基质固相分散萃取-液相色谱串联质谱对肠衣中磺胺类药物残留的测定

（保定出入境检验检疫局，河北保定 071051）

基质固相分散萃取-液相色谱串联质谱对肠衣中磺胺类药物残留的测定

刘谦

（保定出入境检验检疫局，河北保定 071051）

建立检测肠衣中磺胺多残留的液相色谱- 串联质谱法，包括磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉。肠衣样品中加入C18填料分散萃取，乙腈水溶液提取，光波模式下微波辐照，正己烷脱脂，采用液相色谱三重四极杆串联质谱检测，使用电喷雾离子化源（ ESI），在正离子条件下以多反应监测（MRM）方式进行扫描。在3个添加水平下，方法对各被测物的回收范围为68%～89%，相对标准偏差均小于20%。各被测物的检出限为50μg/kg，可用于肠衣中磺胺类物质多残留检测，且稳定性好，结果可靠。

液相色谱串联质谱；基质固相分散萃取；肠衣；磺胺

磺胺类物质是对氨基苯磺酸的衍生物，其分子中含有苯环、对氨基（N4）和磺酰胺基，抗菌谱广、性质稳定、价格便宜，畜牧业上广泛用于细菌感染性疾病预防和治疗。但是如果用药剂量、时间和部位使用不合理就会导致其在体内蓄积，可形成过敏性反应[1-5]，抑制人体的白细胞生成。磺胺药物残留还会导致人体内耐药性细菌的生成，有潜在的致癌性，日益受到社会的重视。目前中国、欧盟、美国、日本等均将磺胺类药物列为动物饲养过程中的限用药物，其最大残留限量多小于100μg/kg。我国农业部2002年第253号公告规定规定磺胺类药物最大残留限量为100μg/kg。

常用的检测磺胺类药物残留的方法为液相色谱法、气相色谱法、气相色谱/质谱法和液相色谱/质谱法[6-10]。液相色谱/质谱法由于具有很高的灵敏度且能准确的定性定量，非常适合药物残留的分析。本实验以肠衣为研究对象，建立了肠衣中磺胺多残留（包括磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉）检测的液相色谱-串联质谱法，其稳定性好，结果可靠。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

液相色谱-串联质谱仪，配以电喷雾离子源（ESI）、万分之一分析天平、高速离心机、氮气浓缩仪、具塞离心管、旋转蒸发仪、涡旋混匀器、pH计、棕色分液漏斗、棕色鸡心瓶、微波炉。

乙腈、正己烷、正丙醇均为色谱纯；无水硫酸钠、甲酸为分析纯；C18填料为40μm；磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉标准品，均购自上海安谱试剂公司。

1.2 样品处理

准确称取制备好的样品号2.0g，置于玻璃研钵中，称取6.0g C18填料加至试样上用玻璃杵轻轻研磨，要求样品与填料混合均匀，色泽均一，状态分散，装于50mL塑料离心管中，加入25mL 乙腈水（100：3）溶液，涡旋振1min，放入微波炉中在光波模式下微波辐照30s，3000 r/min离心5min，将乙腈层移入100 mL 分液漏斗中，离心后的沉淀物再加25mL 乙腈摇匀，微波辅助提取30s，3000 r/min 离心5min ，合并乙腈提取液，待净化。

提取液中加入25mL乙腈饱和的正己烷溶液，振荡5 min，将底层乙腈溶液移入150mL 鸡心瓶中，加入10mL 正丙醇，用旋转蒸发仪于45℃减压蒸发至近干，氮气吹干，用1.0mL50%乙腈水溶液定容，超声30s 溶解残渣，将溶解液移入10mL 离心管中，加0.5mL乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡2min，3000r/min 离心5min，弃去正己烷溶液，取底层乙腈水溶液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

1.3 标准曲线的制备

取空白样品，经1.2处理后制备空白基质溶液，配制目标物浓度为100、200、300、400、500ng/ mL。

1.4 检测条件

1.4.1 色谱条件 色谱柱：Venusil MP C18，3μm，100 mm×2.1mm；柱温：35℃；进样量：20 µL；液相梯度洗脱程序见表1。

1.4.2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；离子源温度：120 ℃；定性离子对，定量离子对，去簇电压和碰撞能量见表2。

表1 液相梯度洗脱程序

表2 质谱参数

2 检测结果

标准品特征离子谱图在上述仪器条件下，3.5-8.0min全部出峰，且峰形尖锐而对称，测试结果见图1-5。图1表示的是目标物总离子流图，出峰先后依次为磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉；图2-5分别表示磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉的提取离子流图。

图1 磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉总离子流图

图2 磺胺嘧啶提取离子流图

2.1 添加回收率和精密度

图3 磺胺二甲基嘧啶提取离子流图

图4 磺胺甲氧嘧啶提取离子流图

图5 磺胺喹噁啉提取离子流图

标准曲线制备过程见1.3，以两种目标物的特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线（图6-9）。其相应的回归方程为y=293x-1375、y=332x-2933、y=151x-1568、y=282x-3470，相关系数均大于0.99。

采用空白样阴性品，4种磺胺物质的添加浓度为 100、200、500ng/mL共3个水平，每个浓度做6个平行，经1.2样品处理后，取20.0μL进样分析，每个浓度重复进样3次。根据峰面积计算添加回收率和变异系数（CV）。检测结果如表3所示。

图6 磺胺嘧啶标准曲线

图7 磺胺二甲基嘧啶标准曲线

图8 磺胺喹噁啉标准曲线

图9 磺胺甲氧嘧啶标准曲线

表3 精密度和回收率

3 讨论

3.1 基质固相分散萃取

基质固相分散萃取集样品制备、萃取和净化过程于一步中，是一种优秀的样品前处理技术，特别适用于难匀浆和均质的样品，例如肠衣样品。本实验采用C18填料作为担体，通过剪切力和摩擦作用将样品基质彻底粉碎，并均匀的分布于填料。所需样品量和有机溶剂消耗少，前处理时间短，操作简便，回收率高。

3.2 提取溶液的选择

因磺胺类药物不溶于非极性溶剂，而乙腈具有除蛋白作用，本实验采用乙腈-水进行提取，对磺胺类的选择性好，且提取杂质较少，操作简便。磺胺类药物属于酸碱两性物质，在酸性水溶液中，磺胺类呈电离状态，溶解度会增大，可以在提取液中加入少量甲酸，增强提取效果。

3.3 样品浓缩

由于本实验中采用了基质固相分散萃取，将萃取和净化步骤同时进行，节省了处理时间，操作简便，有机溶剂消耗比较少。在处理过程中使用乙腈饱和的正己烷萃取样品的脂肪。由于磺胺的热不稳定性，在旋转蒸发浓缩过程中加入了少量的正丙醇，可以避免磺胺的分解。

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Determination of Sulfonamides in Casings by Liquid Chromatography -Mass Spectrometry with Matrix Solid Phase Dispersion Extraction

Liu Qian

（Baoding Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Hebei 071051）

A specifc and sensitive liquid chromatography-mass spectrometry method was developed for the determination of sulfadiazine，sulfamethazine，sulfaquinoxaline and sulfamonomethoxine. The C18 fller was added to disperse casing samples for extraction，acetonitrile solution was used to extract under microwave irradiation，and after being defatted with n-hexane，the analytes were tested by liquid chromatography-mass spectrometry with electrospray ion（ESI）source and multiple reaction monitoring（MRM） for screening．The mean recovery rates ranged from 68% to 89% with relative standard deviations below 20% at three spiked concentrations. The lower quantifcation limit was 50μg/ kg，The method was sensitive，rapid and accurate enough to determine various sulfonamides in casing samples.

HPLC/ MS； matrix solid phase dispersion extraction； casing； sulfonamides

TS207.53 < class="emphasis_bold"> 文献标识码 A

A

1005-944X（2014）07-0097-04