血小板膜糖蛋白在新疆汉族及哈萨克族脑梗死患者中表达的差异及临床探讨

余 鹃，潘 歆，王 宏

血栓形成是脑梗死的主要病理基础，在形成动脉血栓的诸多因素中，血小板活化是重要的起始原因之一。血小板膜糖蛋白:α-颗粒膜蛋白(CD62p)是近年来常用的血小板活化标志物，已证明CD62p不仅反映血小板活化程度及功能状态，还介导血小板与中性粒细胞和内皮细胞的粘附过程［1］，加重脑缺血后再灌注损伤。作者对80 例汉族及哈萨克族脑梗死患者及100 例相应民族健康对照组采用流式细胞技术，测定其血小板膜表面CD62p 的表达率，以观察脑梗死患者与正常人之间血小板活化的差异及不同民族之间脑梗死患者血小板活化的异同。

1 资料与方法

1.1 选取2010 年8 月～2012 年9 月在石河子大学医学院第一附属医院、伊犁州友谊医院、伊犁农四师医院、新疆伊犁州奎屯医院、博乐州医院住院汉族及哈萨克族脑梗死患者作为试验组，非缺血性脑血管病汉族及哈萨克族住院患者、健康体检哈萨克族志愿者作为对照组，4 组年龄、性别构成齐同(P＞0.05)。病例组均符合1995 年全国第四届脑血管病学术会议诊断标准［2］，并经头部CT 或MRI 证实;除外脑出血、具有心脏瓣膜、肿瘤等明显栓子来源的栓塞性疾病和肝肾功能不全、血液系统疾病、严重感染、恶性肿瘤及系统性疾病患者;正常对照组100 例，其中男性61例，女性39 例，年龄41～79(60±14)岁，选自北疆地区汉族及哈萨克族健康体检者，均经常规体检、ECG、X 线胸片等排除了心、脑、肝、肾等疾病，无脑卒中、心脏病等病史及家族史。研究对象均为新疆地区无血缘关系的汉族和哈萨克族人群，并知情同意。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 健康对照组均于清晨采血，脑梗死患者分别于接诊时(发病3 d 以内)及治疗1 w后分别采血，并作神经功能缺损评分。分别抽取肘静脉血2 ml 并缓慢注入预装EDTA 的试管中，倒置，轻轻混匀，立即送实验室。每只标本均严格按照活化血小板检测采血要求进行。

1.2.2 检测方法 所有标本均在采血后15 min内将血小板分离固定，2 h 内测定完毕。活化血小板标记:取静脉血1 ml，10%EDTA 抗凝，500 r/min 低速离心5 min，分离血小板血浆，用等量2%多聚甲醛固定15 min，然后用PBS 洗涤;调整血小板浓度为5×109/L 备用。取血小板悬液50 μl，加入CD62p-PE 各10 μl，在室温避光下孵育15 min，加PBS 1 ml 上机测定。活化血小板流式细胞仪检测:荧光标记阳性血小板百分率用PAS 流式细胞仪(德国PARTEC 公司生产)进行测定。

1.3 统计学处理 测得数据用SPSS17.0 统计软件处理，组间比较采用t 检验。

2 结果

2.1 脑梗死患者与健康对照者CD62p 平均表达率的比较 脑梗死患者CD62p 为(40.45±13.24)%，健康对照者CD62p 为(3.04±1.46)%;脑梗死组患者的CD62p 表达率明显高于健康者，差别具有显著性意义(t=2.51，P＜0.05)(见表1～表3)。

2.2 汉族脑梗死组与哈萨克族脑梗死组CD62p 平均表达率的比较 脑梗死患者CD62p 的表达均显著升高，且哈萨克族治疗组升高更明显(见表4)。

表1 脑梗死组与健康对照组CD62p平均表达率的比较(%)

表2 汉族健康对照组与脑梗死组CD62p平均表达率的比较(%)

表3 哈萨克族健康对照组与脑梗死组CD62p平均表达率的比较(%)

表4 汉族与哈萨克族脑梗死组急性期CD62p平均表达率的比较(%)

3 讨论

急性脑梗死的发生发展不是单一因素决定的，而是多因素共同作用的结果，其中血小板活化与血管内皮受损是急性脑梗死等血栓性疾病发生发展的重要病理基础。正常情况下，血液循环中血小板处于静息状态，并不黏附于血管内皮，在血流状态改变或血管受损等病理生理情况下，机体处于血栓前状态或发生血栓性疾病时，损伤的血管壁暴露出胶原并释放凝血酶和其他血小板诱导剂，促使血小板黏附于血管壁，并发生形态变化和细胞内反应［3］。黏附的血小板可与纤维蛋白原连接，促使血小板聚集，并与纤维蛋白原聚集成团，引起动脉血栓形成，造成血管闭塞，引起梗死。活化血小板释放的活性物质也可作用于血管壁，使平滑肌细胞收缩，血管痉挛，加重血管闭塞。CD62p 为血小板膜糖蛋白，CD62p分子主要表达于α 颗粒膜上，当血小板活化时，α 颗粒膜可与血小板胞浆膜融合，使CD62p 暴露于血小板膜表面，因此，CD62p 在血小板膜上高表达是血小板活化或血栓形成的特征性分子标志物。活化血小板是血栓的主要成分，也是引起血栓的主要原因。在脑梗死的病理生理过程中，血小板膜糖蛋白在血小板粘附于血管壁及相互聚集、形成血栓过程中起着关键作用［4，5］。降低活化的血小板意味着阻止血栓的进一步增大，防止病情的进一步加重，对急性脑梗死患者的治疗与预后均有十分关键的作用;本实验发现，正常人血液循环中，活化血小板标志蛋白CD62p 有低水平表达，这可能与机体维持止血-纤溶系统功能平衡有关［6］;脑梗死患者外周血中CD62p的阳性表达率明显高于正常对照组，说明前者血中血小板功能异常活跃，活化水平明显增高，这与文献报道一致［7］。CD62p 作为脑梗死病情判断的一个指标，对临床评价脑梗死患者的血小板活化程度及脑梗死的防治有重要指导意义。新疆哈萨克族由于生活习惯及遗传因素，造成高血压、动脉硬化人群明显高于汉族，哈萨克族高血压发病率为(18.97%)，是我国高血压病发病率最高的5 个民族之一［8］。高血压是脑卒中最主要的和独立的危险因素，检测外周血中CD62p 的水平能帮助判断病情，对于预防严重的血栓性疾病有重大的指导意义。本研究对80 例脑梗死患者血液中CD62p 的表达率与对照组比较有显著性差异(P＜0.05);且哈萨克族脑梗死患者血液中CD62p 的表达率较汉族脑梗死患者略高。这表明脑梗死时血小板功能异常活跃，其活化程度明显增高，脑梗死患者血栓的形成与血小板活化密切相关，血小板活化是脑梗死发生的重要因素;且血小板活化程度可能与种族相关;这为指导临床预防、诊治、评估急性缺血性卒中提供了简便、可行的依据。

［1］Larsen E，Celi A，Gilbert GE，el al.PADGEM protein:a receptor that mediates the interaction of activated platelets with neutrophils and monocytes［J］.Cell，1989，59(2):305-307.

［2］中华医学会神经病学分会.1995 年全国第四届脑血管病学术会议拟定标准［J］.中华神经科杂志，1996，29:379-381.

［3］邱莲女，林慧君，万志平，等.血小板糖蛋白与高血压、脑梗死关系的临床研究［J］.中国实验诊断学，2007，11(5):657-660.

［4］燕 虹，陈昆明.脑梗死患者血小板膜糖蛋白CD62p 和CD63 的测定及意义［J］.山西医科大学学报，2002，10(33):413-415.

［5］Thomas WS，Mori E，Copeland BR，et al.Tissue factor contributes to microvascular defects after focal cerebral isehemia［J］.Stroke，1993，24(6):847-850.

［6］胡玉卿，赵 洁，詹建刚，等.用流式细胞术检测CD62p、CD63 对预测血栓性疾病的临床意义［J］.中国现代医学杂志，2003，13(2):92-94.

［7］宋玉强，邹宏丽，韩仲岩.急性脑梗塞患者血小板颗粒膜糖蛋白的动态变化［J］.临床神经病学杂志，1999，12(2):91-94.

［8］全国高血压抽样调查协作组.中国人群高血压患病率及趋势［J］.高血压杂志，1995，3(增刊):7-13.