富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法

2014-03-15白沙如拉等

天津农业科学 2014年3期

白沙如拉等

近年来，随着分子生物学技术的发展，以DNA为主要研究对象的保护遗传学在珍惜濒危植物的保护和利用上得到了广泛应用[1-2]。相关研究结果证明，保护遗传学在濒危物种的保护方面起到了十分积极的作用[1-4]。而要开展珍惜濒危植物的保护遗传学研究，获得高质量基因组DNA是关键的第一步。对于植物DNA提取，目前已有很多经典和成功方法[5-8]，然而，多数濒危植物由于生境特殊（干旱、低温及盐碱等），其体内常含有较多的多糖和多酚等物质，若方法不当，会使所提基因组DNA沉淀含有多糖等粘稠胶状物而难于溶解，严重影响所提取DNA的质量，以至于无法进行PCR扩增和酶切等反应。虽然已有一些富含多糖多酚类物质植物的基因组DNA提取方法的报道[5-11]，但这些方法并不适用于所有极端生境下的植物，照搬这些方法提取的基因组DNA常常无法进行下游试验。为此，对于一些极端环境下的珍稀濒危植物基因组DNA的提取仍需摸索其最佳提取条件。变色硅胶能有效、快速干燥植物叶片，用植物干叶片提取DNA以及用此样品进行酶切和扩增的成功很有意义，为解决野外采样以及保存和运输上的困难提供了很大的方便，使得研究人员可以在居群水平对濒危植物进行保护遗传学研究[1-3]。为了评价超旱生濒危植物半日花（Helianthemum soongoricum）的遗传多样性，笔者尝试了上述多种去多糖多酚类植物基因组DNA的提取方法，用于提取半日花基因组DNA，但所提取的基因组DNA仍含有多糖等粘稠胶状物而难于溶解，无法进行酶切和PCR扩增试验，而商业化的植物基因组DNA提取试剂盒由于价格较高以及DNA产率低，不适合于大样本量的群体遗传分析，为此，本研究基于CTAB法提取植物DNA的原理，以硅胶干燥的叶片为材料，通过改进多糖的分离和去除，摸索出一种更适合半日花DNA提取的方法，为进一步开展半日花的保护遗传学研究奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 材料

本方法提供了一个通用、简单易行，成本低，且安全地去除植物DNA 提取过程中多糖等杂质的方法，所提取 DNA无降解并且纯度较高，采用该方法所提DNA的纯度和浓度可以满足PCR扩增和限制性内切酶消化的要求，这为后续以分子标记和序列分析为基础的植物群体遗传学和保护遗传学的研究奠定了重要的基础。

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