呼吸道感染488例非典型病原体及病毒IgM抗体检测分析

童春堂，车晓宇，李雪辉，尤兰华，郭沛艳，陈杭薇

目前非典型病原体(主要指肺炎支原体、嗜肺军团菌)及病毒在呼吸道感染患者中的检出率日渐升高，随着检测方法的改进及研究的深入，该病原体及病毒检测在呼吸道感染诊治中的地位越来越受到临床医师的重视。本研究采用间接免疫荧光法(indirect immuno fluorescence，IIF)快速定性检测住院呼吸道感染患者血清9种常见呼吸道病原体及病毒急性期IgM抗体，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 检测对象 北京军区总医院呼吸内科2012年2月1日—2013年5月31日收治呼吸道感染488例，男300例，女188例;年龄17～99(62.3±21.4)岁。病种:急性支气管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD)、支气管扩张、支气管哮喘急性发作、间质性肺病、肺癌、发热待查等。

1.2 检测试剂 9种呼吸道感染病原体及病毒IgM抗体检测试剂盒为西班牙VIRCELL公司原装进口产品，购自郑州安图科技发展有限公司。采用IIF技术可检测9种IgM抗体:嗜肺军团菌(legionella pneumophila，LP)血清1型(孔1)，肺炎支原体(mycoplasma pneumonia，MP，孔2)，贝氏柯克斯体(coxiella burnetii，Cb，孔 3)，肺炎衣原体(chlamydia pneumonia，CP，孔 4)，腺病毒(adenovirus，ADV，孔5)，呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV，孔6)，流感病毒 A(influenza virus A，FluA，孔7)，流感病毒 B(influenza virus B，FluB，孔8)，副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)1、2、3 型(孔 9)，孔10为质控孔，有效期内按照试剂盒使用说明书操作。

1.3 检测方法

1.3.1 标本收集与处理:①患者入院24 h内，静脉穿刺采集血液2～3 ml，2000 r/min离心5 min后取血清待测，按1∶1比例稀释血清样本;②向稀释后的血清加入吸附剂，以3000 r/min离心10～15 min，于试剂盒内自带“载玻片”的每孔(9个检测孔和1个质控孔)中加入15μl处理后血清，于37℃下温育90 min;③用磷酸盐缓冲液缓慢冲洗载玻片后放置水平摇床摇动10 min，再用蒸馏水缓慢冲洗;④将载玻片自然晾干，每孔加入15μl荧光素标记的抗人IgM磷酸缓冲液后放入试剂盒37℃温育30 min，晾干后加封闭介质，加盖玻片，即刻在荧光显微镜下观察结果，如不能立即观察，可2～8℃避光放置，但不能超过24 h。

1.3.2 结果判定标准:阳性:FluA、FluB、ADV、PIV、RSV抗原与血清IgM抗体结合后细胞质、细胞核或细胞膜出现苹果绿色荧光(在PIV、RSV与IgM抗体结合后的细胞中可能同时观察到着色的合胞);CP、LP、Cb与IgM抗体结合后的整个细胞呈现苹果绿色荧光;MP与阳性血清结合后在细胞外围呈现苹果绿色荧光。阴性:CP、LP和Cb与IgM抗体结合后整个细胞无荧光，MP、FluA、FluB、ADV、PIV 和 RSV与IgM抗体结合后的细胞呈红色。

1.4 统计学方法 应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验及Fisher确切概率法，α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 呼吸道病原体及病毒IgM抗体检测结果 488例9种呼吸道病原体及病毒IgM抗体阳性总检出率为57.0%(278/488，设定1种病原体及病毒IgM抗体阳性即算作1例)，Cb未检出，见表1。

表1 住院呼吸道感染患者呼吸道病原体及病毒IgM抗体检测结果(n=488)

2.2 呼吸道病原体及病毒IgM抗体混合感染检出情况 488例中FluA+FluB阳性9例，FluA+LP阳性11例，FluA+MP阳性7例，FluA+PIV阳性3例，FluB+MP阳性 3例，FluB+LP阳性 2例，FluB+PIV阳性2例，LP+ADV阳性3例，LP+MP阳性4例，LP+PIV阳性1例。两种及以上混合感染阳性检出率为13.9%(68/488)，其中 FluA、LP、FluB、MP合并其他病原体及病毒IgM抗体阳性分别为 36、25、20、18 例。

2.3 不同季节、病种、年龄段呼吸道病原体及病毒IgM抗体检出情况 春季和冬季FluA IgM抗体阳性检出率分别为 20.0%(40/200)、27.8%(35/126)，显著高于夏秋季，差异均有统计学意义(P＜0.01);春季LP IgM抗体阳性检出率为22.0%(44/200)高于秋季的6.0%(5/84)，差异有统计学意义(P＜0.01);其他病原体及病毒不同季节间IgM抗体阳性检出率差异无统计学意义(P＞0.05)，见表2。不同病种间呼吸道病原体及病毒IgM抗体阳性检出率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。15～65岁年龄段LP及MP IgM抗体阳性检出率分别为 19.0%(43/226)、11.9%(27/226)，高于 65～99岁年龄段的 10.7%(28/262)、6.1%(16/262)，差异均有统计学意义(P＜0.05)，两年龄段其余病原体及病毒IgM抗体阳性检出率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表4。

表2 住院呼吸道感染患者不同季节呼吸道病原体及病毒IgM抗体阳性检出结果

表3 不同病种住院呼吸道感染患者呼吸道病原体及病毒IgM抗体阳性检出结果

表4 不同年龄住院呼吸道感染患者呼吸道病原体及病毒IgM抗体阳性检出结果

注:FluA:流感病毒A，LP:嗜肺军团菌，MP:肺炎支原体，FluB:流感病毒B，PIV:副流感病毒，ADV:腺病毒，RSV:呼吸道合胞病毒，CP为肺炎衣原体;aP＜0.05

3 讨论

研究表明，近年来肺炎链球菌的感染率有所下降，而呼吸道非典型病原体及病毒的感染率不断上升［1-2］。呼吸道非典型病原体及病毒致病性强、传播快、起病急，人群不易形成持久免疫力，临床特征缺乏特异性，容易造成抗生素的滥用，给疾病的诊治及防控造成了一定的困难［3］。因而，快速高效地检出呼吸道非典型病原体及病毒对疾病的及时诊治及疫情报告有重要意义。

呼吸道非典型病原体及病毒的检测方法包括病原体的分离和培养、血清学检测和聚合酶链反应(PCR)等方法，但上述方法由于检测时间长、操作复杂、设备昂贵等缺点而导致病原诊断延迟。本研究采用IIF检测9种呼吸道病原体及病毒IgM抗体，该法可对血清中反映新近发生感染的急性期IgM抗体进行定性检测［4］，具有检测快速、操作简便、准确性高、检测范围广、利于早期发现且价格低廉等优点［5］。本研究结果显示，488例9种呼吸道病原体及病毒IgM抗体阳性总检出率高达57.0%，以FluA IgM抗体阳性检出率最高，其次为LP、MP、FluB，高于刘又宁等［6］2004年进行的一项呼吸道病原学调查结果。考虑此次检测对象并不能排除有IgM抗体长期携带者，因有相关研究报道部分呼吸道感染患者产生的IgM抗体可持续存在1年或更长时间［7］。本研究488例中存在一定比例的混合感染，以FluA、LP、FluB、MP合并其他病原体及病毒最为多见，再度证明了FluA、LP和MP是呼吸道感染的主要病原［8-9］，混合感染是其特点［10-12］，提示临床医师应当重视非典型病原体及病毒在成人呼吸道感染中的危害。

本研究结果显示，FluA IgM抗体在春季和冬季的阳性检出率均显著高于夏秋季节;而春季LP IgM抗体阳性检出率高于秋季，与文献［13］报道不太相符。本研究结果还显示，呼吸道非典型病原体及病毒在15～65岁年龄段患者中LP及MP IgM抗体阳性检出率较高，与智霞萍等［14］调查结果一致。提示呼吸道非典型病原体及病毒的分布与患者检测季节、年龄密切相关，与近年流感流行的季节相符。上述结果对呼吸道感染患者的临床经验性治疗有着重要的指导意义。

综上所述，呼吸道非典型病原体及病毒为呼吸道感染的重要病原，其混合感染不容忽视，此外还应重视季节、年龄、环境等因素对呼吸道非典型病原体及病毒分布的影响。

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