备了纯化的单克隆梅毒螺旋体基因工程抗原，能检测出梅毒螺旋体抗体，具有快速（5～15min）、简便和准确的特点，而且可用于全血、血清或血浆的检测，一次加样，不需要特殊的仪器，既可以批量检测，也可以用于少量标本的检测。梅毒胶体金方法的敏感性高于RPR和TRUST，具有较高的特异性。因此梅毒胶体金方法可以作为梅毒的大规模体检、急症手术、床边检验和无偿献血的初筛试验，具有推广意义。

梅毒螺旋体ELISA试验是梅毒特异性抗原包被在微孔板上，采用双抗原夹心法检测梅毒螺旋体特异性IgM和IgG抗体，其敏感度高、特异性好、試验方法操作简便、稳定性好，且不受溶血和纤维蛋白影响，可自动化进行，结果清晰，并可与全自动免疫分析系统结合进行加样检测和分析，采用电脑软件处理、保存、传输数据，使检测更客观准确，数据管理更规范化，是目前梅毒血清学诊断实验的首选方法。需注意的是ELISA法检测时，如果血清中梅毒抗体浓度过高，会产生钩状效应。对于我们所及其他医疗单位来说，进行大量血液样本筛查，可利用ELISA和TRUST两种方法的互补来提高梅毒的检出率和准确性。

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