HPLC法测定丹栀逍遥散中栀子苷的含量

姜 勇（四川资中县人民医院，四川资中 641200）

HPLC法测定丹栀逍遥散中栀子苷的含量

姜 勇＊（四川资中县人民医院，四川资中 641200）

目的：建立测定丹栀逍遥散中栀子苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为AgilentTC-C18，流动相为乙腈-水（15∶85，V/V），检测波长为238 nm，流速为1.0m l/min，柱温为30℃，进样量为10μl。结果：栀子苷检测质量浓度在0.51～16.32 μg/m l范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.999 5）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2.30%；平均加样回收率为99.40%，RSD＝1.99%（n＝9）。结论：该方法简单、准确、重复性好，可用于丹栀逍遥散中栀子苷的含量测定。

丹栀逍遥散；栀子苷；高效液相色谱法；含量测定

丹栀逍遥散又叫八味逍遥散，是调和肝脾剂，出自《内科摘要》，是在《太平惠民和剂局方》中所载的“逍遥散”的基础上加丹皮、栀子二药制成，具有疏肝解郁、健脾和营、兼清郁热之功效[1-2]。主要用于肝郁血虚、内有郁热证，如潮热晡热、烦躁易怒，或自汗盗汗，或头痛目涩，或颊赤口干，或月经不调、少腹胀痛，或小便涩痛、舌红苔薄黄、脉弦虚数等[3-5]。目前，关于丹桅逍遥散中桅子苷含量测定的报道较少，故笔者参考相关文献[6-14]，采用高效液相色谱（HPLC）法对其中栀子苷的含量进行测定，以为更好地控制其产品质量提供科学依据。

1 材料

1200型HPLC仪，包括G1379A真空脱气泵、G1313A自动进样器、G1311A四元泵、G1316A柱温箱、G1315B二极管阵列检测器（美国安捷伦公司），78HW-1恒温磁力搅拌器（江苏金坛市中大仪器厂）；KQ-50B超声波发生器（昆山市超声仪器有限公司）；BS224S电子天平（德国赛多利斯公司）。

栀子苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110749-201102）；丹栀逍遥散（四川省中医药研究院，批号：20121209、20121211、20121213）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水（15∶85，V/V）；流速：1.0m l/m in；检测波长：238 nm；柱温：30℃；进样量：10μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液 精密称取栀子苷对照品0.001 02 g，置于50m l量瓶中，加入70%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1m l含0.020 4mg的栀子苷对照品溶液。

2.2.2供试品溶液 称取丹栀逍遥散粉末约0.4 g，置于50m l量瓶中，加入70%甲醇溶液50m l，超声处理30min（功率：150 W，频率：40 kHz），摇匀，用0.45μm孔径微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 按丹栀逍遥散的处方制备不含栀子药材的阴性样品，再按“2.2.2”项下方法进行处理，即得阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

按“2.1”项下色谱条件，分别量取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl进样测定，记录色谱，详见图1。结果，供试品溶液中栀子苷峰保留时间与对照品溶液中栀子苷峰保留时间一致，且与相邻杂质峰分离度较好；阴性对照溶液在栀子苷峰相应位置处无吸收峰，说明其对含量测定无干扰。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.栀子苷Fig 1 HPLC chromatogram sA.substance control；B.test sample；C.negative control；1.geniposide

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下对照品溶液0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00m l，分别置于20m l量瓶中，加入70%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，每个浓度进样10μl，记录色谱。以峰面积（y）为纵坐标，检测质量浓度（x）为横坐标，进行线性回归，得回归方程y＝258.63x+89.02（r＝0.999 5）。结果表明，栀子苷检测质量浓度在0.51～16.32μg/m l范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液10μl，重复进样6次，记录栀子苷的峰面积。结果，RSD＝0.91%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：20121209）适量，分别于放置0、2、4、6、8、10、12、24 h时进样，记录栀子苷的峰面积。结果，RSD＝1.62%，表明供试品溶液在24 h内质量稳定。

2.7 重复性试验

精密称取样品（批号：20121209）5份，各约0.4 g，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定并计算栀子苷的含量。结果，RSD＝2.30%，表明本方法的重复性较好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号：20121209）9份，各约0.28 g，分别加入“2.2.1”项下对照品溶液12、16、18 m l，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.9 样品含量测定

称取3批丹栀逍遥散样品各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。取对照品溶液和3批供试品溶液各10μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，按标准曲线法以峰面积计算其中栀子苷的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（mg/g，n＝3）Tab 2 Results of content determ ination of sam p les（mg/g，n＝3）

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取栀子苷对照品溶液作紫外光谱扫描，结果可见在237.8 nm波长处有最大吸收，且在（237.8±2）nm波长范围内吸收稳定，基线较好，对测定无干扰。因此，笔者参考2010年版《中国药典》（一部）中关于栀子药材中栀子苷的检测标准中的最大吸收波长，并结合本研究，最终选用238 nm作为本试验的检测波长。

3.2 流动相的选择

参考相关文献[15-17]，笔者曾采用了不同比例的乙腈-水作为流动相。结果发现，随着流动相中乙腈的减少，栀子苷的保留时间不断延长，峰形不佳；而随着乙腈的增加，栀子苷与相邻杂质峰的分离度不断减小，当乙腈与水比例为15∶85时，栀子苷的峰形较好，且与相邻杂质峰能达到较好的分离，保留时间适中。故选择乙腈-水（15∶85，V/V）作为流动相。

3.3 超声提取方法的选择

笔者曾分别采用50%甲醇、70%甲醇、80%甲醇和水进行了超声提取。结果表明，采用70%甲醇提取时，测得栀子苷的含量较高。同时，又分别以70%甲醇超声15、30、45min进行比较。结果表明，超声30m in时，色谱中的杂质峰较少，提取效果最好，且对测定栀子苷的含量影响较小。故选择70%甲醇超声提取30m in。

综上所述，本方法简单、准确、重复性好，可用于丹栀逍遥散中栀子苷的含量测定。

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Content Determ ination of Geniposide in Danzhi Xiaoyao Powder by HPLC

JIANG Yong（Zizhong County People’s Hospital of Sichuan Province，Sichuan Zizhong 641200，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determ ination of geniposide in Danzhi xiaoyao powder. METHODS：HPLC method was adopted.The determ ination was performed on Agilent TC-C18column w ith mobile phase consisted of acetonitrile-water（15∶85，V/C）at a flow rate of 1.0m l/min.The detection wavelength was 238 nm and the column temperature was set at 30℃.The sample size was 10μl.RESULTS：The linear range of geniposide was 0.51-16.32μg/m l（r＝0.999 5）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 2.30%；average recovery was 99.40%（RSD＝1.99%，n＝9）. CONCLUSIONS：The method is simple，accurate and reproducible，and can be used for content determination of jasminoidin in Danzhi xiaoyao powder.

Danzhi xiaoyao powder；Geniposide；HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2014）12-1125-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2014.12.24

＊主管药师。研究方向：临床药学。电话：0832-5526282。E-mail：jjyy9941370@163.com

2013-12-13

2014-01-07）