高效液相色谱法测定消食健胃片中熊果酸含量

李 培，潘广洲

（山东省聊城市药品检验所，山东 聊城 252000）

消食健胃片由山楂、六神曲、麦芽、槟榔组方，具有开胃消食、 消积的功效，用于食欲不振、消化不良、脘腹胀满。原质量标准收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂（第十一册）》，仅有性状、鉴别等简单的检验项目。为了更好地对产品进行质量控制，笔者对方中主要成分山楂所含熊果酸进行了含量测定研究。经过反复试验，制订了合理的供试品溶液制备方法及测定的色谱条件，建立了测定消食健胃片中熊果酸含量的高效液相色谱（HPLC）法，并制订出合理的含量限度。

1 仪器与试药

Agilent1200型高效液相色谱仪及色谱工作站（美国安捷伦公司）；TU－1901型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；BT 125 D型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。熊果酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110742－200313）；消食健胃片（山东临清华威药业有限公司，批号为20120112，20120114，20120118）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Ultimate LP－C18柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇 － 水 － 乙酸铵（85 ∶15 ∶0.4）；流速：1 mL ／min；检测波长：218 nm，柱温：30℃。在上述色谱条件下，理论板数按熊果酸计算应不低于3000。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取减压干燥至恒重的熊果酸对照品10.72mg，精密称定，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（质量浓度为0.4288 g／L）。取本品10片，精密称定，研细，称取约0.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚适量，加热回流提取5 h，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡2次，每次10mL，每次浸泡约5min，倾去石油醚，残渣用甲醇溶解，转移至25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液［1］。缺山楂阴性对照品为山东临清华威药业有限公司按消食健胃片处方制备工艺去掉山楂制备而成，取阴性对照品约0.5 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：取阴性对照品溶液并进样测定。色谱图中，在熊果酸对照品峰处无峰出现，表明该方法提取时其他药材对测定无干扰（图 1）。

线性关系考察：分别精密量取熊果酸对照品贮备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，置 10mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。按2.1项下色谱条件进样10μL，记录色谱图，以进样量（X，μg）与峰面积（Y）作回归计算，得回归方程Y＝659.13X－393.24，r＝0.9995（n＝6）。结果表明，熊果酸对照品进样量在0.4288～4.288μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

重复性试验：精密称取同一批样品（批号为20120112）6份，按2.2项下方法操作，制得供试品溶液，测定峰面积并计算熊果酸含量。结果熊果酸平均含量为每片0.992 7mg，RSD＝0.89%（n＝6），表明该法重复性良好。

稳定性试验：精密称取样品（批号为20120112）1份，依法制备供试品溶液，分别于 0，2，4，8，10 h时测定峰面积。结果峰面积的RSD＝1.55%，表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，连续进样5次，每次10μL，记录峰面积。结果峰面积的RSD＝0.71%（n＝5），表明方法精密度良好。

加样回收试验：称取已知含量的样品（批号为20120112）约0.5 g，精密称定，分别精密加入一定量的熊果酸对照品贮备液，按供试品溶液制备方法制备6份溶液，依法进样测定含量，计算加样回收率。结果见表1。

表1 熊果酸加样回收试验结果（n＝6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定含量。结果批号为20120112，20120114，20120118的每片样品中熊果酸含量分别为0.9886，0.9785，0.9921 mg（n＝3）。结合 3 批样品含量测定结果，考虑山楂药材中熊果酸的含量及制备工艺中的其他影响因素，暂订本品每片含山楂以熊果酸计，应不得低于0.75mg。

3 讨论

试验前用紫外分光光度计在200～320 nm波长范围内进行光谱扫描，结果熊果酸在207 nm波长处有最大吸收峰；当波长小于210 nm时为紫外末端吸收，在此波长范围检测杂质干扰较大，信噪比太小，基线不平稳。试验发现，熊果酸在218 nm波长处有吸收，且在此波长处基线平稳，杂质对测定无干扰，适合含量测定，因此选择218 nm为检测波长。

通过大量试验证实，流动相的选择极其重要［1］。当选择乙腈时，由于极性较大，使熊果酸与后面的杂质峰分离不理想；改用甲醇并加入乙酸铵后，分离效果有所变化；当调节甲醇－水－乙酸铵比例为85∶15∶0.4时，熊果酸与后面杂质的分离度最理想。

本试验中建立了测定消食健胃片中熊果酸含量的HPLC法，方法操作简便、结果准确、灵敏度高、重复性好、回收率高，可作为控制消食健胃片质量的有效方法。

参考文献：

［1］丁建宝，格日勒，张建民.HPLC法测定山楂精降脂片中熊果酸的含量［J］. 中国中医药信息杂志，2006（8）：41 －43.