肿瘤凋亡抑制因子survivin在腮腺肿瘤中的表达及临床意义

汪 鹏 沈显军 张菊红 郑海红 施更生

腮腺肿瘤是口腔颌面部较常见的肿瘤之一，约占涎腺肿瘤的80%，其良恶性的比例为(4～6)∶1［1］。腮腺肿瘤组织类型繁杂，不同类型的肿瘤生物学行为相差较大，影响着患者的愈后及生存质量。腮腺肿瘤的主要治疗手段以手术为主，对于一些恶性程度较高的肿瘤可加以适当的放化疗［2］。但是手术治疗对患者颜面部影响仍较大，也影响患者的心理健康，手术还常并发局部瘢痕、面瘫、耳颞神经综合征等，因此如何更有效地对该类肿瘤进行诊疗，值得我们进一步研究。survivin又名生存素，属于凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族成员，是迄今发现相对分子质量最小、作用最强的凋亡抑制因子之一，随后的研究表明其在多种肿瘤组织中过表达，影响着肿瘤的发生、发展及预后。本实验采用免疫组化的方法研究survivin在腮腺良恶性肿瘤的表达，报道如下。

材料与方法

1．一般材料:收集笔者医院病理科2004年11月～2012年11月间手术切除的腮腺肿瘤标本共计182例作为实验组(男性65例，女性117例;患者年龄17～89岁，平均年龄45．7岁)，其中腮腺多形性腺瘤44例，腮腺其他良性肿瘤20例，腮腺恶性肿瘤118例。另取40例肿瘤边界外1～2cm的正常腮腺组织作为对照组。所有病例术前均未接受过放、化疗等治疗。TNM分期及组织学分级均来自病历原始记载，TNM分期采用UICC(2002)标准，组织病理学分类参照WHO 2005年标准。

2．方法:所有标本均经10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片厚4μm。免疫组化采用Envision法，按试剂说明书进行操作，抗原修复采用高压锅高温修复，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封固。一抗为 survivin兔抗人单克隆抗体(YJ061908CS)，购于Abcam公司，Envision免疫组化检测试剂盒(GK500705)购自基因科技上海有限公司。用PBS代替一抗作为空白对照。

3．结果判定:survivin阳性信号为细胞质或细胞核内出现棕黄色颗粒。染色的评分方法:按阳性细胞数所占比例并参考着色的强度分为:阳性细胞数为0(-)，阳性细胞数＜25%为弱阳性(+)，阳性细胞数25% ～50%为中度阳性(++)，阳性细胞数＞50%为强阳性(+++)。

4．统计学方法:应用SPSS 18．0统计软件对实验数据进行统计处理，数据比较采用χ2检验及Fisher确切概率法分析，以P＜0．05为差异有统计学意义。

结 果

1．survivin在腮腺正常腺体组织及肿瘤中表达情况:survivin在腮腺正常组织中未见表达，在腮腺肿瘤中主要表达于细胞质中，部分表达于肿瘤细胞核中，不同腮腺肿瘤中survivin呈现差异性表达(表1，图1)。

表1 survivin总体表达情况

图1 腮腺正常腺体组织及肿瘤组织中survivin表达(Envision二步法染色，×200)

2．survivin在腮腺良性肿瘤及腮腺恶性肿瘤中表达的比较:64例腮腺良性肿瘤有15例阳性表达，阳性率为23．44%。118例腮腺恶性肿瘤中有76例呈现阳性表达，阳性率为64．41%，两者具有统计学差异(表2)。

表2 腮腺良性肿瘤及腮腺恶性肿瘤中survivin的表达

3．腮腺恶性肿瘤中survivin阳性表达与临床生物学特性的关系:χ2检验显示118例腮腺恶性肿瘤中，survivin的阳性表达肿瘤的生物学行为、临床分期及肿瘤直径有关:其中生物学行为高度恶性组肿瘤的survivin阳性表达率为77．2%(34/44)，低度恶性组肿瘤的survivin的阳性表达率为56．7%(42/74)，差异有统计学意义;临床分期Ⅰ、Ⅱ期肿瘤survivin阳性率为53．8%(42/78)，Ⅲ、Ⅳ期肿瘤 survivin阳性率为75%(30/40)，差异有统计学意义(P＜0．05);肿瘤直径≤2cm组阳性率为59．52%(28/52)，肿瘤直径＞2．0cm组阳性率为72．73%，差异有统计学意义。但survivin在肿瘤淋巴结转移、患者年龄、性别等之间的阳性率作比较，差异无统计学意义(P＞0．05，表3)。

表3 survivin的表达与临床生物学特性的关系

讨 论

腮腺肿瘤是一种口腔颌面外科较常见的唾液腺肿瘤，肿瘤的病理类型、组织学形态复杂。腮腺良性肿瘤中除腮腺多形性腺瘤具有复发倾向及反复发作后易引起恶变外，其余良性肿瘤一般规范手术切除后，肿瘤复发情况较少，患者愈后佳［3］。恶性肿瘤的疗效、近远期生存率因肿瘤的具体类型及生物学行为而差别较大。目前对于该肿瘤的基因或是生物学层面的了解还比较欠缺，对于恶性肿瘤的治疗也局限于手术加以术后的放疗、化疗等辅助治疗，病人的预后及远期生存率未有明显改善［4］。在分子病理学时代，结合肿瘤的相关分子对腮腺肿瘤尤其是恶性肿瘤进行临床病理研究，研究其肿瘤分子学改变，有可能为肿瘤的预后判断、开展分子靶向治疗及个体化治疗提供新思路。

survivin属凋亡抑制蛋白家族成员，是迄今发现分子质量最小、作用最强的凋亡抑制因子之一，从其被发现就引起了人们的广泛关注。最早由Ambrosini等［5］于1997年应用效应细胞蛋白酶受体-1(EPR-1)44cDNA在人类基因库的杂交筛选中分离得到的，它定位于染色体17q25上。研究表明，survivin不仅能直接通过抑制caspase-3和caspase-7的活性来达到抑制细胞凋亡，也能作用于细胞的有丝分裂周期，调控细胞分裂，促进细胞增殖，从而导致肿瘤细胞无限制增殖［6～8］。survivin的组织分布有特异性，仅表达于胚胎和发育期的胎儿组织，终末分化的成人组织(胸腺、生殖腺除外)不表达，而在大多数肿瘤组织中均有表达［9］。近年来的研究显示survivin在多种恶性肿瘤中呈现过表达，提示其与肿瘤的发生、发展相关，survivin过强的表达往往预示着肿瘤的不良预后［10～13］。

本研究通过对182例腮腺肿瘤及40例肿瘤周围正常腺体组织作免疫组化发现，survivin在正常腮腺组织中不表达，良性肿瘤中多形性腺瘤的阳性率为31．82%，其他腮腺良性肿瘤的表达阳性率为5%，两者表达率有统计学差异(P＜0．05)，笔者分析认为这与多形性腺瘤具有侵袭性生长的生物学特性密切相关。118例腮腺恶性肿瘤中 survivin的表达率为64．41%与腮腺良性肿瘤中 survivin的阳性率23．44%有显著差异(P＜0．05)。虽然 survivin在腮腺肿瘤中广泛表达，但不同组织学类型、不同生物学行为的肿瘤之间仍存明显差异，从正常腺体组织，到一般良性肿瘤到多形性腺瘤直至腮腺恶性肿瘤sur-vivin的表达依次增强，可以推测survivin与腮腺肿瘤的发生、发展有密切关系，对肿瘤的早期诊断具有潜在价值。由于survivin在腮腺正常组织中不表达，日后也可利用基因靶向治疗腮腺恶性肿瘤。

本研究同时对腮腺恶性肿瘤的survivin表达作了分析，发现survivin的阳性表达率与患者的年龄、性别及淋巴结转移无相关性，但与肿瘤的直径、TNM分期及肿瘤的恶性程度等显著相关。肿瘤的直径越大，临床分期越晚，肿瘤的恶性程度越高则survivin的表达阳性率越高，survivin的基因检测有利于对腮腺恶性肿瘤早诊断、早治疗。

综上所述，survivin在腮腺肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用，进一步明确其作用机制后可对腮腺肿瘤的诊断、基因靶向治疗及肿瘤预后评估提供新的选择。

1 马大权．腮腺肿瘤治疗探讨［J］．中华口腔医学杂志，2003，38(2):74-75

2 Nagliati M，Bolner A，Vanoni V，et al．Surgery and radiotherapy in the treatment of malignant parotid tumors:a retrospective multicenter study［J］．Tumori，2009，95(4):442-448

3 中华口腔医学会口腔颌面外科专业委员会涎腺疾病学组，中国抗癌协会头颈肿瘤外科专业委员会涎腺肿瘤协作组．涎腺肿瘤的诊断和治疗指南［J］．中华口腔医学杂志，2010，45(3):131-134

4 Chandana SR，Conley BA．Salivary gland cancers:current treatments，molecular characteristics and new therapies［J］．Expert Rev Anticancer Ther，2008，8(4):645-652

5 Ambrosini G，Adida C，Altieri DC．A novel anti-apoptosis gene，survivin，expressed in cancer and lymphoma［J］．Nat Med，1997，3(8):917-921

6 Li F．Survivin study:what is the next wave?［J］．J Cell Physiol，2003，197(1):8-29

7 Mita AC，Mita MM，Nawrocki ST，et al．Survivin:key regulator of mitosis and apoptosis and novel target for cancer therapeutics［J］．Clin Cancer Res，2008，14(16):5000-5005

8 Li F，Ambrosini G，Chu EY，et al．Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by survivin［J］．Nature，1998，396(6711):580-584

9 Duffy MJ，O'Donovan N，Brennan DJ，et al．Survivin:a promising tumor biomarker［J］．Cancer Lett，2007，249(1):49-60

10 Nikitakis NG，Scheper MA，Papanikolaou VS，et al．Immunohistochemical expression of the oncogenic molecules active Stat3 and survivin in benign and malignant salivary gland tumors［J］．Oral Surg O-ral Med Oral Pathel Oral Radiot Endod，2009，107(6):837-843

11 Yang Y，Zhu J，Gou H，et al．Clinical significance of Cox-2，Survivin and Bcl-2 expression in hepatocellular carcinoma(HCC)［J］．Med Oncol，2011，28(3):796-803

12 Branca M，Giorgi C，Santini D，et al．Survivin as a marker of cervical intraepithelial neoplasia and high-risk human papillomavirus and a predictor of virus clearance and prognosis in cervical cancer［J］．Am J Clin Pathol，2005，124(1):113-121

13 Nassar A，Lawson D，Cotsonis G，et al．Survivin and caspase-3 expression in breast cancer:correlation with prognostic parameters，proliferation，angiogenesis，and outcome［J］．Appl Immunohistochem Mol Morphol，2008，16(2):113-120