狼毒大戟化学成分的研究

2014-03-06李青松吴起成

医药导报 2014年10期

关键词：莨菪大戟狼毒

李青松,吴起成

(江苏省昆山市中医医院药剂科,昆山 215300)

狼毒大戟化学成分的研究

李青松,吴起成

(江苏省昆山市中医医院药剂科,昆山 215300)

目的对狼毒大戟的化学成分进行系统研究。方法采用乙醇冷浸提取方法,经乙酸乙酯、正丁醇分步萃取,利用硅胶柱色谱柱层析和重结晶等方法对两个部分进行分离纯化,依据理化性质和波谱数据鉴定化学结构。结果从狼毒大戟的乙酸乙酯部位得到狼毒乙素(Ⅰ)、2,4-羟基-6-甲氧基苯乙酮(Ⅱ)、东莨菪亭(Ⅲ)、东莨菪苷(Ⅳ)、二十四烷酸(Ⅴ)、丁香酸(Ⅵ)、正丁醇部位得到蔗糖(Ⅶ)。结论化合物Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ为首次从狼毒大戟中分离得到。

狼毒大戟;化学成分;物质基础

狼毒大戟为大戟科大戟属(Euphorbia)植物狼毒大戟Euphorbia fischerianaSteud.的干燥块根,为常用的峻下逐水药,主治水肿,淋巴结、皮肤、骨、副睾等结核等。同时也表现出对皮肤、口腔及胃肠道黏膜强烈的刺激性和致炎、促发致癌的毒性作用。这些毒性严重制约其临床的用药安全,也为新药创制带来了困难。现代研究表明狼毒大戟具有双重生理活性,虽然毒性强烈,然而在抗菌、抗病毒、抗结核、抗肿瘤以及免疫等方面表现较好的药理活性[1-2]。近期研究已经发现狼毒大戟中含有特有化学成分[3]。因此对狼毒大戟进行化学成分的研究,阐明其毒性物质,对该药材的临床安全有效的使用和深入研究开发具有十分重要的意义。

1 试药与仪器

1.1 试药狼毒大戟药材2008年10月采于黑龙江齐齐哈尔市龙江县龙兴镇,经齐齐哈尔医学院郭丽娜教授鉴定为大戟科大戟属植物狼毒大戟(Euphorbia fischerianaSteud.)的块根。药材标本(No.NJUTCM-20081028)存放于南京中医药大学标本馆。

1.2 仪器 Bruker Avance AV500/300型核磁共振仪(TMS为内标);Waters Q-Tof micro YA019型质谱仪; WRS-1B型数字熔点测定仪(温度未校正);薄层层析及柱层析硅胶均为青岛海洋化工厂生产;试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取和分离称取狼毒大戟药材14.2 kg,加6倍量95%乙醇在室温下冷浸72 h,期间每隔12 h搅拌一次,倾倒出药液,过滤得到澄清冷浸药液。将药液减压浓缩至不含乙醇,得到狼毒大戟乙醇提取物浸膏。重复上述步骤冷浸5次,合并浓缩液浸膏。加水混悬后,依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取,重复4次,分别合并萃取液并经减压浓缩,得到乙酸乙酯部分浸膏(915.9 g)、正丁醇部分浸膏(220.6 g)。取乙酸乙酯部分浸膏800.0 g,进行硅胶分离,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇系统[(100∶0∶0)～(0∶50∶50)]进行梯度洗脱,共得到20个流份Fr.1～Fr.20。流份Fr.3(石油醚∶乙酸乙酯=2∶1)经反复硅胶分离得到化合物5(50 mg)。流份Fr.8(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)反复硅胶柱分离、重结晶得到化合物1(40 mg)、化合物2 (60 mg)。流份Fr.14(石油醚∶乙酸乙酯=1∶4)反复硅胶柱分离、重结晶得到化合物3(120 mg)。流份Fr.18(乙酸乙酯∶甲醇=5∶1)反复硅胶柱分离、重结晶得到化合物4(20 mg)、化合物6(20 mg)。取正丁醇部分浸膏160.0 g,进行硅胶分离,以乙酸乙酯-甲醇系统[(100∶0)～(50∶50)]进行梯度洗脱,共得到8个流份Fr.1～Fr.8,流份Fr.4(乙酸乙酯∶甲醇=4∶1)重结晶得到化合物7(900 mg)。

2.2 结构鉴定

2.2.1 化合物1 白色针晶(EtOAc)。1H-NMR (CDCl3,500 MHz)δ:14.26(1H,s,4-OH),5.91(1H, s,H-5),3.84(3H,s,6-OCH3),2.61(3H,s,1-COCH3),2.05(3H,s,CH3-3)。以上数据与文献[4]报道一致,故鉴定化合物1为狼毒乙素。

2.2.2 化合物2 黄色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z: 183[M+H]+。1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)显示有10个氢,其中两个酚羟基质子信号δ:13.80(1H,s,2-OH与C=O形成分子内氢键),10.59(1H,s,4-OH),两个与苯环质子信号δ:5.97(1H,d,J=2.2Hz,H-3),5.87 (1H,d,J=2.2Hz,H-5),其余为2.51(3H,s,1-COCH3),3.82(3H,s,6-OCH3)。以上数据与文献[5]报道一致,故鉴定化合物2为2,4-羟基-6-甲氧基苯乙酮(2,4-dihydroxy-6-methoxy-1-acetophenone)。

2.2.3 化合物3 浅黄色针晶(EtOAc)。紫外灯下显蓝色荧光。ESI-MS m/z:191[M-H]-。1H-NMR(CDCl3, 300 MHz)δ:7.61(1H,d,J=9.3 Hz,H-4),6.91(1H, s,H-8),6.85(1H,s,H-5),6.27(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),6.18(1H,s,7-OH),3.95(3H,s,CH3O-),13C-NMR (CDCl3,125 MHz)δ:161.30(C-2),150.28(C-7), 149.75(C-9),144.05(C-6),143.26(C-4),113.40(C-10),111.49(C-3),107.54(C-5),103.20(C-8),56.43 (CH3O)。以上数据与文献[6]报道一致,故鉴定化合物3为东莨菪亭(scopoletin)。

2.2.4 化合物4 白色结晶型粉末(MeOH)。1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)δ:7.96(1H,d,J= 10.0 Hz,H-2),7.30(1H,s,H-8),7.16(1H,s,H-5), 6.32(1H,d,J=9.5Hz,H-8),5.29(1H,d,J=3.5Hz, H-1'),3.82(3H,s,CH3O-),13C-NMR(DMSO-d6, 125 MHz)δ:160.62(C-2),150.08(C-2),149.08(C-9),146.15(C-6),144.31(C-4),113.44(C-3),112.40 (C-10),109.91(C-5),103.19(C-8),99.80(C-1'), 77.27(C-3'),76.90(C-5'),73.21(C-2'),69.77 (C-4'),60.81(C-6'),56.20(CH3O-)。以上数据与文献[7]报道一致,故鉴定化合物4为东莨菪苷(scopolin)。

2.2.5 化合物5 白色针晶(Pet/EtOAc),熔点(mp) 67～68℃,溴酚蓝反应显黄色。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:10.48(1H,br.s,COOH),2.35(2H,t,J= 6.6 Hz,H-2),1.63(2H,m,H-3),1.26(40H,m,H-4-23),0.88(3H,t,J=7.0 Hz,H-24)。以上数据与文献[8]报道一致,故鉴定化合物5为二十四烷酸(tetracosanoic acid)。

2.2.6 化合物6 白色针晶。ESI-MSm/z:197 [M-H]-,1H-NMR(CDCl3,500 MHz):7.57(1H,s,H-2),4.17(3H,s,CH3O-)。以上数据与文献[9]对照基本一致,故鉴定化合物6为丁香酸(syringic acid)。

2.2.7 化合物7 白色方晶(MeOH),熔点170～172℃。Molisch反应呈阳性。经与蔗糖对照品薄层比较,Rf值及显色行为一致,与蔗糖对照品混合后,熔点不下降,故鉴定化合物7为蔗糖(sucrose)。