哨兵动物口蹄疫抗体及病原学检测报告

郭会玲,易 忠,魏玉荣，马文戈，埃尼瓦尔·太外库力，斯马依·伊斯拉木，

达力夏·孜乃提5，包拉提6，魏 婕2，王 延2，薛 英2，黄 炯2*，姚 刚1

（1.新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052；2.新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐 830000；3.新疆喀什地区动物疾病控制与诊断中心，新疆 喀什 844000；4.新疆塔什库尔干县畜牧兽医站，新疆 塔什库尔干 845250；5.新疆塔什库尔干县达布达尔乡畜牧兽医站，新疆 塔什库尔干 845250；6.新疆昭苏县畜牧兽医站，新疆 昭苏 835600）

哨兵动物口蹄疫抗体及病原学检测报告

郭会玲1、2,易 忠2,魏玉荣2，马文戈2，埃尼瓦尔·太外库力3，斯马依·伊斯拉木4，

达力夏·孜乃提5，包拉提6，魏 婕2，王 延2，薛 英2，黄 炯2*，姚 刚1

（1.新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052；2.新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐 830000；3.新疆喀什地区动物疾病控制与诊断中心，新疆 喀什 844000；4.新疆塔什库尔干县畜牧兽医站，新疆 塔什库尔干 845250；5.新疆塔什库尔干县达布达尔乡畜牧兽医站，新疆 塔什库尔干 845250；6.新疆昭苏县畜牧兽医站，新疆 昭苏 835600）

2013年哨兵动物口蹄疫抗体及病原学检测结果表明，哨兵动物群体中不存在口蹄疫病畜或健康带毒畜，但是群体口蹄疫免疫抗体水平不高，需要强化免疫。

哨兵动物；口蹄疫；免疫抗体；病原学

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是有口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的世界性重大动物疫病，严重制约着全球畜牧业的发展，世界各国深受其害[1]。为了了解新疆边境地区野生偶蹄动物中口蹄疫潜伏和感染状况，评价和监测口蹄疫随野生动物跨境传播的流行因素，本研究团队在边境地区设置哨兵动物监测站，并对哨兵动物进行口蹄疫抗体水平及病原学检测。现将检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 样品采集情况动物种类：羊、牛、牦牛及骆驼。样品种类：血清、O-P液。

采集地点：阿尔泰山山区哨兵动物监测站、天山山区哨兵动物监测站及昆仑山山区哨兵动物监测站。

1.2 检测方法及试剂盒

口蹄疫免疫抗体检测使用液相阻断ELISA（Liquid-phase blocking ELISA）方法，试剂盒购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号20130927。

口蹄疫感染抗体检测使用非结构蛋白3ABC ELISA（FMD 3ABC-I-ELISA）方法，试剂盒购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号20130710。

口蹄疫病原学检测采用多重RT-PCR（Multi-RT-PCR）方法，试剂盒购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号20130827。

1.3 操作步骤与判定标准

1.3.1 口蹄疫免疫抗体检测

按照口蹄疫免疫抗体检测使用液相阻断ELISA（Liquid-phase blocking ELISA）说明书的要求进行。结果判定：

1.3.1.1 试验成立的标准 每次试验，每块板必须设立病毒抗原对照和阴阳性血清对照。病毒抗原对照至少两个孔的OD值在1.0以上，最好在1.0～1.6之间；阳性对照抗体滴度应在1∶10241滴度；阴性对照抗体滴度应小于1∶4。

1.3.1.2 病毒抗原对照平均OD值50%计算（临界值） 抗原对照孔是4孔，分别弃去最高和最低OD值，计算剩余2孔的平均OD值，再除以2，即为50%对照值。该值即为临界值。

1.3.1.3 判定标准 以病毒抗原对照平均OD值的50%为临界值。被检血清OD值大于临界值的孔为阴性，小于或等于的孔为阳性，阳性孔的OD值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。如病毒抗原对照平均OD值为1.2，则其50%为0.6。如待检血清在1∶128时的OD值为0.6，则该份待检血清的抗体滴度为1∶128。若临界值处于两个之间，则抗体滴度取中间值。

1.3.1.4 ELISA抗体滴度与免疫动物攻毒保护的关系 牛、羊：ELISA抗体效价≥1∶128时，属于99%以上保护范围；ELISA抗体效价≤1∶16时，属于不保护范围，需要进行基础免疫；抗体效价在1∶22～1∶90时，属于50%保护效价范围，需要进行加强免疫。

1.3.2 口蹄疫感染抗体检测

按照口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（FMD 3ABC-I-ELISA）说明书的要求进行。

结果判定：按检测试剂盒判定标准，即效价＜0.2，为阴性；效价在0.2～0.3之间为可疑；效价＞0.3为阳性。阳性样品应进行复检。

1.3.3 口蹄疫病原学检测

按照口蹄疫病原学检测采用多重RT-PCR（Multi-RT-PCR）说明书的要求进行。

结果判定紫外灯下，强阳性样品电泳结果应为3条大小不一的条带，分别为634bp、483bp和278bp。某一待检样品扩增产物DNA带至少有一条与上述条带大小相符，同时空白对照无扩增条带，则该样品判定为阳性，否则为阴性。

2 结果与分析

2.1 哨兵动物监测站样品采集情况

本研究边境地区哨兵动物监测站动物进行定期采样，采样涉及3个地区4种动物2种类型的样品，共计566份样品，具体样品采集情况见表1。

表1 动物样品采集情况

2.2 哨兵动物监测站动物样品口蹄疫检测情况

为了清楚的了解哨兵动物口蹄疫免疫情况及携带或感染口蹄疫情况，分别对采集的动物样品进行了口蹄疫3种检测项目，具体见表2。

表2 监测站动物样品口蹄疫检测情况

2.3 口蹄疫免疫抗体检测结果

采集哨兵动物样品的口蹄疫3种血清型免疫抗体检测结果见表3。

表3 哨兵动物口蹄疫免疫抗体检测结果

从表3中可见，阿尔泰山的骆驼口蹄疫免疫抗体最低，3种血清型抗体均≤1:16；阿尔泰山的牛及天山的牛口蹄疫免疫抗体水平比较整齐，3种血清型抗体几乎均在22～90或≥1:128；3个地区的羊及昆仑山的牦牛口蹄疫免疫水平均不高，有待于免疫加强。

2.4 口蹄疫感染抗体检测结果

采集哨兵动物样品的口蹄疫感染抗体检测结果如表4。

表4 哨兵动物样品口蹄疫感染抗体监测结果

从表4中可见牦牛未检测到感染抗体；阿尔泰山的牛、羊中也未检测到口蹄疫感染抗体；昆仑山的牛、羊口蹄疫感染阳性率分别是6.35%和7.98%；天山的牛、羊感染抗体阳性率更高，分别是89.47%和16.13%。口蹄疫感染抗体水平高，可能来自两个方面：曾经感染过口蹄疫；反复注射疫苗后引起的非结构蛋白抗体致使检测结果呈现假阳性。为了更清楚获知感染抗体阳性动物是真正被口蹄疫感染还是注射疫苗造成，可通过病原学检测佐证。

2.5 口蹄疫病原学样品监测结果

采集哨兵动物样品的口蹄疫病原学检测结果如表5，部分样品的RT-PCR结果见图1。

表5 哨兵动物样品口蹄疫病原学检测结果

图1 部分哨兵动物样品口蹄疫病原学检测RT-PCR结果

从表5和图1（部分样品RT-PCR电泳结果）可见，3个地区186份样品的病原学检测均为阴性，可见上述哨兵动物均不存在口蹄疫感染情况，检测到的高感染抗体水平均有反复注射疫苗引起，也间接反应3ABC-I-ELISA试剂盒在检测反复疫苗动物感染抗体水平时存在不足，如果要确实掌握动物群体口蹄疫感染情况，必须将免疫抗体检测与病原学检测相结合。

3 讨 论

哨兵动物(sentinel animals)通常为有意识地暴露在某一特定环境中用来查明某传染因子存在状况的易感动物。由于哨兵动物在动物疫病监测中具有成本低、使用方便及可操作性强等特点，OIE和发达国家所普遍采用哨兵动物进行动物疫病监测[2]。

本研究中通过对阿尔泰山、天山及昆仑山边境地区哨兵动物监测站动物进行样品采集、样品口蹄疫抗体及病原学检测，结果显示目前哨兵动物群体中不存在口蹄疫病畜或健康带毒畜。

3个地区的哨兵动物群体口蹄疫免疫抗体较低，且免疫抗体参差不齐，尤其是阿尔泰山山区的骆驼几乎检测不到免疫抗体水平（3种血清型抗体均≤1:16），因此3个地区的哨兵动物群体均需要加强口蹄疫免疫。

虽然哨兵动物样品感染抗体检测中出现极高的感染抗体水平即天山山区的牛、羊感染抗体阳性率分别是89.47%和16.13%，但是通过病原学复核检测后发现病原学样品监测结果均为阴性。这些与本研究团队曾经的检测结果一致：感染抗体水平高与动物免疫次数有一定关系，免疫的次数越多，其检出率越高[3]。

[1]王永录，张永光，方玉珍，等.我国不同时期A型口蹄疫流行概况及疫苗毒株与流行毒株抗原关系[J].中国兽医科学，2013,43（S1）:7-10.

[2]蔺长明.巴西应用哨兵动物监测口蹄疫[J].畜牧与兽医,2003,35(2):27.

[3]易忠，郭会玲，康强，等.口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测和多重RT-PCR试剂盒的检测结果对比[J].中国兽医科学，2013,43（S1）:297-299.

Survey Report on the Antibody and the Etiology of Foot-and-M outh Disease of Sentinel Animal

GUO Hui-ling1、2,YIZhong2,WEIYu-rong2,MAWen-ge2,AINIWAER·Taiwaikuli3, SIMAYI·Yisilamu4,DALIXIA·Zimaiti5,BAO La-ti6,WEIJie2,WANG Yan2, XUE Yin2,HUANG Jiong2*,YAO Gang1
1.Veterinary Department，Xinjiang Agricultural University,Urumqi830052,China; 2.Institute of Veterinary Science,Animal Sciences Academy of Xinjiang,Urumqi830000,China; 3.Control and Diagnosis Center of the Animal Disease from Kashgar Region,Kashgar 844000,China;
4.Stock Farm Veterinary Station of Tashkurgan County，Tashkurgan Xinjiang 845250，China; 5.Dabudar Country Stock Farm Veterinary Station of Tashkurgan County, Tashkurgan Xinjiang 845250，China; 6.Stock Farm Veterinary Station of Zhaosu County,Zhaosu Xinjiang 835600,China.

The present Survey was done on the antibody and the etiology of foot-and-mouth disease of sentinel animal in 2013.The results showed that there were not exist foot-and-mouth disease in the sentinel animals.Nevertheless immune antibodies of foot-and-mouth disease were lower level in the sentinel animals, need to strengthen the immune.

sentinel animals；foot-and-mouth disease；immune antibodies；etiology

S855.5

A

1003－6377（2014）01－0064-05

2013-12-22

“十二五”国家科技支撑计划（2013BAD2B04），公益性行业（农业）科研专项（201103008）

郭会玲（1973-），女，甘肃人，兽医师，研究生，主要从事动物传染病研究。

黄炯（1963-），男，新疆人，研究员，博士生导师，主要从事动物传染病与生物制品研发。