Livin与caspase-3在子宫内膜癌组织中的表达水平及相关性研究

孙 炯，杨留才,李仕红,徐红涛

(1.亭湖区人民医院妇产科,江苏 盐城224000； 2.盐城卫生职业技术学院,江苏 盐城 224006)

子宫内膜癌是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤之一。研究表明，与增殖、凋亡相关的细胞因子表达异常可导致细胞周期发生紊乱，细胞无限制生长，最终导致恶性肿瘤的发生[1]。生存蛋白(Livin)是凋亡抑制蛋白家族成员，研究表明其在乳腺癌[2]、食管癌等实体肿瘤和肿瘤细胞系中表达水平显著增高[3]。而胱天蛋白酶(caspase)-3是caspase家族的成员之一，其主要的功能为被凋亡通路激活，导致细胞凋亡[4]。本研究通过免疫组织化学染色法检测Livin与caspase-3在子宫内膜癌组织中的表达情况及其相关性，并探讨两者在子宫内膜癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2009年6月至2011年6月于亭湖区人民医院妇产科就诊且进行活检或手术治疗的患者268例，年龄36～69(46.3±10.1)其中子宫内膜癌196例作为试验组，取子宫内膜癌患者肌瘤旁正常组织72例作为对照组。试验组患者年龄<45岁者90例、≥45岁者106例；国际妇产科联盟临床分期：Ⅰ期67例、Ⅱ期55例、Ⅲ期42例、Ⅳ期32例；病理诊断：高分化72例、中分化76例、低分化48例；有淋巴结转移82例、无淋巴结转移114例。所有患者在进行手术前未经过放疗和化疗等治疗措施。

1.2方法 石蜡切片脱蜡水化，加羊抗人Livin一抗(1∶100,美国Santa Cruz 公司)，羊抗人caspase-3一抗(1∶200,美国Santa Cruz 公司)兔抗羊IgG二抗(1∶100，美国Sigma公司)室温孵育40 min；磷酸盐缓冲液清洗，加Elite-AP(美国Vector公司，)孵育30 min，磷酸盐缓冲液清洗，二氨基联苯胺底物液(中国迈新公司)显色5 min，苏木精复染10 s，脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察摄片。

1.3染色结果判断 染色结果显示Livin和caspase-3均定位于胞质中，以胞质内出现棕黄色颗粒为阳性细胞标志。在高倍镜下随机选取10个视野，根据阳性细胞在全部组织细胞中所占比例判定实验结果，阳性细胞数占全部组织细胞数比例<10%判断为(-)，阳性细胞数占全部组织细胞数比例为10%～50%判断为(+)，阳性细胞数占全部组织细胞数>50%判断为(++)，以(+)及(++)作为显色阳性[5]。

1.4统计学方法 应用SPSS 18.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验，等级资料采用秩和检验，相关性分析采用Spearman检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组Livin和caspase-3表达情况的比较 试验组 Livin表达的阳性率显著高于对照组(77.04% vs 11.11%)；试验组caspase-3表达的阳性率显著低于对照组(28.06% vs 73.61%),差异均有统计学意义(P<0.05)(表1)。

对照组：子宫内膜癌患者肌瘤旁正常组织；试验组：子宫内膜癌

2.2子宫内膜癌组织中Livin和caspase-3表达与临床、病理指标的关系 临床分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的Livin阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期，而caspase-3阳性表达率低于Ⅰ～Ⅱ期，差异均有统计学意义(P<0.05)；高分化患者Livin阳性表达率低于中、低分化患者，而caspase-3阳性表达率高于中、低分化患者，差异均有统计学意义(P<0.05)；有淋巴结转移的患者Livin阳性表达率高于无淋巴结转移患者，而caspase-3阳性表达率低于无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义(P<0.05)(表2)。

2.3子宫内膜癌组织中Livin和caspase-3表达的相关性 在子宫内膜癌组织中，Livin检出阳性率高于caspase-3(χ2=57.600，P=0.000)。Spearman等级检验结果显示：Livin和caspase-3表达在子宫内膜癌组织中呈负相关(rs=-0.56,P<0.05)(表3)。

表2 子宫内膜癌组织中Livin和caspase-3表达与临床、病理指标的关系

对照组：子宫内膜癌患者肌瘤旁正常组织 试验组：子宫内膜癌；a与高分化比较，P<0.05

表3 子宫内膜癌组织中Livin和caspase-3表达的相关性 (例)

3 讨 论

现有的研究表明，恶性肿瘤的发生和发展与细胞增殖、凋亡的平衡紊乱存在密切关系。细胞凋亡是由基因控制的自杀程序引起的主动性死亡[6]，其中Survivin[7]、p53[8]、Bcl-2[9]和caspases[10]等细胞因子在肿瘤的发生过程中起到了重要作用。

本研究结果显示,Livin在正常组织中阳性表达率低于子宫内膜癌阳性表达率,Livin的蛋白表达水平越高，子宫内膜癌的临床分期越晚，病理分级越低，淋巴结转移的可能性越大，表明Livin在肿瘤组织中的表达水平越高，患者的预后相对越差。Gazzaniga等[11]的研究结果表明，膀胱癌患者中Livin表达阳性的复发时间显著短于Livin阴性表达，说明Livin的表达水平与预后存在密切关系。周莉等[12]的研究结果也发现，Livin不仅在子宫内膜癌中高表达，并且可能与子宫内膜癌的预后相关，这与本研究的结果基本一致。

本研究还发现，caspase-3在子宫内膜癌组织中的阳性率较正常组织低，并且caspase-3在子宫内膜癌组织中表达水平越低，分化越差，临床分期越晚，患者的预后越差。本研究结果与在乳腺癌[13]、卵巢癌[14]等实体肿瘤中的研究结果基本一致。caspase是一组存在于胞质中的半胱氨酸蛋白酶，目前的研究认为caspase-3是整个凋亡过程中最重要的执行者之一，能够水解大量底物蛋白[15]。同时caspase-3也是线粒体和死亡受体两条凋亡信号途径的共同通道，凋亡通路一旦激活则引起caspase-3级联反应并使其活化引起细胞凋亡，体外实验表明，经过地塞米松处理的子宫内膜癌发生凋亡，并且与细胞内caspase-3水平上调有关[16]。而范引侠等[1]的研究结果也发现,子宫内膜癌组织中的caspase-3水平显著下调。上述研究结果与本研究结果基本一致，说明在子宫内膜癌中caspase-3的表达水平显著下调，导致细胞增殖和凋亡间的平衡被打破，细胞凋亡减少，增殖增加。

本研究结果还显示，Livin与caspase-3在子宫内膜癌中的表达呈负相关，说明Livin可能通过影响caspase-3的表达水平来调控细胞的凋亡。目前研究认为其作用机制主要表现为以下两个方面：①Livin能直接下调caspase-3的表达水平，减少凋亡的发生；②Livin通过与caspase-9结合，并且降低caspase-3的表达水平抑制线粒体信号通路发生抑制凋亡[17]。

综上所述，Livin在子宫内膜癌的组织中高表达，caspase-3在子宫内膜癌的组织中低表达，且两者的表达水平均与临床分期、病理分级以及淋巴结转移相关；Livin和caspase-3表达在子宫内膜癌组织中呈负相关，提示Livin可能通过与caspase-3共同作用促进子宫内膜癌的发生、发展。

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