贝那普利防治顺铂肾损伤的实验研究

李淑贞，顾 宇，张兰兰

（沧州医学高等专科学校，河北 沧州 061001）

肾素－血管紧张素系统（RAS）是一个复杂的多成分酶－激 素系统。除传统内分泌性RAS外，局部组织或细胞都可分泌这类活性物质，这些局部分泌的RAS在机体损伤中可能较循环中的RAS起着更重要的作用。血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是肾素－血管紧张素系统的重要效应分子［1－2］。肾脏中肾素、血管紧张素的含量远远高于血液，肾皮质中AngⅡ的浓度是血浆中的1000倍［3］。本试验旨在观察新一代血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）贝那普利对顺铂肾损伤大鼠肾功能和AngⅡ的影响，阐明其防治顺铂肾损伤的作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 试药与动物

贝那普利（商品名洛汀新，北京诺华制药有限公司，国药准字H20030514，规格为14 mg×14 s）临用前用0.9%氯化钠注射液配制成0.1 g／L的混悬液；顺铂针剂（济南齐鲁制药有限公司，批号为610044CF，规格为每支10mg）临用前用0.9%氯化钠注射液配制成1 g／L的溶液。健康成年雄性 SD大鼠36只，体重180～200 g，河南省实验动物中心提供，合格证号为SCXK（鄂）2004－2007。

1.2 模型建立及分组

将健康成年SD大鼠36只适应性饲养1周后，随机分为正常组、模型组、贝那普利组，各12只。参考文献［4］，并根据预试验结果，模型组、贝那普利组大鼠给予顺铂溶液（用0.9%氯化钠注射液配制成1 g／L的溶液）5mg／kg尾静脉注射，每周1次，连续3次，复制顺铂肾损伤模型；正常组用等量0.9%氯化钠注射液尾静脉注射。从第1次尾静脉注射顺铂开始，按大鼠与人等效剂量折算方法，每天定时进行药物灌胃。贝那普利组给予贝那普利1mg／（kg·d）灌胃，正常组和模型组给予等量0.9%氯化钠注射液灌胃，均每日1次，每次灌胃液体均按每100 g体重1mL计算。

1.3 检测指标及方法

试验期间，动物普通饲料喂养，自由摄食、饮水，6周后禁食不禁水12 h，收集24 h尿液测尿蛋白（24 h Upro）的含量；10%水合氯醛4mL／kg腹腔注射麻醉，股动脉取血4mL，检测血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）的含量。取血完毕迅速取出其中1只肾脏，肉眼观察大体情况后沿冠状面切成两半，一半放入10%多聚甲醛固定以备行HE、Masson、PAS染色；另一半肾脏放入液氮中保存待测肾组织AngⅡ含量。取液氮保存标本100 mg，加预冷的0.9%氯化钠注射液2mL，冰浴条件下匀浆，再将该匀浆液置于预冷的含3.0mmol／L乙二胺四乙酸二钠、3.4mmol／L 8－羟基喹啉和3.2mmol／L二巯丙醇的试管中，煮沸10min，以3000 r／min的速率，4℃时离心10min，吸取上清液，按照AngⅡ放免分析盒说明书测定AngⅡ的含量。

1.4 统计学处理

采用SPSS 16.0统计软件，试验数据以表示，多组间均数比较采用单因素方差分析（One－Way－ANOVA），检验水准α＝0.05，若差异有统计学意义，则进一步使用q检验行两两比较。

2 结果

2.1 一般状况

在整个试验过程中，正常组大鼠精神状态良好，皮毛光滑润泽，紧贴身体，大便正常，进食无异常，体重直线上升；模型组大鼠注射顺铂后当日或次日开始出现少动闭眼、蜷卧拱背、精神萎靡、反应迟钝、摄食量明显减少、粪便稀薄、皮毛凌乱、缺乏光泽、体重下降，贝那普利组大鼠也有类似改变，但程度较模型组轻，恢复亦较快。

2.2 对顺铂肾损伤大鼠血清BUN及Scr含量的影响结果见表1。

表1 各组大鼠血清BUN及Scr含量比较（ ± s，n＝12）

表1 各组大鼠血清BUN及Scr含量比较（ ± s，n＝12）

注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05。

组别正常组模型组贝那普利组BUN（mmol／L）5.31±0.8922.70±5.98*16.70±4.40△Scr（μmol／L）108.08±11.94142.13±12.92*123.18±14.18△

2.3 对顺铂肾损伤大鼠24 h Upro含量的影响

模型组大鼠 24 h Upro含量为（14.59±3.97）mg／L，明显高于正常组的（8.32±2.06）mg／L（P＜0.01）；经用药干预，贝那普利组大鼠 24 h Upro含量为（10.39±3.33）mg／L，明显低于模型组的含量（P＜0.05）。见图 1。

图1 各组大鼠24 h Upro含量

2.4 对顺铂肾损伤大鼠肾组织AngⅡ含量的影响

模型组大鼠肾组织 AngⅡ含量为（1.18 ±0.13）ng／mg，显著高于正常组的（0.69±0.17）ng／mg（P＜0.01）；经用药干预，贝那普利组大鼠肾组织 AngⅡ含量为（0.89±0.18）ng／mg，明显低于模型组的含量（P＜0.01）。见图2。

图2 各组大鼠肾组织AngⅡ的含量

2.5 HE，M asson，PAS 染色结果

光镜下，模型组大鼠部分肾小球轻度充血，近曲小管上皮细胞明显水肿，部分小管上皮细胞不同程度坏死、脱落，管腔内有大量蛋白管型，肾小管萎缩，间质水肿，大量炎性细胞浸润、纤维母细胞增生。PAS染色显示，部分肾小管基底膜皱缩，不规则增厚。Masson染色可见胶原纤维呈条索状增生，贝那普利组病理改变明显减轻，正常组大鼠肾小球和肾小管及间质结构正常。

3 讨论

临床研究表明，顺铂的疗效与剂量密切相关。由于其主要通过肾脏排泄，对肾脏有明显的毒性［5］，且毒副作用随剂量增加而增加，在高剂量或连续给药时，可造成肾小管不可逆性损伤。连续3次尾静脉注射顺铂后，大鼠24 h Upro及血清中BUN、Scr含量明显升高，光镜下近曲小管上皮细胞明显水肿、坏死、脱落，肾小管萎缩，管腔内有大量蛋白管型，间质水肿，大量炎性细胞浸润，胶原纤维呈条索状、网状增生，表明顺铂肾损伤模型复制成功。

许多大规模的前瞻性研究表明，ACEI能够通过阻断RAS对肾脏起保护作用，显著减慢了糖尿病和非糖尿病患者肾衰竭的进展［6－7］，其保护机制依赖于其血流动力学的影响，即降压作用和非降压作用。ACEI能抑制 RAS，同时激活激肽 －缓激肽系统（KKS），发挥双系统保护作用，能有效抑制AngⅡ的产生，使出球小动脉扩张，灌注压降低，尿蛋白减少。本试验结果显示，贝那普利能减轻肾脏病理改变，降低血清BUN，Scr，Upro／24 h和肾组织AngⅡ含量水平，提示贝那普利能通过抑制AngⅡ的产生，对肾脏起保护作用，显著减慢顺铂肾损伤的进展。

参考文献：

［1］罗文姬.肾素－血管紧张素系统与维持性血液透析患者高血压发病机制的关系［J］. 广东医学，2011，32（13）：1727 －1729.

［2］W ilkinson Berka JL，Agrotis A，DeliyantiD.The retinal renin －angiotensin system：roles of angiotensin Ⅱand aldosterone［J］.Peptides，2012，36（1）：142－150.

［3］ Sechikaly MG，Arant BS，Seney FD.Endogenous angiotensin concentrations in specitic intrarenal fluid cornpartments of the rat［J］.J Clin Invest，1990，86（4）：1352 － 1357.

［4］关英杰，仲来福.葡甲胺对顺铂所致大鼠肾毒性的预防作用［J］.卫生毒理学杂志，2000，14（2）：95 －98.

［5］ Kintzel PE.Anticancer drug induced kindney disorders［J］.Drug Saf，2001，24（1）：19 －38.

［6］Ruiz－ Ortega M，Lorenzo O，RuperezM，et al.ACE inhibitors and AT1 receptor antagonists－ beyond the harmodynamic effect［J］.Nephrol Dial Transplant，2000，15（5）：561 － 565.

［7］何新霞，韩卫红，薛 燕，等.血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂对糖尿病肾病患者肾功能的保护作用［J］.中国慢性病预防与控制，2007，15 （1）：34 －36.