艾司西酞普兰灌胃对抑郁症大鼠海马组织中5-HT及5-HT1A受体表达的影响

刘 英，徐爱军，张玉蕊

(1唐山市工人医院，河北唐山063000;2河北联合大学基础医学院)

抑郁症是一种反复发作的慢性情感性精神疾病，严重时甚至伴随自杀倾向，发病机制尚未明确，已成为目前研究热点［1，2］。抑郁症临床治疗药物较多，但常伴有较多不良反应。艾司西酞普兰是西酞普兰的S-异构体代谢产物，治疗抑郁症起效快，不良反应少［3］。2014年3月，我们观察了艾司西酞普兰灌胃对抑郁症大鼠海马组织中5-羟色胺(5-HT)及5-HT1A受体表达的影响。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物、药品与试剂 SPF级健康成年雄性SD大鼠(河北联合大学实验动物中心提供，合格证号:SCXK京2009-0004)60只，体质量180～220 g。艾司西酞普兰(商品名为来士普，西安杨森制药有限公司生产，批号J20050124)。兔多克隆5-HT1A抗体(Santz Cruz公司)，Western blotting相关试剂(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.2 实验动物分组、造模及艾司西酞普兰灌胃方法 将大鼠适应性饲养1周，随机分为对照组、模型组和治疗组各20只。采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)方法建立抑郁症模型，模型组和治疗组均给予11种应激，鼠笼45℃倾斜24 h，行为限制24 h，潮湿垫料 24 h，42℃热水游泳 5 min，4℃冰水游泳5 min，禁食24 h，禁水24 h，夹尾1 min，持续光照36 h，鼠笼摇动15 min，天敌声音30 min。随机将上述11种应激分配到21 d内，每日给予1种应激，每种应激平均出现2次，但同种应激不能连续出现。对照组除每天抓取1次外，不作其他处理。造模同时，给予治疗组大鼠艾司西酞普兰，20 mg/kg，每日按2 mL/kg灌胃1次。

1.3 抑郁症大鼠的行为观察 ①糖水偏好实验。三组大鼠均给予糖水和自来水双瓶供饮，测量禁水2.5 h后三组大鼠1 h内的糖水和自来水的消耗量，计算糖水偏好百分比(糖水消耗量/总液体消耗×100%)。②Morris水迷宫实验。连续测试3 d，每天5个循环，记录三组大鼠在60 s内寻找水面下平台的时间，即逃避潜伏期(EL)。取3 d的测试成绩计为动物的空间记忆成绩。

1.4 抑郁症大鼠海马组织中5-HT检测 采用高效液相色谱法。每组取10只大鼠，1%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉，断头取脑，冰上快速分离海马组织。加入高氯酸提取液冰浴匀浆后离心，留取上清 20 μL进行分析。流动相:缓冲液(50 mmol/L KH2PO4)/甲醇 (95∶5)，缓冲液:3 mmol/L庚烷磺酸钠、10 mmol/L醋酸钠、85 mmol/L 柠檬酸、0.2 mmol/L EDTA，pH 3.7、柱温40 ℃、波长扫描范围210～370 nm、检测波长275 nm、流速1.0 mL/min。以标准品峰保留时间与样品峰保留时间对照定性，标准品峰面积与内标峰面积比值进行定量分析。

1.5 抑郁症大鼠海马组织中5-HT1A受体检测采用Western blotting法。三组各取10只大鼠，麻醉后断头取脑，冰上快速分离海马组织，加入RIPA裂解液，提取组织总蛋白，定量后按照30 μg蛋白量上样，进行10%SDS-PAGE电泳，PVDF膜电转印，脱脂奶粉封闭，5-HT1A一抗(1∶500)4℃孵育过夜，二抗IgG(1∶3 000)室温孵育1 h，ECL显色。同上进行内参照β-actin的Western blotting分析。以目的条带与内参照的光密度比值表示蛋白表达。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计量数据以±s表示，两两比较采用t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

对照组、模型组、治疗组的糖水偏好百分比分别为 92.48% ±8.18%、57.62% ±4.90%、79.87% ±2.96%，逃避潜伏期分别为(8.63 ± 1.05)、(25.25±2.41)、(19.38 ±2.13)s，海马组织中 5-HT 分别为(1.92 ± 0.22)、(0.34 ± 0.07)、(0.88 ± 0.11)ng/g，海马组织中5-HT1A受体相对表达量分别为0.74 ±0.07、0.16 ±0.01 和 0.37 ±0.04，上述指标三组间两两比较，P均＜0.05。

3 讨论

抑郁症临床主要表现为情绪低落、兴趣减低、悲观、思维迟缓、运动迟滞等，慢性不可预见性温和应激(CUMS)是较理想的建立抑郁动物模型的方法，能使大鼠表现出典型的抑郁症临床症状，主要包括兴趣丧失、反应迟钝、情绪低落、记忆力减退等［4］。本实验利用CUMS应激研究艾司西酞普兰抗抑郁作用机理。实验结果表明，与模型组比较，治疗组大鼠糖水偏好百分比明显升高，平均逃避潜伏期明显降低，提示艾司西酞普兰能有效改善抑郁症大鼠的情绪障碍，具有抗抑郁作用。

海马是重要边缘系统结构，主要参与调节情感、认知、学习及空间记忆能力等行为。抑郁大鼠海马区的代谢指标出现异常并呈一定规律性动态变化［5］。在精神疾病发病机制和治疗中，海马组织中5-HT受体的功能变化具有重要作用［6］。在5-HT受体系统中，5-HT1A亚型和情感障碍关系最为密切。5-HT1A受体参与了抑郁症发病的病理生理过程［7］。神经递质5-HT可以兴奋性调节促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的释放［8］。下丘脑—垂体—肾上腺(HPA)轴失调可以导致抑郁的发生。当机体受到应激时，HPA轴可以调控释放CRH，导致5-HT及去甲肾上腺素合成不足，出现与抑郁症相关的症状［9］;而抗皮质醇药物能缓解抑郁症症状［10，11］。5-HT及其受体在HPA轴反馈调节中起重要作用［12］，其中5-HT1A受体在情绪和精神调节中具有重要作用［13］。本实验结果显示，艾司西酞普兰能明显升高应激所致的5-HT水平，促进5-HT1A受体表达。

综上所述，艾司西酞普兰灌胃能提高抑郁症大鼠海马组织中5-HT及5-HT1A受体表达水平。

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