胰岛素受体、p53在合并2型糖尿病乳腺癌患者肿瘤组织中的表达及临床研究

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（江苏省徐州市中心医院乳腺科，江苏 徐州 221000）

胰岛素受体、p53在合并2型糖尿病乳腺癌患者肿瘤组织中的表达及临床研究

李昌文王伟刘军曹苏生*

（江苏省徐州市中心医院乳腺科，江苏 徐州 221000）

目的 探讨胰岛素受体、p53 肿瘤分子学指标在合并 2 型糖尿病乳腺癌患者肿瘤组织中的表达情况，并对其与 2 型糖尿病的关系及临床价值做出评判。方法 合并 2 型糖尿病乳腺癌患者 68 例，对照非糖尿病乳腺癌组患者 145 例，取石蜡切片作胰岛素受体，p53 指标的免疫组化检测。并分析比较两组指标的阳性率。结果 在合并 2 型糖尿病组中，胰岛素受体阳性比例 76.5%（52/68），阴性 23.5%（16/68），对照组胰岛素受体阳性比例 31.7%（46/145），阴性 68.3%（99/145），二者在统计学上有差别（χ2=37.3，P＜0.01）。在合并 2 型糖尿病组中，p53 阳性比例 66.2%（45/68），阴性 33.8%（23/68），对照组 p53 阳性比例 47.6%（69/145），阴性 52.4%（76 /145），二者在统计学上有差别（χ2=6.43，P＜0.05）。结论 在 2 型糖尿病合并乳腺癌患者肿瘤组织中胰岛素受体高表达，p53 突变，预示患者不良预后，因加强随访及治疗。

胰岛素受体；p53；2 型糖尿病；乳腺癌

越来越多的研究发现糖尿病患者发生乳腺癌的风险明显增高。随着糖尿病和乳腺癌发病率的逐年增加，同时患2型糖尿病和乳腺癌两种疾病的患者也越来越多。2型糖尿病（T2DM）和癌症有许多共同的危险因子。其中糖尿病和乳腺癌的发病率均明显上升，在发展中国家2型糖尿病在成人的发病率已超过9.7%，而有16%的乳腺癌患者合并糖尿病，部分流行病学研究结果显示：糖尿病可显著增加癌症病死率，有糖尿病和没有糖尿病的乳腺癌比较，5年病死率明显增多（风险比1.39）[1]。国外大量研究发现糖尿病是乳腺癌的高危因素之一，因此二者之间的关系越来越受到重视。本研究回顾分析徐州市中心医院2010年1月至2011年12月合并糖尿病的乳腺癌患者68例，总结这一亚群乳腺癌患者的临床特征，并用免疫组织化学方法检测癌肿组织中胰岛素受体（insulin receptor，IR）及p53的表达变化，探讨合并糖尿病乳腺癌患者与单纯乳腺癌患者肿瘤组织生物学差别，为临床个体化诊治提供依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取徐州市中心医院2010年1月至2012年12月合并糖尿病的乳腺癌患者68例，接受手术治疗的同时合并2型糖尿病的乳腺癌患者为研究对象，并以同期非糖尿病乳腺癌患者作为对照组，将其中满足有随访结果并且乳腺癌组织石蜡切片中仍能见到癌组织的石蜡切片做胰岛素受体、p53指标的免疫组化检测。

1.2 检测方法

①主要抗体试剂：采用Neomrkers公司单克隆鼠抗人胰岛素抗体，p53单克隆抗体购自丹麦DakoA/S公司，为鼠抗人单克隆抗体。②免疫组化方法及结果判定：采用Neomrkers公司单克隆鼠抗人胰岛素抗体，按SP法以磷酸盐缓冲液代替一抗为阴性对照，IR阳性肿瘤为内对照。IR主要定位于细胞膜，相应部位出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。为了兼顾染色强度（SI）和阳性细胞的百分比（PP），采用定性半定量法，即免疫反应数（IRS）表示其表达水平。具体方法：低倍镜下（×100）随机选择5个视野，高倍镜下（×400）计数，每个视野下计数≥100个细胞。评分标准IRS=SI×PP，SI：阴性为0，淡黄色为1，黄色为2，棕黄色为3；PP阳性＜5%为0，5%～25%为1，25%～50%为2，50%～75%为3，75%～100%为4。每例IRS为5个视野的平均值[2]。采用Dako公司的En Vision二步法染色系统，免疫组化染色方法按照说明书进行。p53以TBS缓冲液按1∶50和1∶20的比例稀释后滴加，40 ℃过夜，二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木素复染，中性树胶封片。p53分值：p53为胞核着棕色，由染色强度和染色百分比来决定分值。染色百分比为在高倍视野下以阳性细胞数0%、1%～25%、25%～75%、＞75%分别赋值为1、2、3、4。染色强度按照无染色、弱染色、中等染色、强染色分别赋值0、1、2、3。染色百分比和染色强度的乘积为最后评分，0～12分：0分为阴性，1～4分为（+），58分为（++），9～12分为（+ + +）。

1.3 统计学方法

应用SPSS12.0统计学软件。计数资料采用χ2检验，显著性水平P=0.05。

2 结 果

本组对68例2型糖尿病乳腺癌患者及145例对照组乳腺癌患者做胰岛素受体及p53 （抑癌基因）的免疫组化检测，并分析了其表达情况。分析结果显示：在合并2型糖尿病组中，胰岛素受体阳性比例76.5%（52 /68），阴性23.5%（16/68） ，对照组胰岛素受体阳性比例31.7% （46 /145），阴性68.3%（99/145），二者在统计学上有差别（χ2=37.3，P＜0.01）。在合并2型糖尿病组中，p53阳性比例66.2%（45 /68），阴性33.8%（23 /68），对照组P53阳性比例47.6%（69 /145），阴性52.4%（76 /145），二者在统计学上有差别（χ2=6.43，P＜0.05） 。

3 讨 论

胰岛素受体基因位于第19 号染色体短臂（19p13.2～13.3），长150 kb，包含22个外显子，它编码胰岛素受体酪氨酸激酶的单链前体，经过二聚体化和加工，变为胰岛素受体。IR有两种亚型：IR-A 和IR-B，二者皆由胰岛素受体转录蛋白选择性剪接而来。IR-A可与胰岛素和IGF-2 高亲和力结合，在肿瘤和胚胎形成过程中介导抗凋亡、促有丝分裂和细胞生长效应[3]。胰岛素、IR-A 结合后主要激活Ras/Erk通路，诱导细胞增殖存活相关基因的转录，从而介导细胞生长和增殖。也可磷酸化胰岛素受体底物1/2以及Shc蛋白，继而激活一系列调控细胞凋亡和存活的效应分子，包括BAD、Mdm2、FKHR、NFkB 以及JNK，同时还激活调控蛋白合成及细胞增殖的信号分子雷帕霉素靶蛋白的表达。胰岛素和IR-B 结合后主要激活PI3K/Akt 通路，作用于糖脂代谢效应分子（GLUT4、PDE3B、Foxa2、GSK3和AMPK等），介导细胞代谢[4]。研究发现，在有胰岛素抵抗的2型糖尿病患者中，IR-A/IR-B 较高自发性肥胖和糖尿病恒河猴的骨骼肌和肝脏中高表达IR-A。乳腺、结肠、肺等肿瘤中主要表达IR-A，乳腺癌标本中IR-A 占IR的40%～80%，正常乳腺标本中IR-A仅占IR的30%～50%[5]。与本研究结果一致。IR-A 的表达还与肿瘤的恶性程度相关，恶性程度越高，IR-A的表达越多[6]。这些发现或许能为人们在肿瘤的预防和治疗上提供一些新的思路：代谢紊乱疾病是肿瘤的危险因素，研发能阻滞IR-A和包含亚型A的杂合受体过度表达的药物应当成为未来肿瘤治疗的重大策略之一。

在多数肿瘤中，常常有p53突变，从而导致细胞分化异常、肿瘤凋亡受阻以及细胞恶性增殖。p53突变在肿瘤的发生、发展过程中十分重要，对于乳腺肿瘤，在我们的研究结果中同样证实了p53在乳腺癌中的阳性比率较高这一点（在2型糖尿病乳腺癌患者组中，p53阳性比率占69%；对照组占58%），且p53突变型肿瘤在伴发糖尿病的乳腺癌患者中更加常见（P＜0.05）。有研究提示p53基因突变主要与细胞增殖呈正相关，而不是以降低凋亡为主，这与文献[7]提示的p53与2型糖尿病的信号通路IGF、IGFBP存在交叉对话（Cross-Talk）有一致性，p53突变型肿瘤在伴发糖尿病的乳腺癌患者中更常见，具有临床病理指标价值，对指导临床治疗有一定意义。

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Expression and Clinical Study of IR and p53 in Tumor Tissue of Breast Cancer Patients with Type-2 Diabetes Mellitus

LI Chang-wen, WANG Wei, LIU Jun, CAO Su-sheng
(Department of Breast, Xuzhou Central Hospital, Xuzhou 221000, China)

Objective To investigate the expression of IR(insulin receptor)and p53 in the tumor of breast cancer patients with type 2 diabetes mellitus. Methods 68 breast cancer patients with type 2 diabetes mellitus who underwent surgery were analyzed retropectively. The expression of IR and p53 measured by immunohistochemistry(IHC)were compared to the 145 patients without type 2 diabetes mellitus. Results There was a statistically significant difference of IR and p53 expression between the patients with type 2 diabetes mellitus and the non-ones. Conclusion There were more patients with IR and p53 positive in type 2 diabetes mellitus group, which might indicate the pathogenisis of breast cancer. However, if they exerted aprognostic effect on breast cancer patients need further study.

IR; p53; Type-2 diabetes; Breast cancer

R737.9；R587.1

：B

：1671-8194（2014）30-0022-02

*通讯作者