蒙药漏芦花中黄酮类化合物的研究

吴吉英，白玉霞，斯日棍其其格

内蒙古民族大学蒙医药学院，通辽 028300

蒙药漏芦花，蒙药名为洪古日朱勒，为菊科植物祁州漏芦Rhaponticum uniflorum (L.)DC.的干燥头状花序。在蒙医临床中有较长的使用历史，具有杀“粘”，止刺痛，清热，解毒，解表等功能;用于肠刺痛，瘟热，发症，结喉，麻疹，毒热，心热，血热，炽热，新陈热，伤热等病症［1］。洪古日朱勒主要分布在东北，华北地区及朝鲜，俄罗斯，蒙古国等地［2］，生于草甸、山石缝间，细筋状的根多分枝，叶片有似玛瑙锯齿，铺扑在地上，花小，无气味，味苦，坚硬，茎中空具纵棱［3］。采集于夏季初除去总苞皮并储藏阴凉干燥处［4］。目前国内外专家和学者对漏芦花化学成分研究报道［5-10］较少，初步确认其中含有黄酮、挥发油、植物甾醇、萜类、单糖等成分。为进一步探明漏芦花药效物质基础，本实验对其黄酮类化合物进行了研究，分离并鉴定了10个化合物，它们分别为:5，7，3'-三羟基-6，4'-二甲氧基黄酮(1)、5，7，3'-三羟基-4'-甲氧基黄酮(2)、芹菜素(3)、木犀草素(4)、槲皮素(5)、木犀草素-7-O-α-D -葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-α-D -鼠李糖苷(7)、芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸甲酯苷(8)、芦丁(9)、芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸苷(10)。

1 仪器与材料

核磁共振谱采用Bruker ARX-600 型核磁共振谱仪测定(德国Bruker 公司)。半制备高效液相色谱仪(LC6-AD 输液泵，SPD-10Avp 检测器，SCL-10Avp 工作站)。大孔树脂(天津市光复精细化工研究所)。氘代试剂为Cambridge Isotope Laboratories，InC。柱色谱试剂均为分析纯。

漏芦花采集于内蒙古锡林郭勒乌珠穆沁旗，由内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药生药学教研室主任布和巴特尔教授鉴定为菊科植物祁州漏芦Rhaponticum uniflorum (L.)DC.的干燥头状花序。漏芦花Rhaponticum uniflorum (L.)DC.标本保存于内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药化学教研室。

2 提取分离

漏芦花1.4 kg，用80%乙醇31.5 L 回流提取三次，每次3 h，合并提取液，减压回收乙醇，得总提取物约163.5 g。提取物加水适量，搅拌成混悬液，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取部分26 g，加水溶解，转移置1000 mL 容量瓶，再用水至刻度，混匀，即得上柱样品溶液。将处理好的D101树脂200 g，装柱，吸取上柱样品溶液，上柱，以2 mL/min 的流速进行吸附，先用水洗至流出液不显molish 反应，依次用20%、40%、60%、80%乙醇溶液各2000 mL 洗脱，洗脱液编号为流份A-D，减压回收至干，分别得到流份A 为3.50 g、流份B为7.82 g、流份C 为8.88 g 和流份D 为2.01 g。流份D500 mg，加色谱甲醇50 mL 溶解，溶液过滤，经反相制备HPLC，甲醇-水(45∶55)洗脱，得化合物1(13 mg)、化合物2(22 mg)和化合物3(16 mg)化合物4(18 mg);流份C 200 mg，加色谱甲醇20 mL 溶解，溶液过滤，经反相制备HPLC，甲醇-水(39∶61)洗脱，得化合物5(35 mg)和化合物10(42 mg);流份B 500 mg，加色谱甲醇50 mL 溶解，溶液过滤，经反相制备HPLC，甲醇-水(31∶69)洗脱，得化合物6(21 mg)、化合物7(16 mg)和化合物8(27 mg)化合物9(12 mg);

3 结构鉴定

化合物1 黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.52 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.91 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.49 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.51 (1H，s，H-8)，6.93(1H，s，H-3)，13.01 (1H，s，5-OH)，3.89 (3H，s，-OCH3)，3.74 (3H，s，-OCH3)。13C NMR(DMSO-d6)δ:164.5 (C-2)，103.7 (C-3)，180.8 (C-4)，152.4(C-5)，130.8 (C-6)，156.2 (C-7)，91.8 (C-8)，153.6 (C-9)，101.9 (C-10)，121.3 (C-1')，112.3(C-2')，146.3 (C-3')，148.8 (C-4')，115.9 (C-5')，119.8(C-6')。据以上数据并与文献［11］对照，鉴定该化合物为5，7，3'-三羟基-6'，4'-二甲氧基黄酮。

化合物2 黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.51 (1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，6.95 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，7.50 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.47 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.87 (1H，s，H-3)，13.04 (1H，s，5-OH)，3.86 (3H，s，-OCH3)。13C NMR(DMSO-d6)δ:163.6 (C-2)，104.0 (C-3)，180.9 (C-4)，155.4 (C-5)，98.8 (C-6)，164.2 (C-7)，93.8 (C-8)，161.6 (C-9)，102.8 (C-10)，119.8(C-1')，112.9 (C-2')，146.5 (C-3')，150.6 (C-4')，111.9 (C-5')，121.5(C-6')。据以上数据并与文献［11］对照，鉴定该化合物为5，7，3'-三羟基-4'-甲氧基黄酮。

化合物3 黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.91 (2H，d，J=7.2 Hz，H-2'，6')，6.91 (2H，d，J=7.2 Hz，H-3'，5')，6.49 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.18 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.88 (1H，s，H-3)，12.95 (1H，s，5-OH)，10.65(2H，s，7，4'-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:157.4 (C-2)，103.7 (C-3)，181.8 (C-4)，163.8 (C-5)，98.9(C-6)，164.2 (C-7)，94.0 (C-8)，161.2 (C-9)，102.9 (C-10)，121.2 (C-1')，128.5 (C-2')，116.0(C-3')，161.3 (C-4')，116.0 (C-5')，128.5(C-6')。据以上数据并与文献［12］对照，鉴定该化合物为芹菜素。

化合物4 黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.38 (1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，6.91 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，7.43 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.48 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.63 (1H，s，H-3)，12.24 (1H，s，5-OH)，10.20 (1H，s，7-OH)，9.65 (2H，s，3'，4'-OH)。据以上数据并与文献［12］对照，鉴定该化合物为木犀草素。

化合物5 黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.51 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.79 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.61 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.28 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.07 (1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，12.29 (1H，s，5-OH)。据以上数据并与文献［12］对照，鉴定该化合物为木犀草素。

化合物6 黄色粉末(甲醇)，盐酸-镁粉反应为阳性，Molish 反应为阳性，提示该化合物为一黄酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.47 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.89 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.43 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.75 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.41 (1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.89(1H，s，H-3)，12.98 (1H，s，5-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:164.1 (C-2)，103.1 (C-3)，182.3 (C-4)，163.5 (C-5)，99.4 (C-6)，161.2 (C-7)，94.5 (C-8)，157.6 (C-9)，103.5 (C-10)，121.7 (C-1')，111.7 (C-2')，145.7 (C-3')，150.4 (C-4')，116.1(C-5')，117.6 (C-6')。糖的碳信号δ:98.1 (C-1″)，72.0 (C-2″)，73.7 (C-3″)，70.4 (C-4″)，71.9(C-5″)及60.9 (C-6″)，提示该糖是葡萄糖，并且在1H NMR 谱中给出了端基质子信号δ 5.21 (1H，d，J=3.6 Hz)，显示为α 糖苷键。在NOESY 谱中端基质子信号δ 5.21 (1H，d，J=4.2 Hz)与δ 6.41(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)和6.75 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)相关，说明葡萄糖连接在木犀草素的7(位。将核磁数据进行归属后与文献［13］对照基本一致，鉴定为木犀草素-7-O-α-D-葡萄糖苷。

化合物7 黄色粉末(甲醇)，盐酸-镁粉反应为阳性，Molish 反应为阳性，提示该化合物为一黄酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.28 (1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6')，6.99 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.33 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.41 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.22 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，12.70 (1H，s，5-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:157.4(C-2)，134.3 (C-3)，177.8 (C-4)，161.4 (C-5)，98.9 (C-6)，164.5 (C-7)，93.8 (C-8)，156.6 (C-9)，104.2 (C-10)，120.8 (C-1')，115.8 (C-2')，145.3 (C-3')，148.6 (C-4')，115.6 (C-5')，121.2 (C-6')。糖的碳信号δ:101.9 (C-1″)，70.7 (C-2″)，70.5 (C-3″)，71.3 (C-4″)，70.1 (C-5″)及17.6 (C-6″)，提示该糖是吡喃鼠李糖，并且在1H NMR 谱中给出了端基质子信号δ 5.28 (1H，d，J=2.4 Hz)，显示为α 糖苷键。在HMBC 谱中端基质子信号δ 5.28 (1H，d，J=2.4 Hz)与δ 134.3 (C-3)相关，说明吡喃鼠李糖连接在槲皮素的3 位。根据该化合物核磁数据分析鉴定为槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷。

化合物8 黄色粉末(甲醇)，盐酸-镁粉反应为阳性，Molish 反应为阳性，提示该化合物为一黄酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.94 (2H，d，J=7.8 Hz，H-2'，6')，6.93 (2H，d，J=7.8 Hz，H-3'，5')，6.85 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.46 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.85 (1H，s，H-3)，12.65 (1H，s，5-OH)，10.48 (1H，s，4'-OH)，5.30 (1H，d，J=3.6 Hz，端基质子信号)。13C NMR(DMSO-d6)δ:161.4(C-2)，103.2 (C-3)，182.1 (C-4)，161.3 (C-5)，99.3 (C-6)，162.5 (C-7)，94.7 (C-8)，157.0 (C-9)，105.6 (C-10)，126.1 (C-1')，128.7 (C-2')，116.1 (C-3')，164.1 (C-4')，116.1 (C-5')，128.7 (C-6')。糖的碳信号δ:99.1 (C-1″)，75.5 (C-2″)，75.2 (C-3″)，75.1 (C-4″)，72.1 (C-5″)，169.2 (C-6″)，52.1 (-CH3)。在HMBC 谱中，δ 3.71 (3H，s)与169 (C-6″)相关，提示该糖是葡萄糖醛酸甲酯，并且在1H NMR 谱中给出了端基质子信号δ 5.30(1H，d，J=3.6 Hz)，显示为α 糖苷键。在HMBC谱中端基质子信号δ 5.30 (1H，d，J=3.6 Hz)与δ162.5 (C-7)相关，说明葡萄糖醛酸甲酯连接在芹菜素的7 位。根据该化合物核磁数据分析鉴定为芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸甲酯苷。

化合物9 黄色粉末(甲醇)，盐酸-镁粉反应为阳性，Molish 反应为阳性，提示该化合物为一黄酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:12.65 (1H，s，5-OH)，10.27 (1H，s，7-OH)，5.37 (1H，brs 葡萄糖的端基氢)，5.15 (1H，brs 鼠李糖的端基氢)，6.20 (1H，s，H-6)，6.41 (1H，s，H-8)，6.88 (1H，brs，H-5')，7.54(2H，brs，H-6'，2')。13C NMR(300MHz DMSO-d6)δ:157.7 (C-2)，134.1 (C-3)，177.5 (C-4)，161.3 (C-5)，99.1 (C-6)，161.8 (C-7)，94.2 (C-8)，156.7(C-9)，104.7 (C-10)，121.6 (C-1')，115.8 (C-2')，145.8 (C-3')，149.4 (C-4')，116.5 (C-5')，121.1(C-6')。以上数据与文献［14］报道一致，且与芦丁对照品共TLC 鉴别，Rf值相同，故确定该化合物为芦丁。

化合物10 黄色粉末(甲醇)，盐酸-镁粉反应为阳性，Molish 反应为阳性，提示该化合物为一黄酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.93 (2H，d，J=7.8 Hz，H-2'，6')，6.91 (2H，d，J=7.8 Hz，H-3'，5')，6.85 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.45 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.83 (1H，s，H-3)，12.60 (1H，s，5-OH)，10.41 (1H，s，4'-OH)，5.27 (1H，d，J=3.6 Hz，端基质子信号)。13C NMR(DMSO-d6)δ:161.2(C-2)，103.3 (C-3)，181.8 (C-4)，161.1 (C-5)，99.3 (C-6)，162.3 (C-7)，94.5 (C-8)，157.2 (C-9)，105.3 (C-10)，126.0 (C-1')，127.5 (C-2')，116.3 (C-3')，163.9 (C-4')，116.3 (C-5')，127.5 (C-6')。糖的碳信号δ:99.7 (C-1″)，75.1 (C-2″)，74.9 (C-3″)，74.5 (C-4″)，72.0 (C-5″)，171.0 (C-6″)。化合物10 的1H NMR 和13C NMR 与化合物8基本一致，不同点是化合物10 中没有甲基(δ52.1)的碳信号，并且在1H NMR 谱中给出了端基质子信号δ 5.27 (1H，d，J=3.6 Hz)，显示为α 糖苷键。在HMBC 谱中端基质子信号δ 5.27 (1H，d，J=3.6 Hz)与δ162.3 (C-7)相关，说明葡萄糖醛酸连接在芹菜素的7 位。根据该化合物核磁数据分析鉴定为芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸苷。

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