HPLC法测定复方参花搽剂中苦参碱的含量

高 云，郑祝华

（1.泰安市中心医院，山东泰安271000；2.乳山市中医院儿科，山东乳山264500）

HPLC法测定复方参花搽剂中苦参碱的含量

高 云1，郑祝华2

（1.泰安市中心医院，山东泰安271000；2.乳山市中医院儿科，山东乳山264500）

目的建立用高效液相色谱法测定复方参花搽剂中苦参碱含量的方法。方法色谱柱为Econobase C18柱，柱温为28℃，流动相为乙腈－0.1%磷酸（20∶80），流速为1.0 mL·min－1，检测波长为210 nm。结果苦参碱在1.038～20.76μg·mL－1范围内线性关系良好（r＝0.999 4），平均回收率为99.35%，重现性试验RSD为1.95%。结论该方法简便，准确，重现性好。

高效液相色谱；复方参花搽剂；苦参碱；含量测定

复方参花搽剂由苦参、金银花、黄柏、白鲜皮、蛇床子等八味药材组成，为我院自制制剂，有清热燥湿、抗菌止痒之功效，临床上可用于治疗荨麻疹、湿疹、渗出性皮炎、皮肤瘙痒症、皮癣等多种皮肤病。参考相关文献［1～5］，本实验选择苦参碱作为指标成分，采用高效液相色谱法对该制剂中君药苦参的含量进行研究，其结果可为该制剂建立完善的质量标准提供一定的参考依据。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（日产岛津LC20AT），BP211D型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号110805－200508，供含量测定用），乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。复方参花搽剂（泰安市中心医院，批号：20130805，20130816，20130830）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Econobase C18（4.6 mm× 150 mm，5μm）；柱温：28℃；流动相：乙腈－0.1%磷酸（20∶80）；流速：1.0 mL·min－1；进样量：20μL；紫外检测波长：210 nm［6］。理论板数按苦参碱峰计不低于5 000，主色谱峰与相邻其他色谱峰的分离度不小于2。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的苦参碱对照品约10 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品贮备液，冰箱4℃低温保存备用。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取复方参花搽剂10 mL，用氨试液调pH值至9～10，三氯甲烷萃取3次，每次10 mL，合并3次提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解后转移至1 mL容量瓶中定容到刻度，溶液经0.22μm微孔滤膜滤过后备用，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例，称取苦参以外的中药材适量，模拟制剂的制备工艺制成不含苦参的阴性对照样品，按“2.3”项下方法制备不含苦参药材的阴性对照品溶液。

2.5 系统实用性试验 取对照品、供试品及阴性对照溶液注入色谱仪中，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中，与对照品溶液在同一位置有相同的色谱峰出现，阴性对照溶液在同一位置无干扰峰出现，处方中其他组分对测定结果无影响，色谱图见图1。

图1 复方参花搽剂HPLC色谱图

2.6 线性关系考察 精密量取苦参碱对照品贮备液0.1、0.3、0.5、1、2 mL，置于100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，配成系列浓度的溶液。经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液进样，在上述色谱条件下进行HPLC分析，以苦参碱对照品峰面积为纵坐标（Y），以苦参碱对照品浓度为横坐标（X）绘制标准曲线。结果表明，苦参碱在1.038～20.76μg ·mL－1浓度范围内线性关系良好，回归方程为Y＝14 922.80X－11 460，其相关系数r＝0.999 4。

2.7 精密度实验 吸取同一浓度的苦参碱对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，测得苦参碱峰面积，以峰面积计算苦参碱的精密度，其RSD为1.97%，小于3%，结果显示仪器的精密度良好。

2.8 重现性实验 从同一批样品取样5份，按照“2.3”项下制备得供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样20μL，记录苦参碱峰面积，RSD计算结果为1.95%，表明重现性较好。

2.9 稳定性实验 吸取同一供试品溶液分别在0、 2、4、8、16 h进样20μL，按照上述色谱条件进行测定，以苦参碱峰面积计算，其RSD为1.63%，表明稳定性良好。

2.10 加样回收率试验 精密量取已知苦参碱含量一半的复方参花搽剂样品（批号：20130816）9份，分别精密加入高（70%）、中（50%）、低（30%）3种质量浓度的苦参碱对照品溶液，按“2.3”项下制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行HPLC分析。平均加样回收率为99.35%，RSD为2.52%，在95%～105%的方法可行区间范围内，符合含量测定的要求，说明该检测方法具有良好的准确度，结果见表1。

表1 苦参碱回收率试验结果（n＝9）

2.11 样品含量测定 分别取批号为20130805、20130816、20130830的3批复方参花搽剂样品溶液，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备，在上述HPLC条件下进行含量测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

苦参为复方参花搽剂的君药，苦参碱系苦参中含量较高的生物碱，对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌等均有明显的抑制作用［7］，故将苦参碱的含量作为该制剂质量控制的主要指标，采用HPLC法测定该制剂含量。

经对比不同检测波长下色谱峰的强度和分离度，确认该制剂中苦参碱在210 nm检测波长有最大吸收，且干扰峰少，样品峰能达到很好分离，保留时间为15.6 min左右，据此选择210 nm作为测定苦参碱的检测波长。在流动相的选择上曾使用不同配比乙腈－0.1%磷酸，经多次实验结果表明，乙腈－0.1%磷酸（20∶80）可以有效改善苦参碱峰形，抑制峰拖尾，理论塔板数符合相关要求，因此流动相选择乙腈－0.1%磷酸（20∶80）。

本方法操作简便，结果可靠，重现性好，可用于复方参花搽剂的质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：725.

［2］许乾丽，茅向军，鲍家科.HPLC法测定复方栀子喷雾剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量［J］.中国药事，2009，23（3）：281－283.

［3］付秀娟，陈晓亮，朱大胜.HPLC法测定利咽灵合剂中苦参碱的含量［J］.中国药师，2009，12（10）：1420－1422.

［4］刘琼.高效液相色谱法测定五柏参洗液中苦参碱的含量中［J］.中国医药指南，2012，10（30）：451－453.

［5］张立庆，张娜.HPLC法测定子花洁肤搽剂中苦参碱的含量［J］.齐鲁药事，2012，31（1）：15－16.

［6］李明松，许青.高效液相色谱法测定苦参中苦参碱的含量［J］.中国民族民间医药，2013，22（5）：19－20.

［7］佘永红，李璞，周顺.HPLC法测定地锦草灌肠液中苦参碱的含量［J］.中医药导报，2010，16（11）：90－91.

Determ ination ofmatrine in Compound Shenhua Liniment by HPLC

GAO Yun1，ZHENG Zhu-hua2
（1.Taian Central Hospital，Taian 271000，China；2.Department of Pediatrics，Rushan Traditional Chinese Medicine Hospital，Rushan 264500，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination ofmatrine in Compound Shenhua Liniment.MethodsThe column：Econobase C18，column temperature：28℃，Themobile phase：acetonitrile－0.1%phosphate（20∶80），the flow rate：1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 210 nm.ResultsThe linear range ofmatrine was 1.038～20.76μg·mL－1（r＝0.999 4），the average recovery was 99.35%，the RSD of repeatability test was 1.95%.ConclusionThemethod was simple and fast，the results were accurate and reproducible.

HPLC；Compound Shenhua Liniment；Matrine；Determination

R927.2

A

2095－5375（2014）09－0519－003

高云，女，主管药师，研究方向：医院制剂，E－mail：gaoyun_2008＠126.com