HPLC法测定止咳祛痰灵中次野鸢尾黄素含量研究

金涛

（泰州市人民医院，江苏泰州 225300）

HPLC法测定止咳祛痰灵中次野鸢尾黄素含量研究

金涛

（泰州市人民医院，江苏泰州 225300）

目的：建立止咳祛痰灵中次野鸢尾黄素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为XBridge C18柱（4.6mm×150mm，5μm），流动相为乙腈-水（30∶70），检测波长为266nm。结果：次野鸢尾黄素在0.0402～1.005μg范围内呈良好的线性关系，回归方程：Y=5.21×106X-11738.43，r=0.9999（n=6）；加样回收率为92.87%。结论：此方法简便、准确，可用于测定止咳祛痰灵中次野鸢尾黄素的含量。

止咳祛痰灵 次野鸢尾黄素 高效液相色谱

止咳祛痰灵为泰州市中医院院内制剂，主要由射干、桔梗等四味中药组成，具有止咳祛痰的功效，用于治疗咳嗽、急慢性支气管炎。该品种收载于《泰州医院制剂规范》，原质量标准项下仅有鉴别项，未收载含量测定项，不利于药品质量的控制。方中射干为君药，次野鸢尾黄素为射干中的主要活性成分之一[1]。本实验拟对止咳祛痰灵中次野鸢尾黄素的含量测定进行研究，现将结果报道如下。

1 材料

Waters2695/2996/Empower高效液相色谱系统。次野鸢尾黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111557-200602）；止咳祛痰灵样品（泰州市中医院，批号：140121、140520、140528）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：XBridge C18柱（4.6mm×150mm， 5μm）；流动相：乙腈-水（30∶70）；检测波长：266nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量为10μL。

2.2 对照品溶液的制备精密称取次野鸢尾黄素对照品适量，加甲醇制成0.0402mg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备精密量取本品10mL，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，回收至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备按处方称取除射干外的药味，按其制备工艺制成空白制剂，再按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液。

2.5 专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照样品溶液，在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪。结果供试品溶液中次野鸢尾黄素峰与其他组分峰分离良好，阴性对照溶液在与次野鸢尾黄素对照品相同保留时间处无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，见图1。

图1 各组溶液高效液相色谱图（1-次野鸢尾黄素）

2.6 线性关系考察精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15、25μL分别注入液相色谱仪，以进样量为X，峰面积为Y，绘制标准曲线，回归方程：Y=5.21× 106X－11738.43，r=0.9999（n=6）。结果表明，次野鸢尾黄素在0.0402～1.005μg范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，测得次野鸢尾黄素峰面积，结果RSD为0.28%。

2.8 重复性试验取同一批号的样品（批号为140528）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件测定次野鸢尾黄素的含量。结果次野鸢尾黄素平均含量为0.027mg/mL，RSD为0.94%。

2.9 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别在制备后0、2、4、8、16、24h测定次野鸢尾黄素峰面积，结果RSD为0.52%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.10 加样回收率试验精密吸取已知含量为0.027mg/mL的样品5mL，分别精密加入对照品溶液（0.0243mg/mL）5mL，按供试品溶液制备方法制样6份，在上述色谱条件下测定，计算，结果见表1。

2.11 样品含量测定精密吸取不同批号的样品，按供试品溶液制备方法制备，在上述色谱条件下，进行含量测定，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

3.1 流动相的选择比较了甲醇-0.2%磷酸（53∶47）、乙腈-0.2%磷酸（39∶61）、乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱、乙腈-水（30∶70）作为流动相的色谱效果[2-5]。结果表明，以乙腈-水（30∶70）为流动相，次野鸢尾黄素色谱峰分离度好，保留时间适当且避免了使用酸作为流动相。

3.2 提取方法的选择考察了加甲醇超声提取法及乙酸乙酯提取蒸干加甲醇溶解法，2种方法结果相近，但甲醇超声提取法主峰前后杂质峰多，故采用乙酸乙酯提取蒸干加甲醇溶解作为提取方法。

[1]邱鹰昆，高玉白，徐碧霞，等.射干的化学成分研究.中国药学杂志，2006，41（15）：1133

[2]国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2010：267

[3]辛蕊华，谢家声，郑继方，等.射干地龙颗粒质量标准.中国实验方剂学杂志，2013，19（13），57

[4]赵玥，李国信.HPLC法测定不同采收期鸢尾科3种植物中有效活性成分含量.辽宁中医药大学学报，2012，14（11）：39

[5]焦正花，王红丽，张小华，等.射干口服液质量标准研究.中国中医药信息杂志，2011，18（12）：62

编辑：吴宁

R284.1

：A

：1672-397X（2014）12-0073-02

金涛（1966-），女，本科学历，主任中药师，中药学专业，从事中药制剂研究。jt0996@sina.com

2014-09-16