活血通脉软胶囊的制备及其溶出度评价

孔令提，代 龙

（1.蚌埠医学院第一附属医院药剂科，安徽蚌埠233000；2.山东中医药大学药学院，山东济南250355）

活血通脉软胶囊的制备及其溶出度评价

孔令提1，代 龙2

（1.蚌埠医学院第一附属医院药剂科，安徽蚌埠233000；2.山东中医药大学药学院，山东济南250355）

目的采用湿法超微粉碎技术制备活血通脉软胶囊内容物，对其溶出度进行评价。方法以物料粒度、物料稳定性作考察指标，采用单因素考察法分别对不同分散介质、介质用量、粉碎时间、粉碎温度等工艺参数进行筛选；以多肽含量作溶出度考察指标，比较所制软胶囊与市售活血通脉硬胶囊体外溶出情况。结果软胶囊内容物的最佳湿法超微粉碎工艺为：药粉中加入3.8倍量含8%丙二醇的PEG400，于超微粉碎机中40℃粉碎30 min，出料，即得。软胶囊和硬胶囊在60 min时溶出率分别为75.74%和29.57%。结论湿法超微粉碎所制软胶囊溶出速率和程度显著高于市售硬胶囊，提示其具有更好的生物利用度，具有广阔的应用前景。

活血通脉软胶囊；湿法超微粉碎；水蛭；溶出度

活血通脉胶囊收载于卫生部颁药品标准（新药转正标准中药第十七册），由单味水蛭药材经普通粉碎直接装胶囊制成。水蛭药材中含有大量的酶类、蛋白质、多肽类成分，有报道显示水、乙醇、乙酸乙酯等提取的部位均为有效部位，以单独的提取溶剂提取均不能保证提取出所有的有效成分［1］，故水蛭药材较适宜直接粉碎入制剂，既可保证有效成分不损失，又不会使某些成分水解、破坏，而且成品率高，中间过程无损失。

超微粉碎能有效地提高药物的疗效，提高药材的生物利用度［2］。本文将“超微粉碎”和“高度混合”有机地结合起来，采用以液态基质（PEG400）为超微粉碎分散剂，与药物混合后一起超微粉碎，即采用“湿法超微粉碎”的方法，对水蛭进行微粉化，从而使水蛭高度分散在PEG400等基质中，达到高度混合的状态，成为均一的混悬液，甚至能使部分成分聚乙二醇化，以利于成分的吸收利用，增强疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Winner JL9200便携式激光粒度测定仪（济南微纳仪器有限公司）；BFM－6型振动式超微粉碎机（济南倍力粉技术工程有限公司）；ZRS－4型智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；UV1100型紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；JM－LB50C型胶体磨（温州市七星乳品设备厂）；RJNJ－2型软胶囊生产机组（北京长征天民高科技有限公司）。

1.2 材料与试剂 PEG400（天津市大茂化学试剂厂，批号：20070509）；大豆油（药用级；江西金海棠药用油有限公司，批号：071009）；甘油、丙二醇、乙醇等均为分析纯；活血通脉胶囊（新乡恒久远药业有限公司，0.25 g／粒，批号：20090406）；活血通脉软胶囊（自制，0.60 g／粒，批号：20090802）；牛血清白蛋白（中国药品生物制品检定所，批号：140619－200919）。水蛭药材购自济南建联药店，经山东中医药大学生药系周凤琴教授鉴定为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman的干燥全体。

2 方法与结果

2.1 物料粒度与稳定性测定方法［3，4］粒度：取待测样品适量（约50 mg），以乙醇为分散介质，加入激光粒度分析仪样品池中，超声60 s，根据能谱计算颗粒粒度分布，平行操作3次，记录D50、D90的值，即得（D50是指样品的累计粒度分布百分数达到50%时所对应的粒径；D90是指样品的累计粒度分布百分数达到90%时所对应的粒径）。

稳定性：取待测样品约20 g，共3份，置于25 mm×150 mm的玻璃试管中，密封，于室温下垂直静置1周，每天对光观察溶剂与物料均一状态。

2.2 不同超微粉碎方式的考察 A法：取水蛭药材粗粉（50目，下同）300 g，于超微粉碎机中粉碎30 min，出料，称取250 g超微粉与3倍量PEG400一起于JM－LB50C型胶体磨（功率1.1 kW，齿距5μm）中循环研磨30 min，出料。

B法：取水蛭药材粗粉250 g和3倍量PEG400一起于超微粉碎机（功率1.1 kW，振幅5.5 cm，下同）中粉碎混合30 min，出料。

取上述两种样品，测定物料粒度和稳定性，结果见表1。

表1 不同超微粉碎方式考察（n＝2）

结果表明，B法超微粉碎的效果优于A法。A法为常规超微粉碎，然后加液态介质用胶体磨研磨，此法无法将具有极大表面积的药物微粉分散均匀，得到的物料极不稳定，室温放置几天即分层、沉降。B法将药材与辅料混合进行超微粉碎，在高频振动及强大机械力作用下可以克服药物微粉巨大的表面能，达到高度混匀的状态，料液极细腻，稳定性较好。后续试验对B法中工艺参数进行考察。

2.3 不同种类分散介质的考察 液态分散介质在湿法超微粉碎中不仅起到分散微粉和防微粉聚集的作用，同时可极大影响物料粒度及稳定性。因此，对水、乙醇及常用的软胶囊基质（大豆油、PEG400等）进行了考察。

取水蛭药材粗粉250 g，共4份，按粗粉与介质1∶3（w／w）的比例分别加入水、乙醇、大豆油和PEG400，于超微粉碎机中粉碎30 min，出料，测定物料粒度及稳定性，结果见表2。

表2 不同种类分散介质考察（n＝2）

结果表明，水、乙醇相似，粉碎效果不理想，易分层；以大豆油或PEG400为介质粉碎效果较好，混悬液稳定性良好。相比于大豆油，PEG400有良好的化学稳定性和生产可操作性，因此选择PEG400为药材分散介质。

软胶囊壳中一般加入适量甘油或丙二醇保湿、增塑。当内容物含有PEG400时，甘油或丙二醇能缓慢向其中迁移，使囊壳“缩水”或硬化。为了保持平衡，在软胶囊的内容物中通常也需要加入一定量的甘油或丙二醇。参照文献，选择在内容物中加入8%丙二醇以保持水分［5］。试验发现含8%丙二醇的PEG400和单独以PEG400为分散介质的效果基本相当。因此，确定分散基质为含8%丙二醇的PEG400。

2.4 分散介质用量的考察 分散介质的用量对湿法超微粉碎的结果有较大影响，太少起不到有效分散作用，且物料流动性差，而太多会导致制剂服用量变大，因此对分散介质（含8%丙二醇的PEG400）的加入比例进行了考察。

取水蛭药材粗粉250 g，共5份，按表3中比例分别加入不同量分散介质，于超微粉碎机中粉碎30 min，出料，测定物料粒度及稳定性，结果见表3。

结果表明，当物料和介质比例为1∶2时药液较为黏稠，流动性差；1∶3时流动性稍有好转；当比例为1∶5时药液较稀；当比例为1∶3.8和1∶4.5时，药液均匀、细腻，流动性好。考虑到服药量及成本，选择以物料：介质（1∶3.8）的比例进行超微湿法粉碎。

表3 分散介质用量考察（n＝2）

2.5 超微粉碎时间的考察 粉碎时间过短达不到理想的粉碎效果，过长则耗能大，浪费能源，因此对超微粉碎时间进行考察。

取水蛭药材粗粉250 g，共5份，分别加入3.8倍量含8%丙二醇的PEG400，于超微粉碎机中分别粉碎10、20、30、40、50 min，出料，测定物料粒度及稳定性，结果见表4。

表4 超微粉碎时间考察（n＝2）

结果表明，本方湿法超微粉碎30～50 min均可达到理想的高度均质化效果，物料稳定，且粉碎30、40和50 min所得物料的粒度相差不大。考虑到大生产效率及生产成本等因素，选择粉碎时间为30 min。

2.6 超微粉碎温度的考察 超微粉碎过程中，液体分散介质的黏稠度对粉碎效果有一定的影响，低温下PEG400黏度大，随着温度的升高逐渐变稀，故对粉碎温度进行了考察。

取水蛭药材粗粉250 g，共4份，分别加入3.8倍量含8%丙二醇的PEG400，采用热循环水和制冷系统控制不同粉碎温度，于超微粉碎机中粉碎30 min，出料，测定物料粒度和稳定性，结果见表5。

表5 超微粉碎温度考察（n＝2）

结果表明，温度对本品湿法超微粉碎的效果影响较小。随着粉碎时间增加，机械能部分转化为热能，物料温度逐渐升高。综合考虑，粉碎时控制温度不超过40℃，以防有效成分受热破坏。

2.7 工艺验证及稳定性试验 取水蛭药材粗粉500 g，共3份，分别加入3.8倍量含8%丙二醇的PEG400，于超微粉碎机中粉碎30 min，出料，压制软胶囊（0.60 g／粒）。采用室温留样观察法对活血通脉软胶囊在拟临床用包装条件（铝塑泡罩包装）下进行了6个月的稳定性考察，结果见表6。

表6 工艺验证及稳定性试验结果（n＝2）

结果表明，3批样品在室温储藏条件下质量稳定，其性状、崩解时限、粒度等项均符合规定，说明经过6月放置后内容物仍保持良好的均一性。

2.8 体外溶出度实验 以多肽的含量作为溶出度考察指标，平行比较本品与市售活血通脉胶囊体外溶出情况。

取待测样品各6份，按《中国药典》2010年版（二部）附录ⅩC第二法测定［6］。以脱气人工胃液（0.1 mol·L－1盐酸）为溶出介质，转速为100 rpm，温度为（37.0±0.5）℃，分别于20、30、40、50、60、70、80、90 min时定点取样5 mL（同时补充同温等体积溶出介质），离心（4 000 rpm，20 min），取上清液微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液1 mL，以牛血清白蛋白为对照品，采用Lowry法测定样品中多肽含量［7］。分别以20粒硬胶囊和软胶囊样品中所含多肽平均含量为100%，计算两种样品在设定时间点的平均溶出百分率，结果见图1。

图1 不同样品的溶出度－时间曲线图（n＝6）

从图1可以看出，软胶囊的溶出率在30 min和60min时分别为51.39%和75.74%，而硬胶囊在30 min和60 min分别为15.54%和29.57%。

3 讨论

3.1 为解决超微粉碎所得微粉化物料常见的吸附、聚集、板结、吸湿等问题，本课题对传统的超微粉碎工艺进行创新改进，借鉴固体分散技术，采用湿法超微粉碎的方法将微粉化药物与液态基质PEG400高度混合，从而得到高度均质化的液态分散体系，物料粒度较细腻，且具有较好的稳定性，可用于直接压制软胶囊。稳定性试验表明该法所制软胶囊长时间放置后内容物仍均匀稳定，未见沉降。

3.2 以多肽的含量作为考察指标，采用体外溶出度法平行比较了本工艺所得软胶囊与市售活血通脉胶囊溶出情况。结果表明软胶囊溶出速率和程度显著高于市售胶囊，原因可能与软胶囊中内容物比表面积增大和PEG400对水蛭药材有良好的润湿性有关。

可见，采用湿法超微粉嫩工艺制备活血通脉软胶囊后可能显著提高水蛭药材的生物利用度，达到减量增效的目的。

［1］汪蜜，刘义梅，陈科力.水蛭抗凝血活性物质提取工艺研究概况［J］.亚太传统医药，2013，9（3）：56－58.

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［3］李劲，代龙.七厘散软胶囊内容物加PEG400的湿法超微粉碎工艺研究［J］.中国医药工业杂志，2009，40（9）：676－679.

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［5］张婷婷.水飞蓟素分散片及软胶囊的研究［D］.沈阳：沈阳药科大学，2006.

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录86.

［7］邱学伟，杨培民，代龙，等.水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（8）：60－62.

表2 加样回收率试验结果（n＝6）

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 流动相的选择 实验中曾用甲醇 －水（15∶85）、（25∶75）、（30∶70）等不同比例进行系统筛选优化，最后确定甲醇－水（25∶75），出峰时间较为理想，并在流动相中加入了一定量的冰醋酸将pH调节至4.50±0.02，以改善峰型，所得峰型较好。

3.2 样品提取条件的选择 在研究过程中分别进行了不同溶剂（甲醇、乙腈、乙醇）、不同提取方法（加热回流、超声提取）的比较，根据试验的结果，最后确定以甲醇回流提取3次。

参考文献：

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Preparation of Huoxuetongmai Soft Capsules and its dissolution investigation

KONG Ling-ti1，DAILong2
（1.Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu 233000，China；2.College of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

ObjectiveTo prepare Huoxuetongmai Soft Capsuleswith wetultrafine grinding technology，and evaluate its dissolution.M ethodsUsing particle size andmaterial stability as evaluation indexes，different dispersionmedium，medium dosage，grinding time and grinding temperature were studied by single factor method.The dissolution of soft capsules was comparing with commercially capsules using polypeptide content as indicator.ResultsThe optimal process was：PEG400，which containing 8%propylene glycol，was added to the power of whitmania pigra at the ratio of 3.8∶1，and then ultrafine grinding under 40℃for 30 min.The dissolution rate in 60 min of soft capsules and commercially capsule was75.74%and 29.57%，respectively.ConclusionThe dissolution of soft capsules was significantly higher than commercially available capsules，suggesting that it had better bioavailability and broad application prospects.

Huoxuetongmai Soft Capsules；Wet ultrafine grinding；Whitmania pigra；Dissolution

R944.5

A

2095－5375（2014）11－0647－004

孔令提，男，博士研究生，研究方向：新药开发及临床药学，E－mail：konglingti＠163.com

代龙，男，教授，硕士生导师，研究方向：中药新药开发及新剂型，Tel：0531－67811998，E－mail：dailongdailong＠263.net