南京地区2007-2014年丙型肝炎病毒基因型变化分析*

王建芳，周镇先，肖 雯，谈国蕾，孙 梅，邓小昭**

（1南京市第二医院临床科研中心，江苏210003；2南京军区疾病预防控制中心）

南京地区2007-2014年丙型肝炎病毒基因型变化分析*

王建芳1，周镇先1，肖 雯2，谈国蕾1，孙 梅1，邓小昭2**

（1南京市第二医院临床科研中心，江苏210003；2南京军区疾病预防控制中心）

目的：了解南京地区2007~2014年丙型肝炎病毒（HCV）基因型分布特征以及基因型的变化，并分析其与临床诊断结果的关系。方法：采用丙型肝炎病毒基因分型试剂盒DNA测序法对丙型肝炎1262例抗-HCV阳性血清进行HCV RNA检测和HCV病毒基因分型。结果：1262份抗HCV阳性血清中HCV RNA阳性1208例（95.7%），单一基因型占91.4%，其中1b型占70.4%，2a型占9.3%，3b型占6.3%。混合基因型占4.4%，其中1b&2a混合型占2.5%，1b&3b混合型占1.6%，单一基因型和混合基因型分布差异无统计学意义（P>0.05）。结论：南京地区HCV基因型以1b型为主，同时有6b和6h新基因型出现，提示今后南京地区会出现多种基因型并存。

丙型肝炎病毒；基因型；吸毒人群；血透人群；献血人群；逆转录聚合酶链反应；遗传分析仪检测

丙型病毒性肝炎是由HCV引起的疾病，HCV感染呈全球性流行。血清流行病学调查资料显示，我国HCV抗体阳性率约为3.2%[1]。HCV基因型的分布存在着明显的地区性，基因型的不同与病情的轻重、治疗效果有关[2]。本研究采用HCV基因分型试剂盒（DNA测序法），2007—2014年间南京市第二医院门诊与住院诊治丙型肝炎患者1 262例，对其抗-HCV阳性患者血清进行病毒基因分型，分析南京地区HCV感染基因型特征，为HCV感染的预防和治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 一般资料 丙型肝炎1 262例，男691例，女571例，平均年龄（44.1±14.6）岁，HCV感染者病例中男性多于女性，但两者差异无统计学意义（χ2=9.8，P=0.060）。所有病例符合中华医学会传染病和寄生虫病学分会与肝病学分会联合制定的《丙型肝炎防治指南》和《病毒性肝炎防治方案》中诊断标准。2007~2014年间，病例数在145~214例间变化，但无明显上升或下降趋势；患者年龄2~89岁，40~60岁病例最多，占46.1%。HCV感染者的年份以及年龄分布见表1、2。

1.2 试剂和仪器 RNA提取试剂盒（上海研卉生物科技有限公司）；丙型肝炎病毒（HCV）基因分型检测试剂盒（DNA测序法）（北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司）；分析灵敏度最低下线为5×103copies/mL。荧光定量PCR仪：实时荧光定量PCR仪，型号为ABI 7500型（美国）。测序仪：美国产全自动DNA测序仪（遗传分析仪），型号为ABI 3730/3730XL。

表1 HCV感染者年份分布

表2 HCV感染者年龄分布

1.3 方法 每例患者采血后迅速分离出血清，血清标本在离体12h内完成HCV-RNA及基因型检测。（1）RNA的抽提：采用RNA提取试剂盒提取抗-HCV阳性血清中的RNA并溶于20μL DEPC水中。（2）HCV基因分型：采用丙型肝炎病毒（HCV）基因分型检测试剂盒（DNA测序法）进行基因分型，即RT-PCR一步法和DNA测序技术，检测临床血清样本中的HCVRNA的含量及HCV基因型。（3）PCR产物酶解反应条件:37℃60min，80℃15min。取酶解产物、测序试剂和HCV测序引物进行PCR扩增。（4）HCV分型：分析将测得序列复制粘贴到NCBI上病毒分型窗口中，选择HCV分型，点击确定，出来最上面的结果就为该血清HCV亚型。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计分析。组间差异性比较计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 丙型肝炎患者HCV基因型分布 1262份血清经RT-PCR成功扩增1208份（95.7%），共分出单基因型和混合基因型12种，单一基因型占91.4%，混合基因型占4.4%，未测出基因型54例（4.3%）。具体基因分型结果见表3。

表3 南京地区2007-2014年丙型肝炎病毒基因型分布 例（%）

2.2 南京地区不同感染途径丙型肝炎病毒HCV基因型分布 4组不同感染途径患者均以单一基因型感染为主，1b型为最高，单基因型和混合基因型感染共检出12种，在献血人群中感染HCV的基因型，单一基因型高达96.6%，混合基因型仅占2%，在透析人群及吸毒人群中也以单一基因型为主，但这两类人群的混合基因型感染率高于献血人群，分别为占5.4%和7.8%，是献血人群3~4倍，研究资料中部分不明原因的感染，约占全部HCV感染20%，在不明原因和吸毒人群中出现以前未见的基因型2b与6h。见表4。

3 讨 论

HCV分为不同的基因型与基因亚型，目前世界上公认的可分成6个基因型和至少83个亚型[1-2]。HCV基因型分布呈现地区性差异，HCV1～3型呈全球性流行，欧美各国流行株大多数为1a型。亚洲地区以1b型为主，其次为2a型；HCV 3型基因型则在印度半岛、东南亚和印度尼西亚较为突出。而中东、南非和香港地区常见的HCV基因亚型分别为4a、5a和6a型[3－6]。从已有的流行病学资料来看，我国流行最广泛的为HCV 1b型和2a型[7－9]。其中南方沿海城市丙肝病毒基因型主要以1b型为主，大概占90%以上，北方城市其基因型主要是2a型，占46%~ 70%[9]。本研究结果显示，南京地区HCV基因型以1b为主，占70.4%，2a次之占9.3%，混合基因型占4.4%。2013~2014年出现2b、6b和6h基因型，南京地区新出现的基因型可能与人口流动增大相关，导致HCV感染趋于复杂，但南京整体HCV基因型分布介于我国南北方之间。

表4 南京地区不同感染途径丙型肝炎的HCV基因型分布 例（%）

与潘剑等[10]2004~2009年间南京地区丙肝570 例HCV基因型分型结果相比，总体格局没有变化，1b与2a仍旧是HCV感染的主要流行亚型。但3b型比例明显增加，且出现2b、6b和6h基因型，尤其6b型和6h型为近年南京地区新检测到的基因型。王佳佳[11]等2006年5月~2009年12月间收集到的江苏省505例病例样本中，1b型348例（68.9%）、3 型40例（7.9%）、2型24例（4.8%），混合型占16.9%，3型超越2型占据第2。与之相比，除2型基因型高于3型外，样本中混合型比例降低（P<0.05），6b型和6型也属新基因型。

广州地区2008～2011年对无偿献血人群中320 例HCV感染者进行分型，发现无偿献血人群中主要流行的是HCV 1b和6a，并且6a已超过2a居第2位。上海地区HCV基因型分布为71例血清标本中，1b型62例（87.32%）,2a型9例（12.68%）[12-13]；合肥地区抗HCV阳性84例中，HCV RNA阳性者61例，1b和2a型占98.36%[14]；2010～2012年浙江省温州市无偿献血者中，HCV感染率不高，所感染的HCV基因型以1b型为主，1b和2a混合感染率较高[15]。2008～2010年浙江湖州地区HCV RNA阳性94例结果显示，1a型占5.3%，1b型占 81.9%，2a型占9.6%，还有少量3a型和6a，该地区也是1b型为主，其次为2a型，同时还存在其他基因型[16]。

以上数据显示南京地区HCV患者基因型结构，从2004~2014年的总体以1b和2a为主，但新的基因型不断出现。这与南京地区较为发达，人口流动性的增大，同时吸毒人群关系复杂，交叉感染、重复感染有关。本研究发现HCV基因型与感染方式等有关，以往透析人群与献血人群的基因型较为单一。但近几年HCV感染基因型呈复杂趋势，随新基因型出现，必将导致HCV感染的预防、控制治疗更加复杂，成本更高，难度更大，需要引起社会各界的广泛关注和重视。

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R512.6+3

B

2014-10-10

1006-2440（2014）06-0666-04

南京市科委（201201066）。

**[通信作者]邓小昭，Email：dengxiaozhao1002@vip.sina.com