组织学石蜡切片制作方法的改进*

王凤琴 张 慧

(济宁医学院基础学院，山东 济宁 272067)

近年来我们在制作石蜡切片的过程中，不断总结经验教训，分别在组织固定、脱水、透明、浸蜡等关键环节上采取了大量改进措施，制作了一些优质的石蜡教学切片，从而提高了切片质量。现将改进方法介绍如下。

1 材料与方法

1．1 材料

固定液、药棉、纱布、组织块、10%乙醇、氯仿、温度计、蜡箱。

1．2 方法

1.2.1固定方法的改进 在盛有固定液的瓶底上垫上药棉或几层纱布。容易切成小块的新鲜组取材后马上投入固定液，不易切成小块的柔软组织采用重新固定法处理，将取下较大的组织或器官先投入固定液，2～3h后组织基本硬化，再修成小块投入新配的固定液中。

1.2.2脱水过程的改进 在梯度乙醇脱水时，把常规30%乙醇改为更低浓度10%乙醇开始逐步升级，使组织块中的水分逐渐被乙醇替代；在放入梯度乙醇时，要将组织块放到滤纸上来回的反转一下，以尽量少带水到高浓度乙醇，放入无水乙醇之前，用吹风机的弱风将组织块吹干；组织在无水乙醇的脱水时间不要超过2h；将少许硫酸铜放入无水乙醇内若变蓝色，表明无水乙醇内已有水分，需及时更换新液，确保组织彻底脱水。

1.2.3透明步骤的改进 组织学切片制作常用的透明剂是氯仿。常规方法将在梯度乙醇脱水后的组织直接转入氯仿，把脱水后组织转入氯仿3份、无水乙醇1份的混合液中1h后，再转入氯仿Ⅰ、Ⅱ液中透明；组织放入氯仿时要用纱布包裹浸入透明剂，并将载玻片压在其上面，使组织完全浸入透明剂内。

1.2.4浸蜡过程的改进 浸蜡在软蜡箱与硬蜡箱中进行，常规方法在蜡箱上部放1个温度计，我们分别在2个蜡箱的中部及底部各放1个温度计，显示其确切温度。先把组织块放在两个软石蜡和氯仿等量混合液浸1～2h后，再移入1个硬石蜡内浸1h，在软蜡箱内可延长0.5～1h，而浸硬蜡的时间不要超过1h。

2 结果

经以上改进方法制作的蜡块较易切成连续切片且蜡带不散裂，镜下的组织结构清晰、染色均匀、不收缩，与应用常规方法制作的石蜡切片相比质量明显提高，更易于教师教学和学生观察。

3 讨论

在医学院校，石蜡切片的质量直接影响着教师教学和学生学习的效果。我们在制作石蜡切片的过程中，主要从以下环节加强了质量控制。

3.1 固定

如果组织未得到及时固定或固定不够充分，超过6h组织就要自溶与腐败，制作的组织切片因自溶染色时较易脱片，镜下观察组织结构不清楚，呈现“发白”或“灰染”[1]。我们在固定液的瓶底上放上药棉或几层纱布，使组织不直接与瓶底接触，此法能使固定液迅速而又均匀地从上、下、左、右、前、后各方渗入组织内，使组织固定的更均匀、快速、充分。新鲜柔软器官我们先固定，待基本硬化后再修剪成小块，然后再投入新配的固定液内，这样既能获得理想大小的标本，又能使组织在常规固定时间内完全固定。

3.2 脱水

脱水就是把固定好的组织块用乙醇脱尽其中的水分[2]。乙醇脱水能力较强，常使组织过度收缩和变脆，为了克服这一缺点，除根据组织种类、组织块大小和固定剂的不同严格控制脱水时间外，我们采取从低浓度10%乙醇开始逐步升级，组织块中的水分逐渐被脱出，避免因脱水过度引起组织收缩、硬脆[3]、切片时蜡带散裂、难以切出完整的切片。在脱水时用滤纸吸去组织块多余的水分，并用吹风机将其吹干，确保各级乙醇的浓度尤其是无水乙醇。根据硫酸铜遇水变蓝的原理，检测无水乙醇内是否有水并及时更换，确保组织脱水彻底，否则，放入透明剂时常出现白色混浊现象，包埋后的蜡块易出现凹陷和裂缝，组织较易与蜡块分离[4]。

3.3 透明

完全脱水的组织放入氯仿透明时，组织漂浮在氯仿的上面，我们用纱布包裹组织并在其上面压上载玻片，使组织完全浸入氯仿内，这样透明剂氯仿能均匀的渗入组织内。我们将氯仿和酒精按3∶1的比例组成混合透明剂，既能使组织进一步脱水而不引起收缩，又能使组织透明。

3.4 浸蜡

由于蜡箱上部与底部温差是8℃左右，在蜡箱上部放1个温度计，只能显示蜡箱上部的确切温度。为避免温差对组织浸蜡带来不利，我们通常在蜡箱的中部与底部各放1个温度计显示各部的真实温度，把组织放在蜡箱相适宜的部位内浸蜡。较大的组织在软蜡和硬蜡内的时间要把握好，组织在浸软蜡时可以适当延长时间，在硬蜡内时间不可过长，因为硬蜡内的温度较高；浸蜡总体时间不可太长，否则会引起组织过度收缩，变硬、变脆、切片易碎裂、降低切片质量甚至失败[5]；浸蜡时间也不可过短，否则蜡不能完全浸入组织中，切不出完整的切片。我们的经验是此过程应根据组织块大小、种类和结构的不同严格控制浸蜡温度及浸蜡时间。

综上所述，要提高每一张石蜡切片的质量，必须处理好每一个实验细节并能及时有效地解决实验出现的问题。希望我们改进后的组织学石蜡切片制作方法能够对从事科研、教学和临床诊断等工作有所帮助。

[1] 侯春春，徐水.浅析影响石蜡切片质量的关键因素[J].中国农学通报，2009，25(23)：94-98.

[2] 邹仲之，李继承.组织学与胚胎学[M].8版.北京：人民卫生出版社，2013:3-4.

[3] 江虹.制作石蜡切片的常见问题及处理[J].健康研究，2010，30(5)：380-382.

[4] 武智明.病理组织制片及染色的几点体会[J].内蒙古医学杂志，2011,43(15)：11.

[5] 扬捷频.常规石蜡切片方法的改良[J].生物学杂志，2006，23(1)：45-46.