“肝糖原的提取与鉴定”实验方法的改进探索

镇卫国 ZHEN Wei-guo；官守涛 GUAN Shou-tao

（湖北医药学院生物化学与免疫学实验室，十堰 442000）

（Biochemistry and Immunology Laboratory of Hubei University of Medicine，Shiyan 442000，China）

“肝糖原的提取与鉴定”实验方法的改进探索

镇卫国 ZHEN Wei-guo；官守涛 GUAN Shou-tao

（湖北医药学院生物化学与免疫学实验室，十堰 442000）

（Biochemistry and Immunology Laboratory of Hubei University of Medicine，Shiyan 442000，China）

“肝糖原的提取与鉴定”实验，由于按教材操作方法经常出现实验结果不理想，为此，笔者对唐微主编的《生物化学与免疫学实验教程》中“肝糖原的提取与鉴定”实验的操作方法作了探索性的改进，即在酸碱中和步骤里排除糖原水解过程中挥发的部分盐酸，舍弃滴管而选用吸量管吸取氢氧化钠溶液。教学实践证明，改进后的操作方法切实可行，效果明显。

浓盐酸的挥发性；中和反应；操作方法；改进

0 引言

对于西医临床专业学生来说，“生物化学”是一门必修的，主干专业基础课，为了配合《生物化学》理论教学和培养学生创新动手能力，进而开设“生物化学实验”，这是一门专业基础性实验课。本校选用唐微主编的《生物化学与免疫学实验教程》作为西医临床专业“生物化学实验”教材，其中实验二十三“肝糖原的提取与鉴定”属于创新性实验。在教学过程中笔者发现：进行该实验时，没有明确操作方法的实验条件，导致实验结果不理想，在试验过程中，学生对实验结果充满疑惑，甚至在试验过程中，因反复滴定酸碱中和，进而导致耗时过长，最终没有按时完成实验。针对这些问题，对该实验中的操作方法，笔者进行了一些探索的改进，同时取得了良好的教学效果。

1 材料与方法

1.1 材料 猪肝，离心机，组织匀浆机，刻度吸量管，5%三氯醋酸溶液，95%乙醇，0.9%NaCl溶液，碘试剂（碘l00mg和 K1200mg溶于 50mL蒸馏水中），37.5%浓 HCl，50%NaOH，精密pH试纸，班氏试剂称取柠檬酸钠（C5H5Na3O7·5H2O，294.10）173g和无水碳酸钠（Na2C03，105.99）100g溶于蒸馏水800mL中，加热促溶。冷却，慢慢倾人17.3%硫酸铜（CuSO4·5H2O，249.68）l00mL，边加边摇。再加蒸馏水至1000mL，混匀，如混浊可过滤取滤液。

1.2 实验方法 在以往本实验教学中，指导学生操作糖原水解后的酸碱中和反应方法是：用滴管吸取50%NaOH滴定含有浓盐酸的糖原水解液[1]。但在实际操作过程中，由于糖原水解过程需要加热且浓盐酸本身具有挥发性的原因会挥发一部分盐酸，加上滴管滴定时有残留或口径大小差异等原因，使得滴入的NaOH含量与设定值不符，两者都会造成中和后的溶液偏酸或偏碱，从而影响后面的呈色反应效果。鉴于此，笔者将方法改进如下：在糖原水解冷却结束时刻用精密pH试纸测出此时溶液的pH值，算出滴定此时溶液中盐酸所需50%NaOH体积数值，用刻度吸量管吸取所需NaOH量进行中和滴定。

实验步骤如下：猪肝约1g剪碎置入组织匀浆机→加5%三氯醋酸4mL→制成肝匀浆→全部转入离心管中，离心3分钟（4000r/min）→弃去沉淀，上清→加5mL95%乙醇，混匀静置10分钟→离心5分钟（4000r/min）→弃去上清，沉淀→蒸镏水2mL→沸水浴2分钟使沉淀溶解，可见乳样光泽即糖原溶液。

2 结果与分析

2.1 糖原水解液与班氏试剂反应有红色沉淀[2]：

2.2 糖原溶液加碘后呈红棕色[3][4]糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，20～30个之间使碘呈现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常8～12个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。

2.3 氢氧化铜溶于过量的浓氢氧化钠溶液中呈蓝色溶液：Cu（OH）2+2NaOH（浓）=Na2[Cu(OH)4]（蓝色）

当溶液CuSO4:NaOH为1:1混合时有蓝白色糊状沉淀：

所以糖原水解后的中和反应必须完全彻底，酸碱都没有残留才不会影响后面班氏试剂加入后的呈色反应，这就要求滴定盐酸的浓氢氧化钠溶液的量必须准确并且恰当。

3 讨论

在糖原水解结束后的中和反应中，改进后的操作方法有效避免了原来实验者操作滴管的个体差异以及滴管本身结构的细微差别，找准了中和滴定反应的精确数据，有效地保证了实验现象的明显性。

教学实践证明，通过对实验操作方法进行改进，明确了实验条件，进行试验时，学生的操作比较简单，根据实验结果明显，试验的重复性比较好，同时取得了良好的教学效果。

实验操作作为连接理论与实践的桥梁。在实验教学过程中，对于学生的大胆假设要积极的鼓励，通过对实验内容和实验结果进行认真的观察、分析和思考，进而在一定程度上引导学生对实验成功、失败的原因进行分析，一方面巩固和强化学生的理论知识，另一方面开发学生的思维。根据现行大学本科临床专业人才培养计划的要求，需要在验证性实验的基础上，还要开展和加强综合性、设计性的实验，进而在一定程度上培养学生的动手能力、思维能力，以及综合分析[5]。因此，在实验教学过程中，需要全面贯彻落实以生为本，因材施教的原则，根据学生的实验情况，秉持尊重科学、实事求是的态度，对实验进行大胆的探索性和改进，进而不断提高实验课的教学效果，进一步促进学生的创新思维能力发展。

[1]唐微，邓维秀.生物化学与免疫学实验教程[M].北京：人民卫生出版社，2012:121-122.

[2]毕文团.氧化亚铜制备方法的研究进展[J].广州化工，2009，37(8)：56-58.

[3]张秀清.淀粉与碘反应的显色原理和条件[J].实验与仪器，2006(12)：27-28.

[4]查锡良，周春燕.生物化学[M].北京：人民卫生出版社，2009：105-107.

[5]张立.改革生物化学实验教学提高学生综合素质[J].西北医学教育，2011,19(1):106.

Improvement of"Extraction and Identification of Glycogen"Experimental Method

"Extraction and identification of glycogen"experiment result often is not satisfactory because of according to teaching materials operation methods,therefore,the author makes exploratory improvement for the operation methods of"Extraction and identification of glycogen"experiment in Journal of Biochemistry and Immunology Tutorial written by TANG Wei,which excluding volatile part hydrochloric acid of glycogen hydrolysis process in acid neutralization step,discarding dropper and selecting pipettes to draw sodium hydroxide solution.Teaching Practice has proved that the improved operation method is practical and has obvious effects.

volatility of concentrated hydrochloric acid；neutralization reaction；operation methods；improvement

镇卫国（1979-），男，湖北松滋人，本科，助理实验师，主要从事生化与免疫学实验教学与研究。

TQ016.1

A

1006-4311（2014）10-0307-02