金黄色葡萄球菌致黄牛猝死的诊断及防治

陈文忠，徐国周

(昆明市东川区动物卫生监督所，云南 昆明 654100)

近年来，昆明市东川区碧谷镇梅子村农户饲养的黄牛相继出现零星死亡。据流行病学、临床症状和实验室诊断，确诊为金黄色葡萄球菌感染。经药敏试验，选用高敏药物对患畜进行治疗，对全村黄牛采取综合防治措施，有效地控制了黄牛死亡和疫病的发生及扩散。连续3年的追踪调查，已无黄牛猝死症的发生，疫病得到有效控制。

1 发病情况

碧谷镇梅子村地处半山区，较封闭和贫穷，饲养黄牛293头。从出现第1头黄牛突然死亡之后，连续2年间歇性地出现黄牛零星死亡，1个月内相继死亡12头，并不断出现病畜。全村前后共发病89头，死亡29头，仅黄牛出现此病症，呈零星散发，四季均可发生，但多于秋末和冬春季节发生，成年牛较幼牛多发，无性别差异。畜主细心者，发现牛食草减少或精神差，即请村兽医治疗，可治愈，否则待出现不食和颌下淋巴出现明显肿胀(脖颈粗肿)症状、呼吸困难时报兽医者，往往以死亡为转归。一般出现症状后几小时或1～2 d即死亡。

2 临床症状及剖检

急性者往往无任何前期症状，于使役中或放牧后突然倒地，口吐白沫，耳梢、四肢冰凉，全身肌肉颤抖，四蹄蹬踢，来不及救治或于治疗中死亡。有的前一天晚进食尚好，第二天早上死于厩中。

亚急性者，出现症状1～3 d后死亡，病程最长的一例达6 d死亡。体温初期略高，38.0～38.5℃，后期正常或偏低。流涎、废食、反刍减少或停止，呼吸粗粝、急促，颌下淋巴肿大(最小有鹅蛋大)，四肢震颤，脖颈长伸，最后倒地，呼吸极度困难死亡。

3 实验室检验

3.1 涂片检验

取病畜的脾、淋巴、肝、肾、血液触涂革兰氏染色镜检，见单个、短链或成堆的球形、卵圆形排列整齐的葡萄球菌，革兰氏染色阳性。

3.2 细菌培养及鉴定

3.2.1 普通培养

无菌操作取肝、脾、淋巴制成乳液和混悬液，以铂金耳取乳液、混悬液及血液分别划线接种于营养琼脂平板，牛血清培养基，置37℃，经24～48 h培养，检查菌落，见几种培养基均有灰白色至金黄色、不透明、边缘整齐，大小在1～3 mm、光滑、具黏性和光泽、中央凸起的菌落生长。

3.2.2 分离和鉴定培养

无菌操作挑取单个典型菌落分别接种于新鲜羊血培养基、却浦曼培养基、肉汤培养基进行分离及鉴定培养，经37℃，24～48 h，置需氧和厌氧环境中培养后观察，见三种培养基上均有菌落生长，新鲜羊血平板上生长的菌落周围呈β溶血环，却浦曼培养基的颜色由红色变为橙黄色，肉汤培养基于14 h后呈现均匀浑浊，表面长有淡黄色薄菌膜，管底有少量沉淀。

3.2.3 血浆凝固酶和生化试验

以灭菌吸管吸取0.5 mL肉汤培养菌液接种于2.5 mL兔血浆试管中，37℃水浴培养3～4 h，见紫红色凝固块，呈典型阳性反应。

生化试验:分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖，产酸不产气，发酵甘露醇，还原硝酸盐。

我们的团队采用这种隧道内游离输尿管方法，结合经典Wertheim手术的输尿管内侧入路法，找到输尿管入膀胱“输尿管末端”的解剖标志点，切除2 cm的膀胱宫颈韧带，ligasure离断子宫神静脉和膀胱下静脉的阴道支，解剖无血管区的膀胱阴道侧间隙(paravesico vaginal space, PVVS；图2)，完整向外推移输尿管伴行，位于输尿管下方的盆神经丛；子宫颈主韧带暴露在直视下，切除3 cm宫旁组织。2011年11月11日上述技术成功后，我们在国际手术同行透明监督下，由探索性研究，延推2期注册登记的标准化临床研究。

3.2.4 动物实验

取0.5 mL肉汤培养液，行家兔耳静脉接种(家兔来自东川区制药厂实验用健康兔，体重1.3 kg)。静脉接种观察:于10 h左右出现症状，34 h死亡，剖检见肝、肾、心脏、淋巴结脓肿，取脏器和血液涂片，染色、镜检，见与上述感染和培养相同的革兰氏阳性葡萄球菌。

3.2.5 结果

据细菌培养、分离、鉴定、生化试验以及动物实验，本次病样检验结果为金黄色葡萄球菌感染。

4 防治

4.1 药敏试验

以纸片法进行药敏试验(药敏试纸由昆明制药股份有限公司生产，批号:20111105)。试验结果:青霉素、链霉素、庆大霉素、SMZ(复方新诺明)高敏，抑菌圈＞15 mm。因此，青霉素、链霉素、庆大霉素、SMZ为首选治疗药物。

4.2 治疗

对有轻微症状如精神沉郁、食草异常者，给予抗菌消炎、强心补液，采用青霉素、葡萄糖盐水、安钠咖，配合维生素C、维生素B1静脉注射，每天1次，连用3 d。或者庆大霉素、SMZ配合维生素B族，肌肉注射，每天2次，连用5 d。同时辅以消炎清热中药(知母、白头翁、黄芩、黄柏、金银花、莪术、白术等)灌服。对其他健康牛，加人工盐抗生素舔饲，人工盐每头牛100～150 g、SMZ每千克体重0.01～0.02 g、羟氨苄青霉素每千克体重0.01～0.015 g，每天1次，连喂5 d，同时供给清洁饮水。

4.3 防控

全村用石灰乳进行厩舍、道路、环境消毒，发病户用具、食槽用2%的烧碱消毒，粪便清除后堆积2个月以上使用。同槽健康畜采取人工盐加抗菌素舔饲。加强牲畜饲养观察，及时发现和处置感染个体。

4.4 追踪调查

经2～3个疗程的治疗和保健，1个月内疫病得到有效控制。全村发病89头，治愈60头，治愈率67%，黄牛猝死症停止发生。之后的3年内该村黄牛未再发生此病。

5 小结与讨论

(1)据流行病学、临床症状及实验室系统检验结果，本次发生的黄牛猝死症为金黄色葡萄球菌感染所致。金黄色葡萄球菌是致病菌，可产生多种毒素和酶，如溶血素、杀白血球素、凝固酶、溶纤维蛋白酶等，破坏机体细胞功能，干扰正常代谢，致机体出现脓肿病灶、败血症及中毒。据记载，金黄色葡萄球菌对牛一般只引起急、慢性乳房炎，本次致黄牛猝死，可能与细菌量及所分泌的毒素的毒力有关，在黄牛体质稍差的情况下，细菌毒素、败血症及颌下淋巴结急速肿胀等因素致呼吸困难，是引起猝死的主要因素。本次未作细菌毒力测定与分析，其原因有待进一步研究。

(2)对症状较缓和或早期发现的病畜，及时给予治疗会收到良效。首选药物为青霉素、链霉素、庆大霉素、土霉素、SMZ等进行交叉使用，辅以中药进行消炎清热效果更佳。同槽健康畜采取人工盐加抗菌素舔饲，可防止疫病的发生。

(3)近几年来，东川区家畜“猝死症”时有发生，据已知病因有:一是炭疽杆菌、巴氏杆菌等细菌所致;二是食入鼠药或其他毒物所致。本次检出金黄色葡萄球菌引起家畜猝死，应予以重视。