降香中的酚性化合物

王 昊，梅文莉，杨德兰，钟惠民，戴好富*

1青岛科技大学化学与分子工程学院，青岛 266042;2 中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室;3 海南省黎药资源天然产物研究与利用重点实验室，海口 571101

降香(Dalbergia odorifera)是豆科(Leguminosae)檀属(Dalbergia)植物降香檀(Dalbergia odorifera T.Chen)的树干和根的干燥心材，为传统中药，具有行气活血、止痛、止血的功效，用于脘腹疼痛、肝郁胁痛、胸痹刺痛、跌扑损伤、外伤出血［1］。降香檀原产海南，为海南特有植物，分布于白沙、东方、乐东和三亚等地。其心材降香主要含挥发油和黄酮类化合物。目前对降香挥发油及黄酮类成分的生理活性研究较多，其挥发油具有抗凝血、抗血栓、抗心肌缺血、抗菌等活性;其黄酮类化合物具有舒张血管、降血脂、抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抑制破骨细胞功能下降等活性［2-10］。本实验对降香进行化学成分的研究，从中分离得到10个酚性化合物，运用波谱学方法分别鉴定为dalbergin (1)，7-O-methylvestitol (2)，syringaresinol (3)，2'，4'-dimethoxy-3，7-dihydroxyisoflavanone (4)，3'-hydroxy-8-methoxyvestitol (5)，2'，6-dihydroxy-4'-methoxy-2-arylbenzofuran (6)，3'-O-methylviolanone (7)，pinocembrin (8)，prunetin(9)和mucronulatol (10)。本次研究仅对化合物1进行乙酰胆碱酯酶抑制的活性测试，化合物2～5 首次从该植物中分离得到。结果表明，化合物1 为降香提取物的主要成分(含量占总提物0.28%)，具有乙酰胆碱酯酶抑制活性，研究结果为进一步开发和利用降香提供科学依据。

1 仪器与材料

NMR 采用Brucker AV-500 型超导核磁仪(TMS内标，瑞士Bruker 公司);MS 采用Autospec-3000 质谱仪;薄层色谱硅胶板、柱色谱硅胶(200～300 目，60～80 目)均为青岛海洋化工厂产品;Sephadex LH-20 为Merck 公司产品;乙酰胆碱酯酶、碘化硫代乙酰胆碱、DTNB、他克林均购自Sigma;酶标仪为PE公司EnVision。

降香心材于2010 年10 月购自海南省海口市农贸市场，样品标本(No.20101009)经中国热带农业科学院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴定为Dalbergia odorifera T.Chen，并存放于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。

2 提取和分离

干燥并粉碎后的降香心材(8.4 kg)用体积分数为95%的乙醇室温浸提三次，每次7 d，过滤得提取液。提取液经减压浓缩回收乙醇得到乙醇浸膏。乙醇浸膏用水分散后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯部分477 g 先采用硅胶(200～300目)减压柱，以氯仿-甲醇(1∶0～0∶1)梯度洗脱，得18个流分(Fr.1-Fr.18)。Fr.3 以石油醚-丙酮(100∶1～1∶1)梯度洗脱共接收110个流分，流分54～105 结晶得化合物1(2.5 g);流分48～50 先过凝胶Sephadex-LH20(氯仿-甲醇1 ∶1)柱色谱，然后上硅胶柱(200～300 目)，石油醚-氯仿(8∶2)洗脱得化合物2(3.0 mg)。Fr.6 采用硅胶H 减压柱，以石油醚-丙酮(50∶1～0∶1)梯度洗脱得128个流分。流分经TLC 检测合并后均先过过凝胶Sephadex-LH20(氯仿-甲醇1 ∶1)柱色谱。流分111～113 上硅胶柱(200～300 目)，石油醚-乙酸乙酯(3∶2)洗脱，结晶得化合物3(40.2 mg)。流分100～104 上硅胶柱(200～300 目)，氯仿-甲醇(60∶1)洗脱，结晶得化合物4(10.1 mg)。流分91-92 结晶得化合物5(20.3 mg)。流分82-86 结晶得化合物10(17.3 mg)，母液上硅胶柱(200～300 目)，氯仿-甲醇(100∶1)洗脱，结晶得化合物6(20.2 mg)。流分73～77 结晶得化合物7(10.1 mg)。流分43～46 上硅胶柱(200～300 目)，氯仿-甲醇(100∶1)洗脱得化合物8(15.3 mg)。流分56～60 结晶得化合物9(12.2 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 棕色晶体;ESI-MS m/z:267.0 ［MH］-，分子式为C16H12O4。1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:9.45 (1H，s，-OH)，7.57 (3H，m，H-2'，4'，6')，7.50 (2H，m，H-3'，5')，7.11 (1H，s，H-8)，6.82 (1H，s，H-5)，6.19 (1H，s，H-3)，3.89 (3H，s，7-OMe);13C NMR (DMSO-d6，125 MHz)δ:160.5(C-2)，155.2 (C-4)，152.0 (C-7)，148.5 (C-9)，143.7 (C-6)，135.4(C-1')，129.6 (C-4')，128.9(C-3'，5')，128.4 (C-2'，6')，111.4 (C-3)，111.0(C-10)，110.5 (C-5)，100.6 (C-8)，56.3 (C-7-OMe)。以上波谱数据与文献［11］对照基本一致，故鉴定为dalbergin。

化合物2 黄色粉末;ESI-MS m/z:309.2［M +Na］+，分子式为C17H18O4。1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:7.02 (1H，d，J=8.3 Hz，H-6')，6.93(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.48 (1H，d，J=2.4 Hz，H-3')，6.45 (1H，dd，J=8.3，2.4 Hz，H-5')，6.39 (1H，dd，J=8.2，2.5 Hz，H-6)，6.35 (1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，4.29 (1H，ddd，J=10.3，3.4，2.0 Hz，H-2a)，4.0 (1H，t，J=10.3 Hz，H-2b)，3.80 (6H，s，7，4'-OMe)3.55 (1H，m，H-3)，2.97(1H，dd，J=15.5，10.8 Hz，H-4a)，2.85 (1H，ddd，J=15.7，5.2，1.7Hz，H-4b);13C NMR (CDCl3，125 MHz)δ:159.8 (C-2')，158.4 (C-4')，155.3 (C-7)，155.0 (C-9)，130.5 (C-5)127.7 (C-6')，122.0(C-1')，114.9 (C-10)，108.0 (C-6)，104.3 (C-5')，103.3 (C-8)，98.8 (C-3')，70.3 (C-2)，55.5 (C-4'，7-OMe)，31.7 (C-3)，30.5 (C-4)。以上波谱数据与文献［12］对照基本一致，故鉴定为7-O-methylvestitol。

化合物3 无色晶体;ESI-MS m/z:441.2［M +Na］+，分子式为C22H26O8。1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:8.20 (2H，s，-OH)，6.50 (4H，s，H-2，6，2'，6')，4.51 (2H，d，J=4.0 Hz，H-7，7')，4.06 (2H，m，H-9a，9'a)，3.67 (2H，m，H-9b，9'b)，3.65 (12H，s，3，5，3'，5'-OMe)，2.95 (2H，m，H-8，8');13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ:148.0 (C-3，5，3'，5')，134.9 (C-4，4')，131.5 (C-1，1')，103.7 (C-2，6，2'，6')，85.4 (C-7，7')，71.2 (C-9，9')，56.1 (C-3，5，3'，5')，53.8(C-8，8')。以上波谱数据与文献［13］对照基本一致，故鉴定为syringaresinol。

化合物4 白色粉末;ESI-MS m/z:339.1［M +Na］+，结合NMR 谱和ESI-MS 数据推断分子式为C17H16O6。1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:7.81 (1H，d，J=8.7 Hz，H-5)，7.37 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，6.51 (1H，dd，J=8.7，2.2 Hz，H-6)，6.45(1H，dd，J=8.7，2.4 Hz，H-5')，6.44 (1H，d，J=2.3 Hz，H-3')，6.32 (1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，4.80(1H，d，J=11.8 Hz，H-2a)，4.26 (1H，d，J=11.8 Hz，H-2b)，3.74 (3H，s，H-2'-OMe)，3.67 (3H，s，H-4'-OMe);13C NMR (CDCl3，125 MHz)δ:191.9 (C-4)，163.4 (C-7)，163.2 (C-9)，161.4 (C-4')，158.2(C-2')，130.2 (C-5)，128.6 (C-6')，119.1 (C-1')，113.6 (C-10)，111.3 (C-6)，104.8 (C-5')，103.4(C-8)，99.8 (C-3')，74.3 (C-3)，73.8 (C-2)，55.7(C-2'-OMe)，55.5 (C-4'-OMe)。根据HMBC 信号，δH7.81 (1H，d，J=8.7 Hz，H-5)与δC191.9 (C-4)相关，表明氢在C-5 上;从δH7.37 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6')与δC74.3 (C-3)相关，且在ROESY 上与δH4.80 (1H，d，J=11.8 Hz，H-2a)有NOE 效应，表明氢在C-6'上。通过偶合常数可以判断芳环上的取代位置为C-7，2'，4'。由HMBC 上δH3.74 (3H，s，H-2'-OMe)与δC158.2 (C-2')相关，δH3.67 (3H，s，H-4'-OMe)与δC161.4 (C-4')相关，而δH7.37 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6')分别与δC158.2 (C-2')和δC161.4 (C-4')相关，在ROESY 上观察到δH3.67(3H，s，H-4'-OMe)和δH3.74 (3H，s，H-2'-OMe)与δH6.44 (1H，d，J=2.3 Hz，H-3')的NOE 效应，表明C-2'，4'被甲氧基取代而C-7 被羟基取代。以上可以鉴定化合物结构为3，7-dihydroxy -2'，4'-dimethoxyisoflavanone。

化合物5 白色粉末;ESI-MS m/z:341.1［M +Na］+，结合NMR 谱和ESI-MS 数据推断分子式为C17H18O6。1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:8.78(1H，s，7-OH)，8.48 (1H，s，3'-OH)，8.37 (1H，s，2'-OH)，6.47 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.39 (1H，d，J=8.6 Hz，H-6')，6.28 (1H，d，J=8.6 Hz，H-5')，6.20 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，4.30 (1H，dd，J=15.2，4.3 Hz，H-4a)，4.09 (1H，ddd，J=10.2，3.06，1.89 Hz，H-2a)，3.77 (1H，dd，J=10.2，10.2 Hz，H-2b)，3.59 (3H，s，H-4'-OMe)，3.51 (3H，s，H-8-OMe)，3.18 (1H，m，H-3)，2.75 (1H，dd，J=15.6，11.0 Hz，H-4b);13C NMR (DMSO-d6，125 MHz)δ:148.8 (C-7)，147.9 (C-9)，147.3 (C-4')，144.0 (C-2')，135.7 (C-8)，133.8 (C-3')，123.8(C-5)，121.0 (C-1')，116.6 (C-6')，114.3 (C-10)，108.3 (C-6)，103.1 (C-5')，69.4 (C-2)，60.0 (C-8-OMe)，55.9 (C-4'-OMe)，31.4 (C-3)，30.1 (C-4)。根据HMBC 信号，δH6.47 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5)与δC30.1 (C-4)相关，表明氢连接在C-5;δH6.39 (1H，d，J=8.6 Hz，H-6')与δC31.4 (C-3)相关，且δH3.18 (1H，m，H-3)与δC116.6 (C-6')相关表明氢连接在C-6'。通过偶合常数可以确定δH6.28 (1H，d，J=8.6 Hz，H-5')连接在C-5'，δH6.20(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)连接在C-6。在ROESY上观察到δH6.28 (1H，d，J=8.6 Hz，H-5')与δH3.59 (3H，s，H-4'-OMe)的NOE 效应表明C-4'连接甲氧基;δH6.20 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6)与δH8.78(1H，s，7-OH)有NOE 效应，而δH8.78 (1H，s，7-OH)与δH3.51 (3H，s，H-8-OMe)有NOE 效应，表明C-8 连接甲氧基。以上可以鉴定化合物结构为3'-hydroxy-8-methoxyvestitol。

化合物6 白色粉末;1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:10.4 (1H，s，-OH)，9.50 (1H，s，-OH)，7.69 (1H，d，J=8.6 Hz，H-4)，7.36 (1H，d，J=8.3，H-6')，7.11 (1H，s，H-3)，6.92 (1H，br.s，H-3')，6.70 (1H，dd，J=8.3，2.0 Hz，H-5')，6.55(1H，d，J=2.4 Hz，H-7)，6.53 (1H，dd，J=8.6，2.4 Hz，H-5)，3.74 (3H，s，4'-OMe);13C NMR (DMSO-d6，125 MHz)δ:159.9 (C-2)，155.5 (C-7a)，155.2 (C-6)，154.2 (C-4')，151.2 (C-2')，126.7(C-4)，121.6 (C-1')，120.8 (C-6')，112.0 (C-5')，110.7 (C-3a)，105.3 (C-5)，103.5 (C-3)，101.8

(C-7)，97.4 (C-3')，55.2 (C-4'-OMe)。以上波谱数据与文献［14］对照基本一致，故鉴定为2'，6-dihydroxy-4'-methoxy-2-arylbenzofuran。

化合物7 无色晶体;1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:7.68 (1H，d，J=8.6 Hz，H-5)，6.84 (1H，d，J=8.5 Hz，H-6')，6.74 (1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.53 (1H，dd，J=8.5，2.2Hz，H-6)，6.35(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，4.50 (1H，dd，J=11.2，11.2 Hz，H-2a)，4.44 (1H，dd，J=11.2，5.5 Hz，H-2b)，4.14 (1H，dd，J=11.6，5.5 Hz，H-3)，3.77 (3H，s，3'-OMe)，3.73 (3H，s，2'-OMe)3.70(3H，s，4'-OMe);13C NMR (DMSO-d6，125 MHz)δ:190.6 (C-4)，164.5 (C-7)，163.4 (C-9)，153.1 (C-4')，151.6 (C-2')，141.8 (C-3')，129.1 (C-5)，124.6 (C-1')，121.8 (C-6')，114.0 (C-10)，110.8(C-6)，107.8 (C-5')，102.5 (C-8)，70.7 (C-2)，60.6 (C-2'-OMe)，60.3 (C-4'-OMe)，55.9 (C-3'-OMe)，47.4 (C-3)。以上波谱数据与文献［11］对照基本一致，故鉴定为3'-O-methylviolanone。

化合物8 白色晶体;1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:12.1 (1H，s，-OH)，10.8 (1H，s，-OH)，7.53 (2H，d，J=6.0 Hz，H-2'，6')，7.44 (2H，t，J=6.0 Hz，H-3'，5')，7.39 (1H，t，J=6.0 Hz，H-4')，5.94 (1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，5.91 (1H，d，J=2.2 Hz，H-6)，5.58 (1H，dd，J=12.6，3.0，H-2)，3.26 (1H，dd，J=17.1，12.6 Hz，H-2a)，2.80(1H，dd，J=17.1，3.0 Hz，H-3b);13C NMR (DMSO-d6，125 MHz)δ:196.0 (C-4)，166.8 (C-7)，163.6 (C-5)，162.8 (C-9)，138.8 (C-1')，128.6(C-3'，4'，5')，126.1 (C-2'，6')，101.9 (C-10)，96.0(C-6)，95.1 (C-8)，78.5 (C-2)，42.2 (C-3)。以上波谱数据与文献［11］对照基本一致，故鉴定为pinocembrin。

化合物9 浅黄色粉末;1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:12.9 (1H，s，-OH)，8.35 (1H，s，H-2)，7.49 (2H，d，J=8.4 Hz，H-2'，6')，6.99 (1H，d，J=8.4 Hz，H-3'，5')，6.39 (1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.23 (1H，d，J=1.5 Hz，H-6)，3.79 (3H，s，7-OMe);13C NMR (DMSO-d6，125 MHz)δ:180.2 (C-4)，164.4 (C-7)，162.1 (C-5)，159.2 (C-4')，157.7(C-9)，154.3 (C-2)，130.3 (C-2'，6')，123.0 (C-3)，122.1 (C-1')，113.8 (C-3'，5')，104.6 (C-10)，99.1 (C-6)，93.8 (C-8)，55.2 (C-7-OMe)。以上波谱数据与文献［11］对照基本一致，故鉴定为prunetin。

化合物10 白色粉末;1H NMR (DMSO-d6，500 MHz)δ:9.22 (1H，s，-OH)，8.66 (1H，s，-OH)，6.86 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.68 (1H，d，J=8.6 Hz，H-5')，6.59 (1H，d，J=8.6 Hz，H-6')，6.29 (1H，dd，J=8.2，2.3 Hz，H-6)，6.20 (1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，4.10 (1H，dt，J=10.2，2.1 Hz，H-2a)，3.89 (1H，t，J=10.2 Hz，H-2b)，3.75(3H，s，4'-OMe)3.72 (3H，s，2'-OMe)，3.31 (1H，m，H-3)，2.81 (1H，dd，J=15.5，11.2 Hz，H-4a)，2.73 (1H，dd，J=15.6，3.7 Hz，H-4b);13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ:156.6 (C-7)，154.6 (C-9)，147.8 (C-2')，146.1 (C-4')，139.4 (C-3')，130.2 (C-5)，127.0 (C-1')，116.3 (C-6')，112.8(C-10)，108.1 (C-6)，107.6 (C-5')，102.6 (C-8)，69.8 (C-2)，60.4 (C-2'-OMe)，56.0 (C-4'-OMe)，31.4 (C-3)，31.0 (C-4)。以上波谱数据与文献［15］对照基本一致，故鉴定为mucronulatol。

4 乙酰胆碱酯酶抑制的活性测试

采用Ellman 方法［16］测定样品的乙酰胆碱酯酶抑制活性。在96 孔酶标板中依次加入110 μL PBS(0.1M pH=8.0)，10 μL 样品溶液(1.0 mg/mL，DMSO)，40 μL AChE (0.10 U/mL，pH=8.0 PBS溶解稀释)。4 ℃孵育20 min 后，加40 μL DTNB(6.25 Mm)和碘化硫代乙酰胆碱(6.25 mM)的等体积混合液。30 ℃孵育20 min 后，用酶标仪在405 nm 下测定其吸光度值。

抑制率的计算公式:抑制率={［A对照-(A样品-A空白)］/A对照}×100%，其中，对照组用10 μL DMSO 代替10 μL 样品溶液;空白组用10 μL DMSO代替10 μL 样品溶液，再用40 μL PBS 代替40 μL AChE。实验以他克林为阳性对照，所有实验重复3 次。

化合物1(50 μg/mL)对乙酰胆碱酯酶抑制率为30.36%，阳性对照他克林(0.08 (g/mL)对乙酰胆碱酯酶的抑制率为72.40%。实验表明化合物1具有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性。

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