Folin-Ciocaileu比色法测定不同等级天麻总酚含量

2014-02-28熊汝琴刘忠荣陈顺芳

浙江农业科学 2014年5期

关键词：比色法昭通总酚

熊汝琴，王锐，刘忠荣，陈顺芳

（昭通学院,云南昭通 657000）

Folin-Ciocaileu比色法测定不同等级天麻总酚含量

熊汝琴，王锐，刘忠荣，陈顺芳

（昭通学院,云南昭通 657000）

以没食子酸为对照,采用Folin-Ciocaileu比色法测定云南昭通产4类不同等级天麻中的总酚含量,该方法在2～12.0µg·m L-1浓度范围内线性良好,决定系数R2为0.996 5,结果还表明天麻总酚含量与块茎干重不呈正相关,即块茎大小与天麻的内在品质没有必然联系。

天麻；Folin-Ciocaileu比色法；总酚测定

天麻（Gastrodia elata Blum e）为兰科天麻属植物,是我国名贵的药食两用中药材之一,多用于头痛眩晕、肢体麻木、癫痫、抽搐等症。天麻含有丰富的酚性物质,如天麻素（4-羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷）、对羟基苯甲醛、对羟基苯甲醇等［1-5］。目前一般认为,天麻素是天麻的主要活性成分,具有镇惊、抗癫痫、镇静安眠、降血压等作用［6-9］,《中国药典》2010年版中天麻质量标准的制定也主要以天麻素含量作为重要的参考指标。

随着药理研究的进一步深入,越来越多的报道显示,仅以天麻素作为活性指标尚不能全面反映与天麻传统功效相关的药理活性,其他酚性成分对于其药效的发挥也非常重要［10-12］。因此测定天麻中总酚含量,用以衡量天麻的质量可能更为合理。

云南省昭通市是我国著名的天麻地道药材产地,所产天麻品质优良,为当地特色经济作物。市面上出售干天麻块茎,通常按块茎大小分为4个等级,1级每头≥35g,2级每头≥20g,3级每头≥12g,4级≥8g。1级天麻价格为4级的3倍左右。本实验建立了天麻中总酚的测定方法,同时对昭通产4种药用天麻变型（乌天麻、红天麻、黄天麻、绿天麻）不同等级大小块茎中总酚含量进行测定,期望为天麻的合理应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

实验用乌天麻产自云南省昭通市彝良县小草坝乡小草坝村,红天麻、黄天麻、绿天麻均产自昭通市昭阳区,由昭通市天麻研究所提供鉴定。

试剂：福林酚试剂（上海喜润化学工业有限公司）；没食子酸标准品（中国药品生物制品检定所,供定量测定用）；N a2C 03（分析纯）；水为2次蒸馏水。

使用仪器：先行者电子分析天平；高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；U V/V i s 2082P C S紫外可见分光光度计。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液配制

精确称取没食子酸标准品适量,用水溶解并定容至250 m L,摇匀,制成0.143 2 mg·m L-1的对照品标准溶液。

1.2.2 标准曲线的建立

精确吸取标准溶液0.4,0.6,0.8,1.0, 1.2,1.4,1.6,1.8和2.0 m L,分别加蒸馏水5.0 m L,混匀,加福氏试剂1.5 m L,3 min后,加10%N a2C 03溶液3.0 m L,用水稀释至25 m L,30 °C水浴加热30 min后,取出,摇匀,于765 nm波长下,测定吸光度值,建立标准曲线。

1.2.3 样品处理

天麻中的酚性成分有脂溶性的也有水溶性的,通过预实验发现采用70%乙醇为提取溶剂,所得溶液显色后测定结果最佳。取各级干天麻块茎,粉碎,过孔径0.149 m m（100目）筛,精确称取2.0g,加70%乙醇25 m L,浸泡24 h,30°C水浴中超声（工作频率40 kH z,功率250 W）30 min,4 500 r·m i n-1离心15 min,过滤,上清液置50 m L容量

瓶中,残渣每次加10 m L70%乙醇重复前述操作再提取2次,过滤,合并滤液,定容至50 m L,即得总酚提取物溶液。

1.2.4 显色反应条件的确定

实验过程中,参考相关文献［13-15］,经过多次实验最终确定加蒸馏水5.0 m L,福氏试剂1.5 m L, 10%N a2C 03溶液3.0 m L,在这样的试剂比例下,显色溶液的澄清度和稳定性都较高。在考查反应温度和时间的实验时发现,使用30°C水浴加热30 min,反应条件比较温和,灵敏度高,结果可靠。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

以没食子酸质量浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,制作标准曲线,得回归方程为y=0.048 1χ+ 0.004 8,决定系数R2为0.996 5,没食子酸质量浓度在2～12.0µg·m L-1与其吸光值呈现良好的线性关系,该方程可用于天麻多酚的定量测定。

2.2 稳定性

取黄天麻2级样品溶液1.0 m L,按上述处理及测定方法,在样品液与显色剂反应完全后分别在0.5, 1.0,1.5,2.0,2.5和3.0 h测定其吸光度,以评价该分析方法在一段时间内的稳定性。从表1可以看出,由于酚类物质被氧化,其总量值略有下降的趋势,但2 h内溶液稳定性良好,相对标准差为1.78%。

表1 稳定性的实验结果

2.3 精密度

取质量浓度为5.728 0µg·m L-1的对照品溶液,重复测定6次,记录其吸光度的值,相对标准差为0.35%,结果（表2）表明仪器精密度良好。

表2 精密度的实验结果

2.4 重现性

取3级黄天麻按前述提取及测定方法,重复测定6次,结果如表3所示,得相对标准差为0.59%,表明具有良好的重现性。

表3 重现性的实验结果

2.5 加标回收率

取没食子酸标准品适量,制成0.101 5 mg·m L-1的对照品贮备液。称取2级绿天麻细末约0.5g,平行6份,精确加入对照品贮备液10.0 m L,显色反应后,测定吸光度的值并计算回收率,得平均回收率为100.17%,相对标准差为1.42%（表4）。

表4 天麻多酚加标回收的实验结果

2.6 天麻总酚含量

各类各级天麻样品溶液显色后测定吸光度值,并根据标准曲线计算总酚含量。表5表明,天麻总酚含量与块茎干重不呈正相关,红天麻和黄天麻中,块茎干重最小的4级天麻反而总酚含量较高,可见不能仅凭块茎大小评价天麻的内在品质。

表5 不同等级天麻块茎的总酚含量（n=3）

3 小结

实验结果表明,天麻总酚含量与块茎干重不呈正相关,可见不能仅凭块茎大小评价天麻的内在品质。用F o l i n-C i o c a l t e a u法测定天麻中的总酚含量,回收率高,灵敏度高,精密度、准确度好,而且操作简单快速又节约。

［1］周俊,杨雁宾,杨崇仁.天麻中的新酚甙-天麻素［J］.科学学报,1979,24（7）：335-336.

［2］周俊,浦相渝,杨雁宾.新鲜天麻的9种酚性成分［J］.科学学报,1981,18：1118-1120.

［3］TaguchIH, YosiokaI, YamasakiK etal.Studieson theconstituentsofGastrodia elata Blume［J］.ChemPharmBull,1981, 29 （1）： 55 -62.

［4］NodaN, KobayashiY, MiyaharaK, etal.2, 4-Bis（ 4-hydroxybenzyl） phenol from Gastrodia elata ［ J］.Phytochemistry, 1995, 39 （5）： 1247 -1248.

［5］HayashiJ, SekineT, DeguchiS, etal.Phenoliccompoundsfrom Gastrodia rhizome and relaxant effects of relatedcompoundson isolated smooth muscle preparation ［ J］.Phytochemistry, 2002, 59 ： 513 -1519.

［6］汪军玲,周本宏.天麻素的药理作用和临床应用研究［J］.武汉生物工程学院学报,2009,5（4）：309-313.

［7］宋阳,李珊,李洁,等.天麻素对离体蟾蜍心脏活动影响的实验研究［J］.中国民族民间医药,2012,18（10）：46-47.

［8］黄秀凤,唐红,肖颐,等.合成天麻素对心肌细胞中毒性损伤的保护作用［J］.成都中医学院学报,1990,13（2）：27-28.

［9］倪惠君,秦泗关,王友兰.天麻素注射液的临床应用［J］.中医临床研究,2012,4（1）：100-101.

［10］田野,李秀芳,陈顺芳,等.H P L C法对三产地天麻中天麻素含量的测定［J］.云南中医学院学报,2008,31（3）：6-8.

［11］张维明,杨莲,李秀芳,等.云南昭通天麻松弛血管平滑肌活性成分的筛选［J］.中国实验方剂学杂志,2011,17（6）：157-159.

［12］陶云海.天麻药理研究新进展［J］.中国中药杂志,2008, 33（1）：108-110.

［13］张科卫,马彩霞,缪六舒.Folin-Ciocaileu比色法测定不同产地生姜中总酚［J］.中成药,2012,34（12）：2450-2452.

［14］周云凯,李伟平,田莎莎,等.白及须根和块茎总酚含量的测定［J］.中国实验方剂学杂志,2012,18（10）：161-164.

［15］丁明,钟冬莲.茶油中总酚的测定方法J］.浙江农业科学, 2010（6）：1369-1371.

（责任编辑：张才德）

S567文献标志码：B文章编号：0528-9017（2014）05-0664-02