肾福康胶囊对慢性肾功能衰竭模型大鼠的抗氧化作用研究

蒋 霞 陆 华▲ 程 娜 张洪启

1.广西医科大学第一附属医院药学部，广西南宁530021；2.桂林医学院药学院，广西桂林541001

肾福康胶囊对慢性肾功能衰竭模型大鼠的抗氧化作用研究

蒋 霞1陆 华1▲程 娜2张洪启2

1.广西医科大学第一附属医院药学部，广西南宁530021；2.桂林医学院药学院，广西桂林541001

目的探讨肾福康胶囊对慢性肾功能衰竭（CRF）模型大鼠的抗氧化作用。方法取健康雄性SD大鼠70只，造模前取尾静脉血，分离血清，进行尿素氮（BUN）含量测定，按BUN水平均衡，随机分为空白组、模型组、阳性对照组及肾福康低、中、高剂量组，每组10只大鼠。模型组、阳性对照组及肾福康低、中、高剂量组采用灌服腺嘌呤致大鼠CRF模型，同时肾福康组连续给大鼠灌胃肾福康胶囊40 d，分别按低、中、高剂量[0.225、0.45、0.9 g生药/（kg·d）]进行给药；阳性对照组给予灌胃尿毒清颗粒[6.7g/（kg·d））]共40 d。造模后12、24 d测定各组大鼠血清BUN、血清肌酐（SCr）含量；造模后第40天测定各组大鼠心、肾脏组织匀浆中超氧化物岐化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量。结果模型组大鼠血清BUN、SCr及心、肾组织匀浆中MDA含量明显高于空白组，SOD含量较空白组显著性降低（均P<0.01）。阳性对照组、肾福康中、高剂量组与模型组比较，能显著降低大鼠血清BUN、SCr及心、肾组织中MDA含量（P<0.05），明显增加心、肾组织匀浆液中SOD含量（P<0.05）。各剂量组间比较，肾福康中、高剂量组在降低大鼠血清BUN、SCr含量，升高肾组织匀浆中SOD含量方面与肾福康低剂量组比较有显著性优势（P<0.05）。结论肾福康胶囊具有抗氧化作用，能有效保护CRF大鼠心、肾等重要器官。

肾福康胶囊；慢性肾衰竭；抗氧化

肾福康胶囊为广西医科大学第一附属医院在多年治疗肾脏疾病的临床经验基础上研制而成的复方中药制剂[桂卫药制字（1999）001250]，由黄芪、大黄等药组成，对慢性肾功能不全、氮质血症期、尿毒症有一定的疗效。本课题组拟研究肾福康胶囊对慢性肾功能衰竭大鼠心、肾组织匀浆中超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA））含量的影响，探讨肾福康抗氧化作用，为该药的深入研究与临床应用提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

DU600型贝克曼紫外分光光度计（德国），RA-50半自动化分析仪（日本），FJ-200高速分散匀质机（上海），HH-0600电热恒温水浴箱（上海）。

1.2 试剂

肾福康胶囊（广西医科大学第一附属医院制剂室，批号：20090416），尿毒清颗粒（康臣药业有限公司，批号：20081209），维生素B4（江苏晨牌药业有限公司，批号：081015），血尿素氮（BUN）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20090530），超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20090720），丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：2009 0426），肌酐（Cr）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20090612）。

1.3 动物

（250±20）g雄性SD大鼠70只由广西医科大学动物中心提供，动物饲养合格证号：SCXK桂2003-0003。

2 方法

2.1 分组与造模[1]

健康雄性SD大鼠70只，造模前取尾静脉血，分离血清，进行BUN含量测定，按BUN水平均衡，随机分为空白组、模型组、阳性对照组及肾福康低、中、高剂量组，每组10只大鼠。模型组、阳性对照组（尿毒清组）及肾福康低、中、高剂量组给予灌服200 mg/（kg·d）腺嘌呤24 d，从第1～12天，每天1次，第12天后隔日1次，复制人类慢性肾功能衰竭模型。空白组不做任何处理。

2.2 给药方法

制备肾福康胶囊水溶液，按肾福康低、中、高剂量组（0.225、0.45、0.9 g生药/kg，按公斤体重计算相当于临床人用量2.7 g生药/d的5、10、20倍）进行灌胃给药；尿毒清组灌胃给予尿毒清颗粒6.7 g/kg。模型组、空白组给予等容量的蒸馏水1 mL/100 g。造模同时按剂量灌胃给药，共计给药40 d。

2.3 检测指标与方法

分别于造模第12、24天从大鼠尾部静脉取血3 mL，经高速低温离心（3000 r/min，15 min）分离血清，用全自动生化分析仪检测血清中BUN、SCr的含量。灌服给药40 d，于末次给药后，断头处死大鼠，立即取出心脏、肾制备组织匀浆，制成1%和10%的浓度，取上清液，分别测定SOD、MDA含量，具体步骤按照各试剂盒说明书进行操作。

2.4 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 动物死亡情况

造模第12天，除空白组无动物死亡外，其余各组均有死亡，模型组、尿毒清组、肾福康低、中、高剂量组动物死亡数分别为4、2、3、1、2只；至实验结束，模型组、尿毒清组、肾福康低、中、高剂量组动物死亡数分别为5、2、3、1、2只，模型组死亡动物数最多。

3.2 肾福康胶囊对大鼠血清中BUN、SCr含量的影响

造模12、24 d后，模型组与空白组比较，大鼠血清BUN、SCr含量均有显著性升高（P＜0.01）；尿毒清组及肾福康中、高剂量组血清BUN、SCr水平较模型组显著降低（P＜0.05）；肾福康低剂量组血清BUN、SCr与模型组比较有下降趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。尿毒清组、肾福康高剂量组降低BUN、SCr作用与低剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3.3 肾福康胶囊对大鼠心、肾组织匀浆中SOD、MDA含量的影响

模型组与空白组比较，心、肾组织中SOD含量显著降低（P＜0.05），MDA含量明显升高（P＜0.05）。尿毒清组、肾福康中、高剂量组与模型组比较，显著升高慢性肾衰竭大鼠心、肾组织匀浆中SOD含量，降低MDA含量（均P＜0.05）。肾福康低剂量组与模型组比较有一定的作用趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。肾福康中、高剂量组在升高大鼠肾组织匀浆中SOD含量方面较低剂量组差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表1 肾福康胶囊对各组大鼠血清BUN、SCr含量的影响（x±s）

4 讨论

自由基是人体正常生化过程的中间产物，机体在进化过程中获得了灭活氧自由基的一些酶，如超氧化物歧化酶。当自由基产生过多或者机体内的酶系统过少时可导致疾病的发生。现代研究表明，慢性肾功能衰竭患者存在明显的氧化应激，从而加剧了慢性肾功能衰竭患者的病情及其并发症的发生[2-4]。Singh等[5]认为活性氧（ROS）在肾脏疾病的病理生理过程中起着关键作用，氧化应激状态时体内ROS明显增加，抗氧化剂显著减少，导致氧化与抗氧化动态平衡被破坏，介导了细胞的损伤。Terawaki等[6]经临床研究发现，氧化应激还加重了慢性肾功能衰竭患者的肾功能不全，氧化应激是加剧慢性肾功能衰竭患者病情进展及促进某些并发症发生的一个重要因素。清除或使用饮食、抗氧化药物纯化ROS可减轻、预防氧化应激，从而减轻、抑制由此导致的肾脏损伤[7]。

表2 肾福康胶囊对大鼠心、肾组织匀浆中SOD、MDA含量的影响（x±s）

肾福康胶囊由大黄、黄芪等药组成。方中大黄治疗慢性肾功能衰竭的作用已被广泛认可，它不仅能“活血祛瘀、泄浊解毒”，同时也有“推陈致新，通利水谷，调中化食，安和五脏”的作用。现代药理研究发现，大黄能提高血清蛋白，降低胆固醇、三酰甘油水平而调整脂质代谢；改善氮质血症，抑制残余肾单位代偿性肥大，降低残余肾高代谢状态，减少蛋白尿，并纠正钙、磷代谢紊乱[8]。抑制肾小管上皮细胞肥大和增殖，降低细胞的高代谢状态可能是大黄治疗慢性肾功能衰竭的主要机制之一[9]。肾小管高代谢学说认为，慢性肾功能衰竭时残余肾单位高滤过状态促使ATP利用及线粒体耗氧增加，氧自由基（OFR）产生过多，最终导致膜脂质过氧化，肾小管间质受损[10]。郑敏麟等[11]发现，大黄提纯物可抑制肾切除5/6大鼠肾小管上皮细胞线粒体嵴型肿胀，提示其可通过抑制肾小管的高代谢，提高线粒体氧化磷酸化效率，有效减缓肾硬化进程。方中另一主药黄芪能补气升阳，固表止汗，利水消肿，具有显著的免疫调节活性和抗氧化作用。研究表明，黄芪可减轻尿蛋白和肾脏病理改变，其作用机制可能为通过降低氧自由基生成或直接使其失活，并减轻脂质过氧化对肾脏的损害[12]。戴芹等[13]研究了黄芪对慢性肾功能衰竭大鼠的抗氧化作用，结果显示黄芪能显著升高SOD活性而清除氧自由基，从而减轻氧自由基对肾脏细胞的损伤，同时黄芪能够减少MDA含量，具有明显的抗氧化作用。

中医的“心肾相关”理论认为，肾与心脏有密切联系，肾病日久必然要累及心脏。清·陈士铎《石室秘录》中指出“治心之所以治肾，而治肾之所以治心”。《石室秘录评述·本治法》对这一心肾相关治疗学理论做了具体化评述，并归纳为“安心当治肾，治肾当治心”。这种“心肾相关”的治疗学理论为慢性肾功能衰竭心脏病变的治疗提供了理论依据。大量报道认为[14]，中医药的各类单方和复方均能有效降低BUN、SCr水平，具有提高内生肌酐清除率，改善贫血，改善血脂，抗组织纤维化等功效，与目前现代医学以改善引发慢性肾功能衰竭心脏病变的危险因素的治疗策略不谋而合。本实验同时研究了肾福康胶囊对慢性肾衰竭模型大鼠心、肾组织中SOD、MDA含量的影响，结果显示，模型组大鼠血清BUN、SCr及心、肾组织匀浆中MDA含量明显高于空白组，SOD含量较空白组显著性降低（均P<0.05）。尿毒清组、肾福康中、高剂量组较模型组比较能显著降低大鼠血清BUN、SCr及心、肾组织中MDA含量（P<0.05），明显增加心、肾组织匀浆液中SOD含量（P<0.05）。各剂量组间比较，肾福康中、高剂量组在降低大鼠血清BUN、SCr含量，升高肾组织匀浆中SOD含量方面有显著性优势（P<0.05）。肾福康低剂量组血清BUN、SCr水平与模型组比较有下降趋势，对升高心、肾组织中SOD含量，降低MDA含量的影响呈现了一定的作用趋势。表明肾福康胶囊对慢性肾衰模型大鼠心肾有一定的保护和治疗作用。

综上所述，肾福康胶囊可降低BUN、SCr水平，通过降低肾脏的毒性物质而阻止部分氧自由基的产生，同时可显著升高大鼠心、肾组织中SOD含量，降低MDA含量，提高机体的抗氧化能力，减轻自由基对肾小球的损害，从而改善肾功能。

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Anti-oxidation effects of Shenfukang Capsule for rats with chronic renal failure

JIANG Xia1LU Hua1▲CHENG Na2ZHANG Hongqi2
1.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530021,China;2.College of Pharmacy,Guilin Medical University,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Guilin 541001,China

Shenfukang Capsule;Chronic renal failure;Anti-oxidation

R285.5

A

1673-7210（2014）03（b）-0031-04

2013-12-12本文编辑：程铭）

广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题（编号Z2008135）；广西壮族自治区中医药民族医药自筹经费科研课题（编号GZZC13-17）。

▲通讯作者

[Absract]ObjectiveTo observe the anti-oxidation effects of Shenfukang Capsule for rats with chronic renal failure (CRF).Methods70 SD rats were randomly divided into blank,disease model,positive control and ShenFukang lowdose,middle-dose and high-dose treatment groups according to the levels of blood urea nitrogen(BUN),each gourp had 10 rats.All groups were fed with adenine to induce CRF model besides blank group.ShenFukang low-dose,middle-dose and high-dose treatment groups were administered according to the dose of 0.225,0.45,0.9 g/(kg·d)respectively for 40 days.Positive control group were given NiaoDuqing Granules according to the dose of 6.7 g/(kg·d)for 40 days.The levels of BUN,serum creatinine(SCr)of all groups after molding of 12 days and 24 days were detected,and the contents of superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde(MDA)in heart and kidney after molding of 40 days were detected.ResultsCompared with blank group,the levels of BUN,SCr,MDA in heart and kidney in model group were obviously higher,while the activities of SOD were obviously lower(all P<0.01).The levels of BUN,SCr,MDA in heart and kidney in positive control group,Shenfukang middle-dose and high-dose treatment groups were obviously lower,the activities of SOD were obviously higher compared with model group（all P<0.05).The effect of lower BUN, SCr levels and higher SOD activities in Shenfukang middle-dose and high-dose treatment groups were more significant than in Shenfukang low-dose treatment group(P<0.05).ConclusionShenfukang Capsule has the ability of anti-oxidation,can protect important organs such as heart,kidney of rats with CRF.