猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和轮状病毒混合感染的诊断实例

2014-04-24闫兆吉1刘婷婷2张惠3刘奇4

中国猪业 2014年12期

闫兆吉1 刘婷婷2 张惠3 刘奇4

（1吉林省吉林市永吉县畜牧业管理局岔路河畜牧兽医站，吉林吉林 132200；2吉林省吉林市永吉县畜牧业管理局疫控中心，吉林吉林 132200；3吉林省吉林市永吉县畜牧业管理局畜产品质量安全中心，吉林吉林 132200；4吉林省吉林市永吉县黄榆乡畜牧兽医站，吉林吉林 132200）

闫兆吉1 刘婷婷2 张惠3 刘奇4

目前，猪场病毒性腹泻混合感染的现象普遍存在，给我国养猪业造成了巨大损失。2014年2月吉林省某规模化猪场的猪群发生以仔猪发病初期呕吐、排灰色水样稀便、恶臭，大猪腹泻为主要特征的传染病，根据发病情况、临床症状、剖检变化并结合实验室诊断方法进行综合诊断，最终结果显示，导致该猪场大规模发病并死亡的主要病原包括猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，是典型的混合感染导致大规模发病的案例。

猪流行性腹泻；猪传染性胃肠炎；轮状病毒；混合感染

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED），是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的一种急性、高传染性的肠道疾病。该病以急性肠炎、呕吐、水样腹泻和脱水为主要特征[1]。

猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis of swine,TGE），又称幼猪的胃肠炎，是一种高度接触传染性，以呕吐、严重腹泻、脱水、2周龄以内仔猪高死亡率为特征的病毒性传染病[2]。

猪轮状病毒病是由轮状病毒（Rotavirus,RV）引起的一种急性肠道传染病，仔猪高发，大猪多呈隐性感染，多发于晚秋、冬季和早春季节[3]。

以上三种猪病毒性腹泻疾病都严重影响了我国养猪业的健康发展，目前猪场混合感染严重，主要表现为病毒与细菌之间、不同病毒之间的混合感染，一般发生病毒性腹泻疾病的猪场，其混合感染率都在50%以上。猪病毒性腹泻疾病的共同特点是水样腹泻和呕吐，PED和TGE可见于各种日龄的猪，而RV主要发生于哺乳仔猪，成年猪多呈隐性感染。病毒性腹泻的发病急，传播快，一周龄以内的仔猪出现症状后2～7天内死亡，死亡率可高达100%，育成猪经3～7天腹泻后，可逐渐康复，但可能形成僵猪[4-6]。2014年2月，吉林省某规模化猪场的猪群出现灰色水样腹泻，部分仔猪有呕吐现象发生，本研究根据临床症状并结合实验室检测对该疫情进行综合诊断。

1 临床症状及剖检病变

2014年2月，吉林省某规模化猪场1周龄以内的仔猪突然发病，病情扩散很快，发病猪只迅速扩增至200头，并呈现继续传染态势。其中1～5日龄内的仔猪感染率最高，症状最为严重，病死率也最高。病猪体温正常或稍微升高，精神沉郁，食欲降低，日龄较大的猪症状较轻，日龄较小的猪症状较重。仔猪发病初期发生呕吐，排灰色水样稀便，恶臭。

剖检病死猪，可见小肠肠管胀满，充满黄色内容物，肠壁变薄，肠系膜呈树枝状充血，肠系膜淋巴结水肿。

2 实验室诊断

2.1 材料及方法

病毒DNA/RNA抽提试剂盒、RT-PCR一步法试剂盒和ExTaq DNA聚合酶，均购自TAKARA公司；猪轮状病毒胶体金试剂盒，购自韩国安捷动物诊断试剂有限公司；所用各种引物均为本实验室设计合成。

2.2 病毒核酸检测

将发病猪的肠内容物处理后，利用TAKARA MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 5.0试剂盒进行病毒DNA和RNA的抽提，采用PCR和RT-PCR方法对PEDV、TGEV、PRV（猪伪狂犬病毒）、CSFV（猪瘟病毒）进行检测。

2.3 猪轮状病毒检测

取0.5 mL稀释液加入试管中，加适量粪便标本到试管中，使浓度达到5%～10%，充分混合均匀后，用滴管取2～3滴加入胶体金检测卡的样品孔，5～10分钟判读结果。

3 结果

3.1 病毒核酸检测结果

以提取的病毒DNA或RNA及PEDV、TGEV、PRV和CSFV特异性检测引物进行PCR或RT-PCR反应[7]，结果显示，1、3和4号样品PEDV检测结果为阳性，RT-PCR扩增出750 bp左右的阳性条带（图1a），TGEV的RT-PCR扩增出480 bp左右的阳性条带（图1b），均与预期片段大小相符；而PRV、CSFV的PCR检测均无阳性条带出现（图1c、1d），基于以上结果，初步确定猪群感染了PEDV和TGEV两种病毒。

图1 发病猪肠内容物的实验室检测结果

3.2 轮状病毒胶体金检测结果

检测结果显示，4号样品在T线显色，表明猪轮状病毒抗原阳性，提示猪场中已经有猪只感染猪轮状病毒（图2）。

图2 猪轮状病毒胶体金检测结果

4 讨论

分子生物学诊断技术的应用，为疫病的快速确诊提供了捷径，尤其是PCR方法的应用[8]，是现如今最简单、最便捷的分子生物学诊断方法。本次疫情就是在结合发病情况、临床症状、剖检病变的基础上，根据实验室PCR诊断结果，确诊本次疫情为猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎及猪轮状病毒病的混合感染。

近年来，由于多种原因，集约化猪场腹泻疫情屡见不鲜，主要以PEDV和TGEV的混合感染为主，少数混合猪轮状病毒病的感染。由于造成猪腹泻的病毒及细菌多样，且临床症状又有一定的相似性，这给临床病原学的确诊和防治增加了一定的难度，并影响着我国现代养猪业健康快速发展。2010年至今，猪病毒性腹泻在我国的流行与暴发日益增多，其综合防治的好坏直接影响到养猪业的发展，因此正确认识我国猪病毒性腹泻的流行现状与预防控制方法，建立行之有效的综合防控措施，对提高我国养猪业水平、增加经济效益意义重大[8]。

目前，对于猪病毒性腹泻的临床鉴别诊断较为困难，所以采取合理的监控措施及免疫程序，采取一定的综合防治措施，加强卫生和饲养管理，严格控制引种和“全进全出”，同时定期进行病原及抗体水平监测，提高猪群对疫病的抵抗力是目前控制病毒性腹泻的有效方法。

[1]孙东波,冯力,陈建飞,等.猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展[J].动物医学进展,2006,27(10):11-14.

[2]王海艳.猪传染性胃肠炎的防治[J].养殖技术顾问,2013(9): 83.

[3]李邵青.猪轮状病毒的鉴别诊断技术[J].畜牧与饲料科学, 2009(2):189-190.

[4]殷震,刘景华.动物病毒学[M].第二版.北京:科学出版社, 1997:688-690.

[5]赵德明,张仲秋,沈建忠,译.猪病学[M].第九版.北京:中国农业大学出版社,2009:769-782.

[6]张坤,何启盖.猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪A群轮状病毒多PCR检测方法的建立及临床应用[J].畜牧兽医学报,2010(8): 1001-1005.

[7]刘岩,董丽娜,胡桂学,等.猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻疫苗研究进展[J].中国兽药杂志,2007,41(2):40-45.

[8]陈建飞,刘孝珍,时洪艳,等.2010-2011仔猪腹泻的病因分析和防控措施[J].养猪,2011(5):81-83.

S858.28

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